發(fā)布時(shí)間：2018-10-31 16:51

【摘要】：研究目的 觀察HBV對(duì)ANG的調(diào)控作用及其機(jī)制,并觀察抑制ANG對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 研究方法 利用HepG2.2.15細(xì)胞模型及質(zhì)粒pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞,通過Real-time PCR檢測(cè)ANG mRNA及Elisa, Western Blot檢測(cè)ANG蛋白變化,觀察HBV/HBx對(duì)ANG的調(diào)控作用。通過Western Blot及Elisa檢測(cè)HBV/HBx對(duì)IL-6的調(diào)控作用,并檢測(cè)IL-6刺激及抗體封閉IL-6活性后ANG細(xì)胞內(nèi)外蛋白含量的變化。Western Blot檢測(cè)HBV/HBx對(duì)HIF-1α的調(diào)控作用,并Western Blot檢測(cè)HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因后,ANG蛋白表達(dá)的變化。采用免疫熒光方法檢測(cè)HBV對(duì)ANG核轉(zhuǎn)移的影響。通過ANG siRNA(50nM)轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞及使用ANG核轉(zhuǎn)移抑制劑neomycine, MTT檢測(cè)細(xì)胞抑制率,并檢測(cè)ANG基因沉默后核糖體RNA45S RNA的合成變化。 研究結(jié)果 Real-time PCR及Elisa, Western Blot結(jié)果顯示在HBV病毒穩(wěn)定復(fù)制的HepG2.2.15細(xì)胞及轉(zhuǎn)染X蛋白的HepG2-HBx細(xì)胞中,ANG mRNA及蛋白水平均高于對(duì)照組。Real-time PCR結(jié)果顯示在HepG2-HBx細(xì)胞中ANG水平升高45SRNA轉(zhuǎn)錄水平升高,ANG基因沉默后其轉(zhuǎn)錄水平降低。Western Blot結(jié)果顯示,HepG2.2.15細(xì)胞及HepG-HBx細(xì)胞中IL-6及HIF-1α蛋白水平均高于對(duì)照組。Real-time PCR及Elisa結(jié)果顯示IL-6刺激后ANG mRNA及蛋白水平均明顯升高,抗體封閉IL-6活性后,ANG蛋白表達(dá)降低。Western Blot及Elisa結(jié)果顯示,HIF-1α基因沉默后,ANG蛋白表達(dá)降低。免疫熒光結(jié)果顯示較于對(duì)照,2215細(xì)胞中核轉(zhuǎn)移明顯被促進(jìn)。MTT結(jié)果顯示,HepG2.2.15細(xì)胞中ANG基因沉默或加入核轉(zhuǎn)移抑制劑后細(xì)胞增殖明顯抑制。 研究結(jié)論 HBV/HBx可上調(diào)ANG,這種上調(diào)作用可能是通過其對(duì)IL-6及HIF-1α的上調(diào)實(shí)現(xiàn)；HBV可促進(jìn)上調(diào)的ANG核轉(zhuǎn)移；ANG活性被抑制后,可抑制細(xì)胞增殖。
[Abstract]:Objective to investigate the regulatory effect of HBV on ANG and its mechanism, and to observe the effect of inhibiting ANG on cell proliferation. Methods HepG2.2.15 cell model and HepG2 cells transfected with plasmid pcDNA3.1-HBx were used to detect the changes of ANG protein by Real-time PCR and Elisa, Western Blot, and the effect of HBV/HBx on ANG was observed. The regulatory effect of HBV/HBx on IL-6 was detected by Western Blot and Elisa, and the changes of protein content in ANG cells after IL-6 stimulation and blocking of IL-6 activity by antibody were detected. The effect of HBV/HBx on HIF-1 偽 was detected by. Western Blot. The expression of ANG protein was detected by Western Blot after HIF-1 偽 siRNA silenced HIF-1 偽 gene. The effect of HBV on nuclear metastasis of ANG was detected by immunofluorescence method. ANG siRNA (50nM) was used to transfect HepG2.2.15 cells and ANG nuclear transfer inhibitor (neomycine, MTT) was used to detect the inhibition rate and the synthesis of ribosomal RNA45S RNA after ANG gene silencing. Results the results of Real-time PCR and Elisa, Western Blot showed that in the stable replication of HBV virus HepG2.2.15 cells and X protein transfected HepG2-HBx cells, The levels of ANG mRNA and protein were higher than those of the control group. Real-time PCR results showed that the ANG level increased in HepG2-HBx cells, and the transcription level of 45SRNA increased after ANG gene silencing. The results showed that the ANG level decreased after ANG gene silencing. The levels of IL-6 and HIF-1 偽 protein in HepG2.2.15 cells and HepG-HBx cells were higher than those in the control group. The results of Real-time PCR and Elisa showed that ANG mRNA and protein levels increased significantly after IL-6 stimulation, and the antibody blocked IL-6 activity. The results of. Western Blot and Elisa showed that the expression of ANG protein decreased after HIF-1 偽 gene silencing. The results of immunofluorescence showed that nuclear metastasis was significantly promoted in 2215 cells compared with the control. MTT results showed that ANG gene silencing in HepG2.2.15 cells or the addition of nuclear transfer inhibitors significantly inhibited cell proliferation. Conclusion the upregulation of ANG, by HBV/HBx may be due to its up-regulation of IL-6 and HIF-1 偽, HBV can promote the up-regulation of ANG nuclear metastasis, and ANG can inhibit the proliferation of cells when the activity of ANG is inhibited.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.62

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2302937