【摘要】：目的探討急性肝組織損傷跨膜型腫瘤壞死因子α(tmTNF-α)表達(dá)變化及其與肝組織損傷的關(guān)系。方法用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-gal)建立鼠急性肝損傷模型,采用免疫組化檢測(cè)肝組織tmTNF-α的表達(dá),HE染色檢測(cè)肝組織損傷;采用蛋白酶法分離肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞(KCs),以CD11b和F4/80為標(biāo)志,采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定KCs,同時(shí)檢測(cè)LPS/D-gal處理后不同時(shí)間KCs tmTNF-α表達(dá)水平。結(jié)果 LPS/D-gal處理后6h,肝組織tmTNF-α表達(dá)顯著增加,tmTNF-α主要來(lái)源于KCs;tmTNF-α表達(dá)與肝組織損傷是一致的。結(jié)論tmTNF-α表達(dá)與嚴(yán)重肝組織損傷密切相關(guān)。
【圖文】：

Student'st檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1LPS/D－gal誘導(dǎo)急性肝損傷組織病理變化LPS/D－gal腹腔注射后0和4h，肝臟肉眼觀和肝組織病理無(wú)明顯變化;而在處理后6h時(shí)，肝細(xì)胞索斷裂，肝臟大面積充血，見圖1、2。2．2急性肝損傷肝組織tmTNF－α表達(dá)變化LPS/D－gal處理后0和4h，肝組織tmTNF－α表達(dá)水平相當(dāng)，而在處理后6h，肝組織tmTNF－α表達(dá)顯著增加，見圖3。圖1肝臟肉眼觀圖2肝組織病理變化(HE，×200)箭頭所指為tmTNF－α圖3肝組織tmTNF－α表達(dá)變化(免疫組化，×400)2．3KCs分離及純度鑒定KCs是TNF－α產(chǎn)生的主要細(xì)胞，為了深入分析肝組織tmTNF－α表達(dá)是否來(lái)自于KCs，本研究采用胰蛋白酶法分離KCs，以CD11b和F4/80為標(biāo)志，，采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定KCs的純度。結(jié)果顯示，CD11b+F4/80+雙陽(yáng)性細(xì)胞為82.6%，見圖4。A:散點(diǎn)圖;B:KCs純度圖4KCs分離及純度鑒定2．4肝臟KCstmTNF－α表達(dá)變化采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分離的KCstmTNF－α表達(dá)水平。結(jié)果提示，在LPS/D－gal處理后6h分離的KCstmTNF－α表達(dá)高達(dá)81.6%，而在LPS/D－gal處理后0和4h無(wú)tmTNF－α表達(dá)，見圖5。3討論病毒感染或各種外來(lái)物質(zhì)侵入肝臟，誘發(fā)肝臟代謝紊亂和有害的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致大量的肝細(xì)胞凋亡或壞死［5］。TNF－α在急性肝損傷中扮演著重要作用。大量循證醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)顯示，急性暴發(fā)性肝炎患者的致死率與血清高含量sTNF－α密切相關(guān)［2］。在化學(xué)藥物或毒性物質(zhì)誘導(dǎo)的急性肝損傷鼠模型中，血清sTNF－α顯著增加［3］;TNFＲ1或TNFＲ2缺陷鼠可抵抗LPS/D－gal誘導(dǎo)的肝損害［4］，用抗TNF－α中和抗體可以保護(hù)肝臟免受損害［6］;用抗TNF－α中和抗體可以完全抑制LPS誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡［7］。這些·1000·廣東醫(yī)學(xué)2017

Student'st檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1LPS/D－gal誘導(dǎo)急性肝損傷組織病理變化LPS/D－gal腹腔注射后0和4h，肝臟肉眼觀和肝組織病理無(wú)明顯變化;而在處理后6h時(shí)，肝細(xì)胞索斷裂，肝臟大面積充血，見圖1、2。2．2急性肝損傷肝組織tmTNF－α表達(dá)變化LPS/D－gal處理后0和4h，肝組織tmTNF－α表達(dá)水平相當(dāng)，而在處理后6h，肝組織tmTNF－α表達(dá)顯著增加，見圖3。圖1肝臟肉眼觀圖2肝組織病理變化(HE，×200)箭頭所指為tmTNF－α圖3肝組織tmTNF－α表達(dá)變化(免疫組化，×400)2．3KCs分離及純度鑒定KCs是TNF－α產(chǎn)生的主要細(xì)胞，為了深入分析肝組織tmTNF－α表達(dá)是否來(lái)自于KCs，本研究采用胰蛋白酶法分離KCs，以CD11b和F4/80為標(biāo)志，采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定KCs的純度。結(jié)果顯示，CD11b+F4/80+雙陽(yáng)性細(xì)胞為82.6%，見圖4。A:散點(diǎn)圖;B:KCs純度圖4KCs分離及純度鑒定2．4肝臟KCstmTNF－α表達(dá)變化采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分離的KCstmTNF－α表達(dá)水平。結(jié)果提示，在LPS/D－gal處理后6h分離的KCstmTNF－α表達(dá)高達(dá)81.6%，而在LPS/D－gal處理后0和4h無(wú)tmTNF－α表達(dá)，見圖5。3討論病毒感染或各種外來(lái)物質(zhì)侵入肝臟，誘發(fā)肝臟代謝紊亂和有害的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致大量的肝細(xì)胞凋亡或壞死［5］。TNF－α在急性肝損傷中扮演著重要作用。大量循證醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)顯示，急性暴發(fā)性肝炎患者的致死率與血清高含量sTNF－α密切相關(guān)［2］。在化學(xué)藥物或毒性物質(zhì)誘導(dǎo)的急性肝損傷鼠模型中，血清sTNF－α顯著增加［3］;TNFＲ1或TNFＲ2缺陷鼠可抵抗LPS/D－gal誘導(dǎo)的肝損害［4］，用抗TNF－α中和抗體可以保護(hù)肝臟免受損害［6］;用抗TNF－α中和抗體可以完全抑制LPS誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡［7］。這些·1000·廣東醫(yī)學(xué)2017
【作者單位】： 貴州省骨科醫(yī)院消化內(nèi)科;貴州省骨科醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號(hào):81471899)
【分類號(hào)】：R575


本文編號(hào)：2517648