【摘要】：炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一種病因尚不明確的反復(fù)發(fā)作的腸道非特異性炎癥性疾病,具有難治性及終身復(fù)發(fā)傾向,包括克羅恩病(Crohn's disease,CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC),近年來在全球范圍內(nèi)其發(fā)病率穩(wěn)步增長;在亞洲則呈迅速上升趨勢。IBD的具體發(fā)病機制尚不明確,已明確的是腸道黏膜的免疫功能紊亂在IBD的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用,尋找新型的免疫調(diào)節(jié)藥物一直是臨床防治IBD的重點。芒柄花素(Formononetin,For)是一種植物異黃酮類化合物,也是一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑,既往研究提示芒柄花素具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗炎、抗氧化、促凋亡、抗腫瘤活性等作用,其是否對小鼠急性結(jié)腸炎具有保護作用,尚無報道。本研究旨在明確For對葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的保護作用,并闡述相關(guān)機制。研究內(nèi)容分為兩部分:1.芒柄花素對DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的保護作用目的:觀察芒柄花素對DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的保護作用。方法:1)2.5%DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎,采用不同劑量For(25g/kg、50g/kg、100g/kg)作用小鼠,觀察小鼠體重、DAI評分、病理損傷、結(jié)腸組織炎癥因子水平及結(jié)腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin的蛋白表達(dá)等。2)使用TNF-a孵育HCT116細(xì)胞建立體外腸黏膜上皮細(xì)胞損傷模型,同時給予不同劑量For(25M、50M)干預(yù)。觀察細(xì)胞炎癥因子水平、緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin蛋白表達(dá)等。結(jié)果:(1)2.5%DSS喂飼小鼠后可觀察到小鼠體重下降、便血及稀水便,并導(dǎo)致結(jié)腸損傷。For呈劑量依賴性保護DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。For可減少小鼠結(jié)腸炎臨床癥狀、結(jié)腸黏膜損傷、炎癥細(xì)胞浸潤,并下調(diào)了結(jié)腸組織炎癥因子(TNF-α、IL-1β)水平,上調(diào)了結(jié)腸黏膜緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin蛋白表達(dá)等。(2)TNF-α可誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞炎性損傷。而For呈劑量依賴性保護TNF-α誘導(dǎo)的體外結(jié)腸上皮細(xì)胞損傷。For可下調(diào)細(xì)胞IL-6、IL-1β表達(dá),并上調(diào)細(xì)胞緊密連接蛋白(ZO-1、claudin-1、occludin 蛋白表達(dá)等。結(jié)論:For可保護DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。2.芒柄花素保護DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎的分子機制目的:明確芒柄花素保護DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的分子機制。方法:1)2.5%DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎,采用不同劑量For(25g/kg、50g/kg、100g/kg)作用小鼠,觀察小鼠腸道黏膜上皮細(xì)胞NLRP3通路NLRP3、ASC、IL-1β蛋白表達(dá)。2)使用TNF-a孵育HCT116細(xì)胞建立體外腸黏膜上皮細(xì)胞損傷模型,同時給予不同劑量For(25M、50M)干預(yù)。觀察細(xì)胞NLRP3、ASC、IL-1βmRNA及蛋白表達(dá)等。3)最后應(yīng)用NLRP3特異性抑制劑MCC950明確For保護小鼠急性結(jié)腸炎的機制。使用MCC950和/或For(100mg/kg)作用于DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎模型,分為DSS組,MCC950 組(50mg/kg)、MCC950+For 組(100mg/kgFor+50mg/kgMCC950),觀察小鼠體重、DAI評分、病理損傷等。結(jié)果:1)體內(nèi)實驗中For呈劑量依賴性下調(diào)結(jié)腸組織NLRP3、ASC、IL-1β蛋白表達(dá);2)體外實驗中For可下調(diào)細(xì)胞NLRP3、ASC、IL-1βmRNA及蛋白表達(dá);3)以DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠為動物模型,NLRP3特異性抑制劑MCC950可減輕小鼠急性結(jié)腸炎。但在應(yīng)用MCC950基礎(chǔ)上(MCC950組),未觀察到100mg/kg For(MCC950+For組)對小鼠急性結(jié)腸炎的保護作用。小鼠體重下降、臨床癥狀及結(jié)腸損傷均無顯著變化。結(jié)論:For通過負(fù)向調(diào)節(jié)NLRP3炎癥小體保護了 DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。
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【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62

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本文編號：2437498