【摘要】：目的研究過表達MORC2對人L02肝細胞脂肪變性程度的影響及可能機制。方法利用慢病毒轉染技術在L02肝細胞中過表達MORC2,qRT-PCR及Western blot鑒定過表達效果后,對L02肝細胞進行脂肪變性誘導,測定細胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比較過表達前后L02肝細胞的脂肪蓄積程度;利用芯片技術對過表達MORC2前后的基因表達譜進行檢測與Pathway分析,篩選過表達MORC2時發(fā)生變化的通路并選擇對脂代謝有調控作用的p53進行研究;Western blot檢測在L02肝細胞脂肪變性誘導時過表達MORC2對p53蛋白含量的影響;在過表達MORC2的基礎上對L02肝細胞過表達p53,qRT-PCR及Western blot鑒定p53過表達效果后,通過TG測定觀察過表達p53對過表達MORC2改變的L02肝細胞脂肪蓄積程度產(chǎn)生的影響。結果 qRT-PCR及Western blot證明過表達MORC2成功;過表達MORC2的L02肝細胞在脂肪變性誘導后TG含量較MORC2正常表達的L02肝細胞明顯降低(P0.01);基因表達譜芯片及Pathway分析顯示脂代謝調控相關的p53通路在過表達MORC2后發(fā)生變化;Western blot顯示過表達MORC2后,L02肝細胞中p53蛋白水平在脂肪變性誘導前后均降低;qRT-PCR及Western blot驗證p53過表達成功,且過表達p53可部分解除MORC2對L02肝細胞脂肪變性的緩解作用。結論過表達MORC2可通過下調p53從而緩解肝細胞脂肪變性。
【圖文】：

2．3基因表達譜芯片結果中MOＲC2可能影響的通路ＲocheNimbleGen12×135K人類基因表達譜芯片涵蓋了45033個來自包括NCBI在內的權威數(shù)據(jù)庫的基因。與L02-ctrl組細胞相比，L02-MOＲC2組中發(fā)生變化的、表達差異大于2倍的基因共1736個。從根據(jù)它們進行通路聚類后的Pathway分析結果來看，MOＲC2可能影響的通路包括Hippo、p53、TGF-β、MAPK及一些腫瘤相關通路(圖3)。圖3基因表達譜芯片結果中MOＲC2可能影響的通路2．4過表達MOＲC2對L02肝細胞中p53蛋白水平的影響Westernblot檢測結果顯示，，未經(jīng)脂肪變性誘導時，L02-MOＲC2未誘導組細胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未誘導組［L02-MOＲC2未誘導組(112．65±3.06)、L02-ctrl未誘導組(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪變性誘導后，p53蛋白含量均比未誘導時明顯上升，且L02-MOＲC2誘導組p53蛋白含量仍低于L02-ctrl誘導組［L02-MOＲC2誘導組(194．33±1.80)、L02-ctrl誘導組(234．69±2．64)，P＜0.01，圖4］。MOＲC2可下調L02肝細胞中p53的蛋白水平，進一步提示MOＲC2減輕肝細胞脂肪變性的作用可能與降低p53表達有關，故我們擬通過上調p53表達，觀察是否能減弱MOＲC2的這種作用。1:L02-MOＲC2未誘導組，2:L02-ctrl未誘導組，3:L02-MOＲC2誘導組，4:L02-ctrl誘導組圖4過表達MOＲC2對L02肝細胞中p53蛋白水平的影響2．5L02肝細胞過表達p53的效果鑒定qＲT-PCＲ檢測結果顯示，在轉染對照質粒pCMV-XL5-ctrl時，p53的mＲNA的相對表達量在L02-WT組、L02-ctrl組及L02-MOＲC2組中無明顯差別［L02-WT組(1．00±0．15)、L02-ctrl組(1．17±0．24)、L02-MOＲC2組(1．04±0．22)，P＞0.05］;在轉染p53過表達質粒pCMV-XL5-p53時，各組MOＲC2在轉錄水平均較轉染對照質粒時明顯上升［L02-WT組(1．00

APK及一些腫瘤相關通路(圖3)。圖3基因表達譜芯片結果中MOＲC2可能影響的通路2．4過表達MOＲC2對L02肝細胞中p53蛋白水平的影響Westernblot檢測結果顯示，未經(jīng)脂肪變性誘導時，L02-MOＲC2未誘導組細胞中的p53蛋白含量低于L02-ctrl未誘導組［L02-MOＲC2未誘導組(112．65±3.06)、L02-ctrl未誘導組(134．19±4．43)，P＜0.01］;而在脂肪變性誘導后，p53蛋白含量均比未誘導時明顯上升，且L02-MOＲC2誘導組p53蛋白含量仍低于L02-ctrl誘導組［L02-MOＲC2誘導組(194．33±1.80)、L02-ctrl誘導組(234．69±2．64)，P＜0.01，圖4］。MOＲC2可下調L02肝細胞中p53的蛋白水平，進一步提示MOＲC2減輕肝細胞脂肪變性的作用可能與降低p53表達有關，故我們擬通過上調p53表達，觀察是否能減弱MOＲC2的這種作用。1:L02-MOＲC2未誘導組，2:L02-ctrl未誘導組，3:L02-MOＲC2誘導組，4:L02-ctrl誘導組圖4過表達MOＲC2對L02肝細胞中p53蛋白水平的影響2．5L02肝細胞過表達p53的效果鑒定qＲT-PCＲ檢測結果顯示，在轉染對照質粒pCMV-XL5-ctrl時，p53的mＲNA的相對表達量在L02-WT組、L02-ctrl組及L02-MOＲC2組中無明顯差別［L02-WT組(1．00±0．15)、L02-ctrl組(1．17±0．24)、L02-MOＲC2組(1．04±0．22)，P＞0.05］;在轉染p53過表達質粒pCMV-XL5-p53時，各組MOＲC2在轉錄水平均較轉染對照質粒時明顯上升［L02-WT組(1．00±0．15)、(5．57±0．42)，L02-ctrl組(1．07±0．24)、(5．47±0.53)，L02-MOＲC2組(0．96±0．22)、(5．19±0．39)，P＜0.01］。但各組間無明顯差別［L02-WT組(5．57±0．42)、L02-ctrl組(5．47±0．53)、L02-MOＲC2組(5．19±0.39)，P＞0.05］。Westernblot檢測結果顯示，可見轉染對照質粒pCMV-XL5-ctrl的3組細胞中，L02-MOＲ
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所消化內科;
【基金】：國家自然科學基金(81170382)~~
【分類號】：R575

【參考文獻】

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【共引文獻】

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4 黃sリ

本文編號：2544677