【摘要】：目的研究ZCWCC1蛋白在人L02肝細(xì)胞脂肪變性中的表達(dá)變化并探討其機(jī)制。方法培養(yǎng)中加用500μmol/L的油酸處理L02肝細(xì)胞,建立肝細(xì)胞脂肪變性體外模型,采用油紅染色評價脂質(zhì)蓄積程度,采用免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡觀察ZCWCC1蛋白在L02肝細(xì)胞脂肪變性時的表達(dá)改變,以Western blot對其進(jìn)行半定量評價,并使用賴氨酸蛋白酶抑制劑N-乙基馬來酰亞胺(N-Ethylmaleimide,NEM)及蛋白酶體抑制劑MG132對ZCWCC1蛋白表達(dá)變化的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步探討。結(jié)果油紅染色及細(xì)胞甘油三酯含量測定證明L02肝細(xì)胞脂肪變性體外模型成功建立,激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)ZCWCC1蛋白主要定位在胞核內(nèi),其熒光信號隨油酸誘導(dǎo)時間延長而減弱,Western blot檢測結(jié)果顯示,ZCWCC1表達(dá)水平也隨油酸誘導(dǎo)時間延長(0、3、6、12、24、48 h)而降低[(56 283±303)、(56 753±539)、(55 561±996)、(56 257±326)、(48 339±712)、(43 022±2 198),P0.01]。NEM處理可使ZCWCC1降解增加,MG132處理可逆轉(zhuǎn)ZCWCC1在L02肝細(xì)胞脂肪變性中的下降趨勢。結(jié)論 ZCWCC1蛋白在L02肝細(xì)胞的脂肪變性過程中表達(dá)下降,可能與泛素-蛋白酶體途徑有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the expression and mechanism of ZCWCC1 protein in human L02 hepatocyte fatty degeneration. Methods L02 hepatocytes were treated with 500 渭 mol/L oleic acid in vitro. The fatty degeneration model of hepatocytes was established in vitro. The degree of lipid accumulation was evaluated by oil red staining. Immunofluorescence and laser confocal microscopy were used to observe the expression of ZCWCC1 protein in L02 hepatocytes during steatosis. Western blot was used to evaluate the expression of ZCWCC1 protein. N-ethylmaleimide (N-ethylmaleimide), a lysine protease inhibitor, was used to evaluate the expression of N-ethylmaleimide (N-ethylmaleimide). NEM) and proteasome inhibitor MG132 to investigate the mechanism of ZCWCC1 protein expression. Results the oil red staining and the determination of triglyceride content showed that L02 hepatocyte fatty degeneration model was successfully established in vitro. Laser confocal microscopy showed that ZCWCC1 protein was mainly located in the nucleus. The results of, Western blot analysis showed that the level of ZCWCC1 expression decreased with the prolongation of oleic acid induction time (0 ~ 3 ~ (3), () [(56 283 鹵303), (56 753 鹵539), (55 561 鹵996), (56 257 鹵326), (48 339 鹵712]. (43 022 鹵2 198), P0.01]. NEM treatment could increase ZCWCC1 degradation, MG132 treatment could reverse the decreasing trend of ZCWCC1 in L02 hepatocyte steatosis. Conclusion the decrease of ZCWCC1 protein expression in L02 hepatocytes may be related to the ubiquitin proteasome pathway.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所消化內(nèi)科;解放軍75210部隊醫(yī)院外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170382)~~
【分類號】：R575.5

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本文編號：2342131