【摘要】：目的:探討抗CXC趨化因子配體1(CXCL1)中和抗體對葡聚糖硫酸鈉(dextra sulfate sodium,DSS)誘導的急性潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治療作用,并闡明其對結腸組織中細胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17,IL-10的表達及中性粒細胞浸潤的影響。方法:雌性BALB/c小鼠48只,隨機分為正常對照組(DSS-)、疾病組(DSS+saline)、抗CXCL1中和抗體治療組(DSS+anti-CXCL1 Ab)和治療對照組(DSS+IgG Ab),每組12只。正常對照組小鼠給予蒸餾水自由飲用,疾病組、治療組及治療對照組給予3.5%的DSS自由飲用,至第8天處理小鼠。其中治療組于造模第3天和第6天腹腔注射抗CXCL1中和抗體(4 mg/kg),治療對照組予以等量大鼠IgG抗體,正常對照組和疾病組注射等量生理鹽水。對各組小鼠進行疾病活動指數評分(disease activity index,DAI)及結直腸組織損傷學評分,并采用RT-PCR法檢測各組小鼠結腸組織中細胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17和IL-10的表達。運用免疫組織化學檢測各組小鼠結腸組織中中性粒細胞特異性標志物髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表達。結果:與正常對照組相比,疾病組小鼠DAI評分及結直腸組織損傷學評分明顯增高,但是予以抗CXCL1中和抗體干預治療后能明顯減低急性UC小鼠的DAI和結直腸組織損傷學評分。RT-PCR檢測結果顯示:與正常對照組相比,疾病組小鼠結直腸組織中促炎細胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表達水平均顯著升高,抑炎因子IL-10 m RNA表達下降。而使用抗CXCL1中和抗體干預治療,明顯抑制DSS誘導的小鼠結腸組織中促炎細胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表達水平的升高及抑炎因子IL-10 m RNA表達水平的下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組織化學結果顯示:疾病組小鼠結腸組織中中性粒細胞的浸潤明顯增加,予以抗CXCL1中和抗體治療能顯著減少結腸組織中中性粒細胞的浸潤,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:抗CXCL1中和抗體緩解了DSS誘導的急性UC的進展,其發(fā)揮抗炎作用的機制可能與抑制促炎因子的表達和中性粒細胞的浸潤有關。
【圖文】：

牢轡衷?分左右。與正常對照組相比，疾病組小鼠被毛粗糙，食欲下降，活動欠佳；小鼠糞便稀軟不成形，容易黏肛，第3天開始出現(xiàn)明顯的腹瀉及肉眼血便或黏液便，體重第4天開始逐日下降，DAI評顯著升高。與疾病組比較，抗CXCL1中和抗體治療組小鼠被毛順滑，食欲正常，活動較好，體重維持在22g，無明顯下降趨勢；小鼠糞便麥粒狀，偏軟；無肉眼血便或黏液便，DAI評分較疾病組顯著下降。說明抗CXCL1中和抗體緩解了DSS誘導的急性UC的臨床癥狀。將治療對照組與疾病組比較，DAI評分無明顯差異(P>0.05)。各組每天的DAI評分情況見圖1。2.2抗CXCL1中和抗體減輕DSS誘導的急性UC的腸道炎癥反應經過對小鼠腸道組織進行切片、包埋及HE染色后光鏡下行病理學觀察發(fā)現(xiàn)：正常對照組小鼠(圖2A)腸道黏膜完整，未見明顯充血水腫，無炎癥細胞的浸潤。疾病組(圖2B)及治療對照組(圖2D)結腸黏膜上皮細胞和腺體破壞，大量炎癥細胞浸潤，腸黏膜明顯充血水腫伴，腸上皮細胞損傷脫落形成潰瘍，隱窩結構破壞�？笴XCL1中和抗體治療組(圖2C)腺體排列較為規(guī)則，腸道各層較完整，有少量炎癥細胞浸潤。對各組小鼠腸黏膜組織損傷學評分進行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，抗CXCL1中和抗體治療組腸道黏膜組織損傷學評分相比疾病組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。腸黏膜組織損傷學評分見圖3。表2IL-2，IFN-γ，IL-17和IL-10及內參基因GAPDH的引物序列Table2PrimersequencesofIL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10andGAPDH基因序列PCR產物長度/bpTNF-α5'-GAGAAGTTCCCAAATGGC-3'2133'-GCATCGTTTGGTGGTTCA-5'INF-γ5'-GCCGCGTCTTGGTTTTGCAG-3'1753'-TACCGTCCTTTTGCCAGTTCCTCCA-5'IL-105'-TCCCAGTCAGCCAGACCCACA-3'2893'-AATCGATGACAGCGTCGCAGC-5'IL-175'-CAGACTACCTCAACCGTTCCA-3'2513'-C

抗CXCL1中和抗體在急性潰瘍性結腸炎小鼠模型中的治療作用羅玲瓏，等1379圖2各組小鼠腸黏膜HE染色(×100)Figure2HEstainningofcolonmucosaofmiceineachgroup(×100)A:DSS-group;B:DSS+salinegroup;C:DSS+anti-CXCL1Abgroup;D:DSS+IgGAbgroup20μm20μmACBD圖3各組小鼠組織損傷學評分Figure3Histologicaldamagescaleofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-CXCL1AbDSS+lgGAbDSS+salineDSS 86420Tisseudamagescroe**圖4各組小鼠結直腸組織TNF-α，IFN-γ，IL-10，IL-17的mRNA的表達Figure4mRNAexpressionofTNF-α,IFN-γ,IL-10andIL-17incolorectaltissuesofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-ControlAbDSS+anti-CXCL1AbDSS+salineDSS TNF-αTNF-γIL-10IL-17543210RelatvieelvelfoRmAN********2.3抗CXCL1中和抗體抑制小鼠結腸組織促炎因子的表達并促進抑炎因子的表達利用RT-PCR檢測各組小鼠結腸組織中TNF-α，IFN-γ，IL-17和IL-10的表達，結果發(fā)現(xiàn)與正常組比較，疾病組小鼠結腸組織中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17含量均明顯增加，抑炎因子IL-10含量降低(P<0.05)。而與疾病組比較，抗CXCL1中和抗體治療組結腸組織中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17均明顯下降，，抑炎因子IL-10的表達升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05，圖4)。20μm20μm
【作者單位】： 中南大學湘雅三醫(yī)院消化內科;中南大學湘雅三醫(yī)院湖南省非可控性炎癥與腫瘤重點實驗室;中南大學腫瘤研究所;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81472286) 湖南省自然科學基金(11JJ4017)~~
【分類號】：R-332;R574.62

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本文編號：2540470