【摘要】：炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一種全球廣泛分布的胃腸道炎癥性疾病,目前認(rèn)為IBD的發(fā)生是與遺傳、環(huán)境以及患者自身的免疫系統(tǒng)有關(guān),由于其發(fā)病機(jī)理較為復(fù)雜,目前尚未有根治的方法。加上IBD病人會出現(xiàn)一些并發(fā)癥,嚴(yán)重影響著患者的身體健康。因此,闡明IBD的發(fā)生機(jī)制,對找到治療IBD有效途徑具有重要的意義。G蛋白偶聯(lián)受體(G Protein-Coupled Receptors,GPCRs)是目前發(fā)現(xiàn)的家族成員最多的跨膜受體,GPCRs在人體中極為重要,它對多種疾病的發(fā)生具有重要的影響,因此,可以作為一些重要疾病的藥物靶點(diǎn)。GPR97是粘附性G蛋白偶聯(lián)受體,它高表達(dá)于各種組織、器官以及細(xì)胞中。已有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)小鼠GPR97基因缺失后,能夠活化NF-κB信號通路。而NF-κB信號通路的激活與多種炎癥因子的表達(dá)有關(guān),尤其是在IBD的發(fā)生中發(fā)揮重要的作用。我們前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,誘導(dǎo)小鼠實(shí)驗(yàn)性IBD,檢測發(fā)現(xiàn)小鼠腸上皮細(xì)胞中GPR97基因發(fā)現(xiàn)表達(dá)有所下調(diào),說明GPR97對IBD的發(fā)生具有一定的相關(guān)性。為了進(jìn)一步研究GPR97基因與IBD發(fā)生的關(guān)系,我們用DSS誘導(dǎo)野生型(WT)與GPR97基因缺失(GPR97KO)小鼠IBD模型,每天觀察小鼠的體重變化、便血以及糞便隱血情況,對小鼠進(jìn)行臨床評分。在誘導(dǎo)第7天,處死小鼠,對小鼠組織以及器官進(jìn)行相關(guān)免疫指標(biāo)檢測以及病理組織切片分析,來判定GPR97對小鼠實(shí)驗(yàn)性IBD的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),GPR97基因缺失小鼠表現(xiàn)出更加嚴(yán)重的IBD癥狀,如脾腫大,結(jié)腸變短、變粗,腸粘膜炎癥因子浸潤等更加明顯。小鼠脾細(xì)胞、結(jié)腸組織以及外周血中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌顯著高于野生型小鼠,說明GPR97對小鼠實(shí)驗(yàn)性IBD的發(fā)生具有保護(hù)作用。為了探究GPR97缺失使小鼠IBD加重的原因,我們構(gòu)建了 WT→WT組和GPR97KO→WT組骨髓嵌合體小鼠后,誘導(dǎo)小鼠IBD模型,同樣的檢測方法,發(fā)現(xiàn)兩組小鼠表現(xiàn)出的IBD癥狀并無顯著差異,表明GPR97基因缺失對IBD的影響不是由造血細(xì)胞引起的。接著,我們檢測了IBD小鼠腸壁通透性,發(fā)現(xiàn)GPR97基因缺失并沒有引起IBD小鼠的腸壁破壞。結(jié)果表明GPR97基因缺失引起的小鼠IBD的加重,并非是通過改變腸上皮細(xì)胞的通透性引起的。為了進(jìn)一步探究其機(jī)制,我們分離的WT與GPR97KO小鼠的腸上皮細(xì)胞檢測其NF-kB信號通絡(luò),發(fā)現(xiàn)GPR97缺失小鼠的腸上皮細(xì)胞中NF-κB P65的磷酸化水平明顯上調(diào)。因此,我們推測GPR97基因缺失引起的小鼠IBD加重可能是由于其腸上皮細(xì)胞NF-κB信號的過度活化,引起腸上皮細(xì)胞分泌的炎癥因子增多,從而使得炎癥反應(yīng)加重。于是,我們以人的結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116為靶細(xì)胞,采用RNA干擾技術(shù),使得HCT116上GPR97的表達(dá)量降低,檢測其炎癥因子的分泌情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)GPR97基因表達(dá)降低后人結(jié)腸癌細(xì)胞中炎癥因子的分泌增加,從而驗(yàn)證了上述的假設(shè)。綜上所述,GPR97對小鼠炎癥性腸病的影響主要是通過影響腸上皮細(xì)胞NF-κB信號通路,從而影響炎癥因子的分泌所引起的。該研究為以GPR97為靶點(diǎn)進(jìn)行IBD的臨床治療提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R574

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2316575