【摘要】：背景:前期研究證明正常大鼠肝組織勻漿上清液可誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為具有部分肝細(xì)胞功能的肝樣細(xì)胞,而肝纖維化大鼠肝組織勻漿上清液的誘導(dǎo)可行性及與前者誘導(dǎo)效果的比較尚不明確。目的:比較正常肝組織及纖維化肝組織微環(huán)境誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理鹽水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制備SD大鼠肝纖維化模型,取肝纖維化大鼠及正常大鼠肝臟制備肝組織勻漿上清。將第3代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分組誘導(dǎo)培養(yǎng):1標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組:加入含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基。2纖維化肝組織勻漿組:加入含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清及50 g/L纖維化肝組織勻漿的DMEM/F12培養(yǎng)基。3正常肝組織勻漿組:加入含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清及100 g/L正常肝組織勻漿的DMEM/F12培養(yǎng)基。誘導(dǎo)開(kāi)始后于倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組及誘導(dǎo)7 d的勻漿組細(xì)胞采用Western Blot法檢測(cè)CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表達(dá)情況,采用ELISA法測(cè)定各組細(xì)胞培養(yǎng)液中白蛋白水平。結(jié)果與結(jié)論:與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組長(zhǎng)梭形成纖維樣細(xì)胞相比,誘導(dǎo)7 d時(shí),肝纖維化勻漿組及正常勻漿組細(xì)胞形態(tài)變化明顯,呈類(lèi)圓形,胞體豐滿。與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組相比,兩勻漿組細(xì)胞均可表達(dá)肝細(xì)胞標(biāo)志物CK18和AFP。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組細(xì)胞可表達(dá)少量CYP2E1,兩勻漿組細(xì)胞表達(dá)CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝細(xì)胞功能蛋白,且CYP2E1的表達(dá)量較標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組明顯增加(P0.01),而兩勻漿組間上述蛋白的相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。同時(shí),兩勻漿組細(xì)胞分泌白蛋白的能力較標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組亦明顯增強(qiáng)(P0.01),兩勻漿組相比差異無(wú)顯著性意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常肝組織和纖維化肝組織微環(huán)境均可誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化,在達(dá)到相同誘導(dǎo)效果時(shí),纖維化肝組織所需組織液濃度更低,提示纖維化肝組織微環(huán)境可能更有利于人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化。
[Abstract]:Background: previous studies have demonstrated that the supernatant of normal rat liver tissue homogenate can induce human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatoid cells with partial hepatocyte function. However, the feasibility of inducing liver tissue homogenate supernatant and the effect of the former were not clear. Aim: to compare the ability of human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocytes induced by microenvironment in normal and fibrotic liver tissues. Methods: the hepatic fibrosis model of SD rats was established by intraperitoneal injection of 3% thioacetamide saline solution (200 mg/kg,2 / week for 4 weeks). Liver tissue homogenate supernatants were obtained from the liver of rats with hepatic fibrosis and normal rats. The third generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were divided into two groups: (1) Standard control group: DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum by volume fraction. 10% fetal bovine serum and 50 g / L fibrotic liver tissue homogenate DMEM/F12 medium. 3 normal liver tissue homogenate group: DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum and 100g / L normal liver homogenate was added. The morphological changes of each group were observed under inverted microscope after induction. The expression of CK18,AFP,CYP3A4,CYP2E1,CYP2D6,TPH2 in normal control group and homogenate group for 7 days was detected by Western Blot method and albumin level in culture medium of each group was measured by ELISA method. Results and conclusion: compared with the standard control group, the cells in the liver fibrosis homogenate group and the normal homogenate group changed obviously at 7 days after induction. Compared with the standard control group, both homogenate cells could express CK18 and AFP.. In the standard control group, a small amount of CYP2E1, homogenate cells expressed CYP3A4,CYP2E1,CYP2D6,TPH2 and other hepatocyte functional proteins, and the expression of CYP2E1 was significantly higher than that of the standard control group (P0.01). There was no significant difference in the relative expression of these proteins between the two homogenate groups (P0.05). At the same time, the ability of the two homogenate groups to secrete albumin was also significantly increased compared with the standard control group (P0.01), there was no significant difference between the two homogenate groups (P0.05). The results showed that both normal liver tissue and fibrotic liver tissue microenvironment could induce human umbilical cord mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocytes. These results suggest that the microenvironment of fibrotic liver tissue may be more favorable to the differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into hepatocytes.
【作者單位】： 解放軍醫(yī)學(xué)院;解放軍白求恩國(guó)際和平醫(yī)院藥劑科;
【基金】：軍隊(duì)“十二五”重點(diǎn)課題(BWS11J002),課題名稱(chēng):成體間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)戰(zhàn)創(chuàng)傷重要器官功能損害的前沿技術(shù)研究~~
【分類(lèi)號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2346980