【摘要】：目的對華支睪吸蟲成蟲(Clonorchis sinensis,Cs)鈣調(diào)節(jié)蛋白(Ca M)進行生物學及功能分析,以確定其在肝纖維化中的作用。方法從Cs c DNA質(zhì)粒文庫中尋找Cs Ca M全長序列,以BLASTx搜索其同源序列并進行比對分析。以生物信息學進行同源比對、理化性質(zhì)分析及功能域預測。以分子生物學方法進行原核克隆,大腸桿菌表達,親和層析純化,并將純化蛋白免疫大鼠,產(chǎn)生多克隆抗體。ELISA檢測Cs Ca M抗體滴度及產(chǎn)生曲線。免疫印跡實驗分析Cs Ca M重組蛋白純化及其抗體識別效果。免疫組化分析其組織定位;腹腔注射法建立Cs Ca M致大鼠肝纖維化模型。結(jié)果重組、表達及純化了Cs Ca M,其編碼150位氨基酸,理論相對分子質(zhì)量23 400。結(jié)構(gòu)域預測其具有EF手位模序。p ET-30a-Cs Ca M重組質(zhì)粒其目的蛋白表達于宿主菌BL21 E.coli上清,相對分子質(zhì)量約23 400�？侷g G抗體滴度于2~4周達較高峰,效價大于1∶51 200。免疫組織化學定位顯示Cs Ca M在成蟲睪丸表達豐富。Cs Ca M腹腔注射大鼠的肝臟均顯示不同程度病變,HE染色可見炎癥反應較嚴重,可見氣球樣變、門管區(qū)炎及碎片狀壞死;網(wǎng)狀纖維染色顯示小膽管周圍膠原增生,有輕到中度纖維化。結(jié)論 Cs Ca M促進大鼠肝臟炎癥病變及纖維化的作用,提示其可能參與了華支睪吸蟲病致肝纖維化的作用。
[Abstract]:Objective to study the role of calmodulin (Ca M) in hepatic fibrosis of adult Clonorchis sinensis (Clonorchis sinensis,Cs) by biological and functional analysis. Methods the full-length Cs Ca M sequence was found from the Cs c DNA plasmid library, and its homologous sequence was searched by BLASTx and analyzed by alignment. Bioinformatics was used for homology comparison, physicochemical properties analysis and functional domain prediction. Prokaryotic cloning, expression of Escherichia coli and purification by affinity chromatography were carried out by molecular biological methods. The purified protein was immunized to rats to produce polyclonal antibodies. ELISA was used to detect the titer and production curve of Cs Ca M antibody. The purification of Cs Ca M recombinant protein and the effect of antibody recognition were analyzed by Western blot. The liver fibrosis model of rats induced by Cs Ca M was established by intraperitoneal injection. Results Cs Ca M, was recombined, expressed and purified. It encodes 150 amino acids, and its theoretical molecular weight is 23 400. Its target protein was expressed in the supernatant of the host strain BL21 E.coli, and the relative molecular weight was about 23 400. The titer of total Ig G antibody reached its peak at 2 ~ 4 weeks, and its titer was more than 1:51. Immunohistochemical localization showed that Cs Ca M showed varying degrees of pathological changes in the liver of rats injected with. Cs Ca M, and HE staining showed severe inflammatory reaction, balloon degeneration, hilar inflammation and fragment necrosis. Reticular fiber staining showed collagen proliferation around the small bile duct with mild to moderate fibrosis. Conclusion Cs Ca M can promote hepatic inflammation and fibrosis in rats, suggesting that Cs Ca M may play a role in hepatic fibrosis induced by clonorchiasis sinensis.
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院檢驗科;中山大學中山醫(yī)學院熱帶病防治重點實驗室病原生物學教研室;中山大學藥理學教研室;中山大學第三附屬醫(yī)院廣東省肝臟疾病研究重點實驗室;
【基金】：國家自然科學青年科學基金(81401689) 廣東省醫(yī)學科研基金(B2014137) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金資助(14ykpy23)~~
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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1 馬長玲;胡旭初;胡鳳玉;周紅娟;薛玲;余新炳;;華支睪吸蟲溶血磷脂酶對大鼠肝星狀細胞和卵圓細胞的作用[J];細胞與分子免疫學雜志;2008年07期

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2 陳德宇;劉利敏;黃天華;;弱精癥患者精子miRNA表達譜的構(gòu)建和分析[J];阜陽師范學院學報(自然科學版);2009年02期

3 陳崢宏;包懷恩;;寄生蟲感染與肝纖維化[J];貴州醫(yī)藥;2013年06期

4 辛雪;薛明明;;福辛普利對壓力超負荷性心肌肥厚大鼠左心室心肌細胞bcl-2及bax基因表達的影響[J];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學學報;2014年05期

5 謝芝芝;黃艷;余新炳;;寄生蟲感染致肝纖維化機制的研究進展[J];熱帶醫(yī)學雜志;2013年09期

6 馬長玲;胡旭初;胡鳳玉;周紅娟;薛玲;余新炳;;華支睪吸蟲溶血磷脂酶對大鼠肝星狀細胞和卵圓細胞的作用[J];細胞與分子免疫學雜志;2008年07期

7 馬長玲;胡旭初;胡鳳玉;李艷文;趙俊紅;鄭小凌;余新炳;;華支睪吸蟲磷脂酶A_2基因生物學特性的初步研究[J];中國病原生物學雜志;2009年10期

8 馬長玲;胡旭初;胡鳳玉;鄭小凌;徐勁;呂芳麗;余新炳;;華支睪吸蟲溶血磷脂酶在蟲體組織定位及其特異性抗體類型分析[J];中國人獸共患病學報;2008年03期

9 吳秀萍;高麗芳;張玲;鄧洪寬;劉相葉;葉春艷;王子見;王學林;王峰;劉明遠;;華支睪吸蟲成蟲cDNA表達文庫的構(gòu)建與篩選[J];中國獸醫(yī)學報;2009年07期

10 曲自剛;付寶權(quán);;寄生性蠕蟲組織蛋白酶F研究進展[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2013年05期

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3 張小玲;華支睪吸蟲囊蚴cDNA文庫的構(gòu)建與免疫學篩選[D];吉林大學;2010年

4 唐藝芝;華支睪吸蟲5種抗原表位的免疫學定位[D];吉林大學;2013年

5 高一夫;家蠅PGRP-SC和Cathepsin L基因的免疫相關(guān)功能分析[D];河北大學;2013年

6 孫洪超;弓形蟲組織蛋白酶B缺失株構(gòu)建及部分生物學特性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2014年

【二級參考文獻】

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1 鄭進方,梁力建;肝干細胞與肝癌關(guān)系的研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年06期

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3 王磊，，肖錫昌，唐永煌，曾子華;華支睪吸蟲與二甲基亞硝胺誘發(fā)動物肝癌的初步實驗研究[J];中國寄生蟲病防治雜志;1994年03期

4 齊菲,顏光濤;胞漿型磷脂酶A_2與細胞增殖的關(guān)系[J];中華老年多器官疾病雜志;2005年01期

5 黎學銘，方鐘燎;膽管癌與華枝睪吸蟲感染關(guān)系[J];中國人獸共患病雜志;1996年03期

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3 劉玉侃;肝纖維化基因治療的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學綜述;2001年05期

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9 張曉嵐;肝纖維化的治療策略及藥物治療進展[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2001年03期

10 王小眾;肝纖維化的發(fā)病機制及抗纖維化研究進展[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2001年S1期

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2 張立伐;閔筱輝;;抗肝纖維化中西藥物研究進展[A];第十八次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 柴維敏;朱乃懿;李衛(wèi)俠;杜聯(lián)軍;趙香田;陳克敏;;肝纖維化~1H-MRS臨床應用價值初步研究[A];第十次全國中西醫(yī)結(jié)合影像學術(shù)研討會暨全國中西醫(yī)結(jié)合影像學研究與診斷學習班資料匯編[C];2009年

4 楊麗;楊長青;郜恒俊;常義忠;王勝蘭;張照杰;;液態(tài)蛋白質(zhì)芯片檢測肝纖維化方法的建立[A];第九次全國消化系統(tǒng)疾病學術(shù)會議專題報告論文集[C];2009年

5 林云華;尹燕耀;宗亞力;;肝纖維化與血管新生相關(guān)研究進展[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

6 程明亮;;肝纖維化的研究進展[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學會2005年消化系及肝病學術(shù)交流會論文集[C];2005年

7 屠建國;;肝纖維化的發(fā)病機理及中西醫(yī)結(jié)合治療[A];浙江省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合治療慢性重癥肝炎慢性肝炎新進展學術(shù)研討會資料匯編[C];2005年

8 繆錫民;;肝纖維化發(fā)生機制及治療對策[A];2005年浙江省感染病、肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

9 李驥;董培紅;金益輝;盧明芹;陳永平;潘發(fā)奮;王幫松;;維生素D受體基因多態(tài)性與肝纖維化關(guān)系初步研究[A];2005年浙江省感染病、肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

10 劉麗麗;;肝纖維化的發(fā)病機制探討[A];第九屆西北五�。▍^(qū)）檢驗醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2005年

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1 張昀;肝纖維化可以治療[N];健康報;2005年

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3 范又;肝病專家指出治療肝纖維化中醫(yī)藥療效世界領(lǐng)先[N];光明日報;2007年

4 陳黎明;肝纖維化[N];家庭醫(yī)生報;2006年

5 通訊員 陳麗霞邋王懷民 記者 趙鳳華;黃連素可能治肝纖維化[N];科技日報;2008年

6 蔣明邋通訊員 陳麗霞 王懷民;黃連素治療肝纖維化有效果[N];健康報;2008年

7 健康時報記者 劉橋斌;測肝纖維化免穿刺[N];健康時報;2009年

8 解放軍302醫(yī)院肝纖維化無創(chuàng)診療中心 陳國鳳 黃顯斌 整理;肝纖維化檢查進入無創(chuàng)時代[N];健康報;2009年

9 第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院教授 謝渭芬　整理 王根華;阻斷肝纖維化發(fā)展的鏈條[N];健康報;2010年

10 黃丁毅;福瑞股份：肝纖維化�？泼鎸Α白龃蟆泵}[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

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2 解麗梅;應用超聲造影評價肝纖維化的實驗與臨床研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

3 黃加權(quán);熱休克蛋白47在日本血吸蟲肝纖維化中的作用及機制研究[D];華中科技大學;2012年

4 唐曉明;大鼠肝纖維化恢復期肝星狀細胞凋亡的分子機制及來氟米特的調(diào)節(jié)作用[D];安徽醫(yī)科大學;2009年

5 逄文強;胰脂酶相關(guān)蛋白的條件性表達機制及其在肝纖維化基因治療的研究[D];南京理工大學;2011年

6 周偉;骨髓間充質(zhì)干細胞對實驗性肝纖維化大鼠的作用及機制探討[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

7 張一寧;整合素鏈接激酶在大鼠肝纖維化發(fā)展機制中的作用的研究[D];吉林大學;2005年

8 彭建平;性激素影響肝纖維化的機理探討[D];四川大學;2004年

9 陳新美;基于基因表達譜的肝纖維化治療藥物篩選及相關(guān)實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2011年

10 宋明;肝再生增強因子對大鼠肝纖維化的治療作用及機制研究[D];沈陽藥科大學;2012年

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3 王衛(wèi)衛(wèi);血管緊張素Ⅱ1型受體在肝纖維化形成過程中表達變化的研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學;2003年

4 王麗平;瘦素在肝纖維化大鼠中的表達和h穎ザ愿蝸宋姆樂巫饔肹D];山西醫(yī)科大學;2012年

5 李彬彬;循環(huán)miR-185對臨床肝纖維化診斷價值的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

6 楊新英;高遷移率族蛋白B1抑制劑防治肝纖維化的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

7 徐小兵;肝纖丸治療乙型肝炎后肝纖維化的臨床與實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2000年

8 金英姬;四氯化碳誘發(fā)大鼠肝纖維化的病理學特點[D];延邊大學;2006年

9 焦艷;骨髓間充質(zhì)干細胞移植對大鼠肝纖維化的作用[D];福建醫(yī)科大學;2006年

10 李春輝;二甲基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝纖維化發(fā)生機理的研究[D];延邊大學;2003年

本文編號：2315709