【摘要】：研究目的 觀察HBV對ANG的調控作用及其機制,并觀察抑制ANG對細胞增殖的影響。 研究方法 利用HepG2.2.15細胞模型及質粒pcDNA3.1-HBx轉染的HepG2細胞,通過Real-time PCR檢測ANG mRNA及Elisa, Western Blot檢測ANG蛋白變化,觀察HBV/HBx對ANG的調控作用。通過Western Blot及Elisa檢測HBV/HBx對IL-6的調控作用,并檢測IL-6刺激及抗體封閉IL-6活性后ANG細胞內外蛋白含量的變化。Western Blot檢測HBV/HBx對HIF-1α的調控作用,并Western Blot檢測HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因后,ANG蛋白表達的變化。采用免疫熒光方法檢測HBV對ANG核轉移的影響。通過ANG siRNA(50nM)轉染HepG2.2.15細胞及使用ANG核轉移抑制劑neomycine, MTT檢測細胞抑制率,并檢測ANG基因沉默后核糖體RNA45S RNA的合成變化。 研究結果 Real-time PCR及Elisa, Western Blot結果顯示在HBV病毒穩(wěn)定復制的HepG2.2.15細胞及轉染X蛋白的HepG2-HBx細胞中,ANG mRNA及蛋白水平均高于對照組。Real-time PCR結果顯示在HepG2-HBx細胞中ANG水平升高45SRNA轉錄水平升高,ANG基因沉默后其轉錄水平降低。Western Blot結果顯示,HepG2.2.15細胞及HepG-HBx細胞中IL-6及HIF-1α蛋白水平均高于對照組。Real-time PCR及Elisa結果顯示IL-6刺激后ANG mRNA及蛋白水平均明顯升高,抗體封閉IL-6活性后,ANG蛋白表達降低。Western Blot及Elisa結果顯示,HIF-1α基因沉默后,ANG蛋白表達降低。免疫熒光結果顯示較于對照,2215細胞中核轉移明顯被促進。MTT結果顯示,HepG2.2.15細胞中ANG基因沉默或加入核轉移抑制劑后細胞增殖明顯抑制。 研究結論 HBV/HBx可上調ANG,這種上調作用可能是通過其對IL-6及HIF-1α的上調實現(xiàn)；HBV可促進上調的ANG核轉移；ANG活性被抑制后,可抑制細胞增殖。
[Abstract]:Objective to investigate the regulatory effect of HBV on ANG and its mechanism, and to observe the effect of inhibiting ANG on cell proliferation. Methods HepG2.2.15 cell model and HepG2 cells transfected with plasmid pcDNA3.1-HBx were used to detect the changes of ANG protein by Real-time PCR and Elisa, Western Blot, and the effect of HBV/HBx on ANG was observed. The regulatory effect of HBV/HBx on IL-6 was detected by Western Blot and Elisa, and the changes of protein content in ANG cells after IL-6 stimulation and blocking of IL-6 activity by antibody were detected. The effect of HBV/HBx on HIF-1 偽 was detected by. Western Blot. The expression of ANG protein was detected by Western Blot after HIF-1 偽 siRNA silenced HIF-1 偽 gene. The effect of HBV on nuclear metastasis of ANG was detected by immunofluorescence method. ANG siRNA (50nM) was used to transfect HepG2.2.15 cells and ANG nuclear transfer inhibitor (neomycine, MTT) was used to detect the inhibition rate and the synthesis of ribosomal RNA45S RNA after ANG gene silencing. Results the results of Real-time PCR and Elisa, Western Blot showed that in the stable replication of HBV virus HepG2.2.15 cells and X protein transfected HepG2-HBx cells, The levels of ANG mRNA and protein were higher than those of the control group. Real-time PCR results showed that the ANG level increased in HepG2-HBx cells, and the transcription level of 45SRNA increased after ANG gene silencing. The results showed that the ANG level decreased after ANG gene silencing. The levels of IL-6 and HIF-1 偽 protein in HepG2.2.15 cells and HepG-HBx cells were higher than those in the control group. The results of Real-time PCR and Elisa showed that ANG mRNA and protein levels increased significantly after IL-6 stimulation, and the antibody blocked IL-6 activity. The results of. Western Blot and Elisa showed that the expression of ANG protein decreased after HIF-1 偽 gene silencing. The results of immunofluorescence showed that nuclear metastasis was significantly promoted in 2215 cells compared with the control. MTT results showed that ANG gene silencing in HepG2.2.15 cells or the addition of nuclear transfer inhibitors significantly inhibited cell proliferation. Conclusion the upregulation of ANG, by HBV/HBx may be due to its up-regulation of IL-6 and HIF-1 偽, HBV can promote the up-regulation of ANG nuclear metastasis, and ANG can inhibit the proliferation of cells when the activity of ANG is inhibited.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王琳;趙春楠;史進方;彭群新;顧國浩;;HBV慢性患者外周血單個核細胞CD28/B7家族共刺激分子mRNA表達及其意義[J];重慶醫(yī)學;2014年02期

2 王賢達;林雄杰;胡菡青;王宗華;范國成;;抗菌肽研究及其在植物病害控制中的應用[J];福建農業(yè)學報;2014年01期

3 陳欽艷;李生;楊進業(yè);方鐘燎;;乙型肝炎病毒新基因型I與肝臟疾病關系的研究[J];廣西醫(yī)學;2014年01期

4 王琳;趙春楠;祁松楠;彭群新;史進方;顧國浩;;HBV慢性感染患者外周血CD8~+ T細胞程序性死亡受體-1和黏蛋白結構域-3的表達及意義[J];廣東醫(yī)學;2014年07期

5 黃欣;王金鳳;徐東剛;;血管生成素研究進展[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2008年02期

6 ;Duplication and functional diversification of pancreatic ribonuclease (RNASE1) gene[J];Chinese Science Bulletin;2010年01期

7 王小燕;李能枝;于黎;趙卉;張亞平;;胰核糖核酸酶基因(RNASE1)重復與功能分化[J];科學通報;2009年23期

8 劉曉玲;劉雪;王敏強;魏海濤;;人附睪RNase10基因在大腸桿菌中的表達[J];湖北農業(yè)科學;2013年17期

9 尚丹鶴;陳延平;李春艷;;慢性HBV感染者肝臟病理改變的研究進展[J];臨床肝膽病雜志;2013年11期

10 鄔善敏;柯文杰;袁方均;張小霞;;DAMPs對人肝癌HepG2細胞增殖能力影響的機制研究[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2013年05期

相關會議論文 前1條

1 Jun Zhang;Ji Cao;Rong Dong;Meidan Ying;Qinjie Weng;Jian Ma;Qiaojun He;Bo Yang;;Tumor hypoxia enhances Non-Small Cell Lung Cancer metastasis by selectively promoting macrophage M2 polarization through the activation of ERK signaling[A];抗腫瘤藥物研究新進展與腫瘤個性化藥物治療論壇論文集[C];2013年

相關博士學位論文 前10條

1 刁華;大鼠附睪beta-defensins的表達方法和抗菌活性研究及猴附睪特異表達基因RNase 9的表達和功能探索[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2007年

2 凌婧;WXXW基序對ADAMTS13分泌及功能的影響[D];蘇州大學;2013年

3 于風雪;白細胞介素28、P21活化激酶4基因多態(tài)性與慢性乙型肝炎病人抗病毒治療應答的關聯(lián)性分析[D];河北醫(yī)科大學;2013年

4 嚴秀文;牛虻唾液腺免疫抑制肽Immunoregulin HA及大熊貓抗菌肽PC的結構與功能研究[D];南京農業(yè)大學;2011年

5 林艷婷;乙型肝炎病毒HBx蛋白與血漿銅藍蛋白的相互作用及對其功能影響[D];福建醫(yī)科大學;2013年

6 劉超;BEZ235體外抑制肝癌HepG2細胞的分子機制以及Six1蛋白過表達與肝癌生物學特點的關系[D];延邊大學;2013年

7 王曉璐;凡納濱對蝦抗脂多糖因子ALF-AVK基因的克隆及其特性研究[D];中國海洋大學;2013年

8 馬瑞花;逆轉糖酵解—基于糖代謝的肝癌治療新策略研究[D];華中科技大學;2013年

9 王奇;載羥基喜樹堿聚乳酸羥基乙酸微球的制備及抑制肝癌栓塞后血管生成的實驗研究[D];華中科技大學;2013年

10 陳健;己糖激酶2在喉鱗狀細胞癌中的作用和機制研究[D];華中科技大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 楊梅;江豚核基因內元的遺傳變異及鯨類RNASE1基因的適應性進化研究[D];南京師范大學;2011年

2 何貝貝;蝙蝠科RNASE1基因的分子克隆和適應性進化[D];華東師范大學;2010年

3 胡曉煒;基于氧化石墨烯/聚苯胺的生物傳感器[D];安徽大學;2013年

4 王婧超;衰老腎小管上皮細胞旁分泌TGF-β1促進上皮間充質轉分化[D];河北醫(yī)科大學;2013年

5 鐘大妮;廣西地區(qū)乙肝病毒基因型與臨床表現(xiàn)及機體免疫功能的關系[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

6 羅秀;六月青多糖及其皂苷對鴨乙型肝炎的治療作用及分子作用機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

7 廖學文;雜合抗菌肽LFM-3的分子設計及其在畢赤酵母中的表達[D];南京農業(yè)大學;2012年

8 彭金健;GLUT1、HIF-1α在腎細胞癌中的表達及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學;2013年

9 馬娟;葫蘆素B抑制缺氧誘導因子-1α作用機制研究[D];延邊大學;2013年

10 曾憲春;誘發(fā)性大鼠肝癌演變過程的DSCT全肝灌注研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

，

本文編號：2302937