【摘要】：目的研究過表達(dá)MORC2對人L02肝細(xì)胞脂肪變性程度的影響及可能機(jī)制。方法利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)在L02肝細(xì)胞中過表達(dá)MORC2,qRT-PCR及Western blot鑒定過表達(dá)效果后,對L02肝細(xì)胞進(jìn)行脂肪變性誘導(dǎo),測定細(xì)胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比較過表達(dá)前后L02肝細(xì)胞的脂肪蓄積程度;利用芯片技術(shù)對過表達(dá)MORC2前后的基因表達(dá)譜進(jìn)行檢測與Pathway分析,篩選過表達(dá)MORC2時發(fā)生變化的通路并選擇對脂代謝有調(diào)控作用的p53進(jìn)行研究;Western blot檢測在L02肝細(xì)胞脂肪變性誘導(dǎo)時過表達(dá)MORC2對p53蛋白含量的影響;在過表達(dá)MORC2的基礎(chǔ)上對L02肝細(xì)胞過表達(dá)p53,qRT-PCR及Western blot鑒定p53過表達(dá)效果后,通過TG測定觀察過表達(dá)p53對過表達(dá)MORC2改變的L02肝細(xì)胞脂肪蓄積程度產(chǎn)生的影響。結(jié)果 qRT-PCR及Western blot證明過表達(dá)MORC2成功;過表達(dá)MORC2的L02肝細(xì)胞在脂肪變性誘導(dǎo)后TG含量較MORC2正常表達(dá)的L02肝細(xì)胞明顯降低(P0.01);基因表達(dá)譜芯片及Pathway分析顯示脂代謝調(diào)控相關(guān)的p53通路在過表達(dá)MORC2后發(fā)生變化;Western blot顯示過表達(dá)MORC2后,L02肝細(xì)胞中p53蛋白水平在脂肪變性誘導(dǎo)前后均降低;qRT-PCR及Western blot驗(yàn)證p53過表達(dá)成功,且過表達(dá)p53可部分解除MORC2對L02肝細(xì)胞脂肪變性的緩解作用。結(jié)論過表達(dá)MORC2可通過下調(diào)p53從而緩解肝細(xì)胞脂肪變性。
【圖文】：

2．3基因表達(dá)譜芯片結(jié)果中MOＲC2可能影響的通路ＲocheNimbleGen12×135K人類基因表達(dá)譜芯片涵蓋了45033個來自包括NCBI在內(nèi)的權(quán)威數(shù)據(jù)庫的基因。與L02-ctrl組細(xì)胞相比，L02-MOＲC2組中發(fā)生變化的、表達(dá)差異大于2倍的基因共1736個。從根據(jù)它們進(jìn)行通路聚類后的Pathway分析結(jié)果來看，MOＲC2可能影響的通路包括Hippo、p53、TGF-β、MAPK及一些腫瘤相關(guān)通路(圖3)。圖3基因表達(dá)譜芯片結(jié)果中MOＲC2可能影響的通路2．4過表達(dá)MOＲC2對L02肝細(xì)胞中p53蛋白水平的影響Westernblot檢測結(jié)果顯示，，未經(jīng)脂肪變性誘導(dǎo)時，L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組細(xì)胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未誘導(dǎo)組［L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組(112．65±3.06)、L02-ctrl未誘導(dǎo)組(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪變性誘導(dǎo)后，p53蛋白含量均比未誘導(dǎo)時明顯上升，且L02-MOＲC2誘導(dǎo)組p53蛋白含量仍低于L02-ctrl誘導(dǎo)組［L02-MOＲC2誘導(dǎo)組(194．33±1.80)、L02-ctrl誘導(dǎo)組(234．69±2．64)，P＜0.01，圖4］。MOＲC2可下調(diào)L02肝細(xì)胞中p53的蛋白水平，進(jìn)一步提示MOＲC2減輕肝細(xì)胞脂肪變性的作用可能與降低p53表達(dá)有關(guān)，故我們擬通過上調(diào)p53表達(dá)，觀察是否能減弱MOＲC2的這種作用。1:L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組，2:L02-ctrl未誘導(dǎo)組，3:L02-MOＲC2誘導(dǎo)組，4:L02-ctrl誘導(dǎo)組圖4過表達(dá)MOＲC2對L02肝細(xì)胞中p53蛋白水平的影響2．5L02肝細(xì)胞過表達(dá)p53的效果鑒定qＲT-PCＲ檢測結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒pCMV-XL5-ctrl時，p53的mＲNA的相對表達(dá)量在L02-WT組、L02-ctrl組及L02-MOＲC2組中無明顯差別［L02-WT組(1．00±0．15)、L02-ctrl組(1．17±0．24)、L02-MOＲC2組(1．04±0．22)，P＞0.05］;在轉(zhuǎn)染p53過表達(dá)質(zhì)粒pCMV-XL5-p53時，各組MOＲC2在轉(zhuǎn)錄水平均較轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒時明顯上升［L02-WT組(1．00

APK及一些腫瘤相關(guān)通路(圖3)。圖3基因表達(dá)譜芯片結(jié)果中MOＲC2可能影響的通路2．4過表達(dá)MOＲC2對L02肝細(xì)胞中p53蛋白水平的影響Westernblot檢測結(jié)果顯示，未經(jīng)脂肪變性誘導(dǎo)時，L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組細(xì)胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未誘導(dǎo)組［L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組(112．65±3.06)、L02-ctrl未誘導(dǎo)組(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪變性誘導(dǎo)后，p53蛋白含量均比未誘導(dǎo)時明顯上升，且L02-MOＲC2誘導(dǎo)組p53蛋白含量仍低于L02-ctrl誘導(dǎo)組［L02-MOＲC2誘導(dǎo)組(194．33±1.80)、L02-ctrl誘導(dǎo)組(234．69±2．64)，P＜0.01，圖4］。MOＲC2可下調(diào)L02肝細(xì)胞中p53的蛋白水平，進(jìn)一步提示MOＲC2減輕肝細(xì)胞脂肪變性的作用可能與降低p53表達(dá)有關(guān)，故我們擬通過上調(diào)p53表達(dá)，觀察是否能減弱MOＲC2的這種作用。1:L02-MOＲC2未誘導(dǎo)組，2:L02-ctrl未誘導(dǎo)組，3:L02-MOＲC2誘導(dǎo)組，4:L02-ctrl誘導(dǎo)組圖4過表達(dá)MOＲC2對L02肝細(xì)胞中p53蛋白水平的影響2．5L02肝細(xì)胞過表達(dá)p53的效果鑒定qＲT-PCＲ檢測結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒pCMV-XL5-ctrl時，p53的mＲNA的相對表達(dá)量在L02-WT組、L02-ctrl組及L02-MOＲC2組中無明顯差別［L02-WT組(1．00±0．15)、L02-ctrl組(1．17±0．24)、L02-MOＲC2組(1．04±0．22)，P＞0.05］;在轉(zhuǎn)染p53過表達(dá)質(zhì)粒pCMV-XL5-p53時，各組MOＲC2在轉(zhuǎn)錄水平均較轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒時明顯上升［L02-WT組(1．00±0．15)、(5．57±0．42)，L02-ctrl組(1．07±0．24)、(5．47±0.53)，L02-MOＲC2組(0．96±0．22)、(5．19±0．39)，P＜0.01］。但各組間無明顯差別［L02-WT組(5．57±0．42)、L02-ctrl組(5．47±0．53)、L02-MOＲC2組(5．19±0.39)，P＞0.05］。Westernblot檢測結(jié)果顯示，可見轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒pCMV-XL5-ctrl的3組細(xì)胞中，L02-MOＲ
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所消化內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170382)~~
【分類號】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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4 黃sリ

本文編號：2544677