【摘要】：目的探討急性肝組織損傷跨膜型腫瘤壞死因子α(tmTNF-α)表達變化及其與肝組織損傷的關(guān)系。方法用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-gal)建立鼠急性肝損傷模型,采用免疫組化檢測肝組織tmTNF-α的表達,HE染色檢測肝組織損傷;采用蛋白酶法分離肝臟庫普弗細胞(KCs),以CD11b和F4/80為標志,采用流式細胞術(shù)鑒定KCs,同時檢測LPS/D-gal處理后不同時間KCs tmTNF-α表達水平。結(jié)果 LPS/D-gal處理后6h,肝組織tmTNF-α表達顯著增加,tmTNF-α主要來源于KCs;tmTNF-α表達與肝組織損傷是一致的。結(jié)論tmTNF-α表達與嚴重肝組織損傷密切相關(guān)。
【圖文】：

Student'st檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2．1LPS/D－gal誘導急性肝損傷組織病理變化LPS/D－gal腹腔注射后0和4h，肝臟肉眼觀和肝組織病理無明顯變化;而在處理后6h時，肝細胞索斷裂，肝臟大面積充血，見圖1、2。2．2急性肝損傷肝組織tmTNF－α表達變化LPS/D－gal處理后0和4h，肝組織tmTNF－α表達水平相當，而在處理后6h，肝組織tmTNF－α表達顯著增加，見圖3。圖1肝臟肉眼觀圖2肝組織病理變化(HE，×200)箭頭所指為tmTNF－α圖3肝組織tmTNF－α表達變化(免疫組化，×400)2．3KCs分離及純度鑒定KCs是TNF－α產(chǎn)生的主要細胞，為了深入分析肝組織tmTNF－α表達是否來自于KCs，本研究采用胰蛋白酶法分離KCs，以CD11b和F4/80為標志，，采用流式細胞術(shù)鑒定KCs的純度。結(jié)果顯示，CD11b+F4/80+雙陽性細胞為82.6%，見圖4。A:散點圖;B:KCs純度圖4KCs分離及純度鑒定2．4肝臟KCstmTNF－α表達變化采用流式細胞術(shù)檢測分離的KCstmTNF－α表達水平。結(jié)果提示，在LPS/D－gal處理后6h分離的KCstmTNF－α表達高達81.6%，而在LPS/D－gal處理后0和4h無tmTNF－α表達，見圖5。3討論病毒感染或各種外來物質(zhì)侵入肝臟，誘發(fā)肝臟代謝紊亂和有害的免疫應答，導致大量的肝細胞凋亡或壞死［5］。TNF－α在急性肝損傷中扮演著重要作用。大量循證醫(yī)學數(shù)據(jù)顯示，急性暴發(fā)性肝炎患者的致死率與血清高含量sTNF－α密切相關(guān)［2］。在化學藥物或毒性物質(zhì)誘導的急性肝損傷鼠模型中，血清sTNF－α顯著增加［3］;TNFＲ1或TNFＲ2缺陷鼠可抵抗LPS/D－gal誘導的肝損害［4］，用抗TNF－α中和抗體可以保護肝臟免受損害［6］;用抗TNF－α中和抗體可以完全抑制LPS誘導肝細胞凋亡［7］。這些·1000·廣東醫(yī)學2017

Student'st檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2．1LPS/D－gal誘導急性肝損傷組織病理變化LPS/D－gal腹腔注射后0和4h，肝臟肉眼觀和肝組織病理無明顯變化;而在處理后6h時，肝細胞索斷裂，肝臟大面積充血，見圖1、2。2．2急性肝損傷肝組織tmTNF－α表達變化LPS/D－gal處理后0和4h，肝組織tmTNF－α表達水平相當，而在處理后6h，肝組織tmTNF－α表達顯著增加，見圖3。圖1肝臟肉眼觀圖2肝組織病理變化(HE，×200)箭頭所指為tmTNF－α圖3肝組織tmTNF－α表達變化(免疫組化，×400)2．3KCs分離及純度鑒定KCs是TNF－α產(chǎn)生的主要細胞，為了深入分析肝組織tmTNF－α表達是否來自于KCs，本研究采用胰蛋白酶法分離KCs，以CD11b和F4/80為標志，采用流式細胞術(shù)鑒定KCs的純度。結(jié)果顯示，CD11b+F4/80+雙陽性細胞為82.6%，見圖4。A:散點圖;B:KCs純度圖4KCs分離及純度鑒定2．4肝臟KCstmTNF－α表達變化采用流式細胞術(shù)檢測分離的KCstmTNF－α表達水平。結(jié)果提示，在LPS/D－gal處理后6h分離的KCstmTNF－α表達高達81.6%，而在LPS/D－gal處理后0和4h無tmTNF－α表達，見圖5。3討論病毒感染或各種外來物質(zhì)侵入肝臟，誘發(fā)肝臟代謝紊亂和有害的免疫應答，導致大量的肝細胞凋亡或壞死［5］。TNF－α在急性肝損傷中扮演著重要作用。大量循證醫(yī)學數(shù)據(jù)顯示，急性暴發(fā)性肝炎患者的致死率與血清高含量sTNF－α密切相關(guān)［2］。在化學藥物或毒性物質(zhì)誘導的急性肝損傷鼠模型中，血清sTNF－α顯著增加［3］;TNFＲ1或TNFＲ2缺陷鼠可抵抗LPS/D－gal誘導的肝損害［4］，用抗TNF－α中和抗體可以保護肝臟免受損害［6］;用抗TNF－α中和抗體可以完全抑制LPS誘導肝細胞凋亡［7］。這些·1000·廣東醫(yī)學2017
【作者單位】： 貴州省骨科醫(yī)院消化內(nèi)科;貴州省骨科醫(yī)院檢驗科;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(編號:81471899)
【分類號】：R575


本文編號：2517648