發(fā)布時(shí)間：2018-10-26 09:02

【摘要】：目的： 本研究采用免疫組織化學(xué)方法及計(jì)算機(jī)圖像定量分析技術(shù)研究表面黏附分子DNAM-1(DNAX accessory molecular1,CD226)在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠肝臟組織中的表達(dá),探討DNAM-1在大鼠肝纖維化的作用及可能機(jī)制,同時(shí)探討傳統(tǒng)抗肝纖維化藥物對(duì)DNAM-1表達(dá)的影響。方法： 健康雄性SD大鼠80只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、丹參組、易善復(fù)組共4組,每組20只。25%CCL4橄欖油混懸液背部皮下注射[3ml/(kg·d), CCL4:橄欖油為1：3]造模。同時(shí),除空白對(duì)照組、模型組外,予其余兩組大鼠丹參水煎液、易善復(fù)液灌胃,10周后光鏡下觀察大鼠肝臟病理組織學(xué)改變,進(jìn)行肝纖維化分期并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。利用免疫組化S-P法,檢測(cè)各組大鼠肝組織中DNAM-1表達(dá)水平并分析其表達(dá)與各組療效的關(guān)系及可能機(jī)制,應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行定量分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： 1.各組大鼠一般情況觀察 隨實(shí)驗(yàn)天數(shù)增加,模型組大鼠飲食飲水量逐漸減少,體重下降,大便干燥,小便泛黃,皮毛疏松無光澤甚至脫落,精神萎靡不振；空白對(duì)照組大鼠毛發(fā)有光澤,體重均勻增加,體態(tài)活潑,食量飲水量及大小便正常；丹參組和易善復(fù)組大鼠上述癥狀較模型組大鼠有不同程度減輕。 2.光鏡下實(shí)驗(yàn)大鼠肝臟病理學(xué)變化 空白對(duì)照組大鼠肝臟肝小葉正常,匯管區(qū)結(jié)構(gòu)完整、界限清晰,未見纖維組織增生和其他異常；模型組大鼠肝臟細(xì)胞腫脹、脂肪變性,正常肝小葉已破壞,壞死區(qū)有炎細(xì)胞浸潤(rùn),肝竇多數(shù)受壓變窄或閉塞,匯管區(qū)有大量假小葉形成。丹參組、易善復(fù)組大鼠肝細(xì)胞壞死較模型組減輕,肝小葉多呈放射狀分布,膠原纖維間隔減少,匯管區(qū)纖維結(jié)締組織增生不明顯。丹參組、易善復(fù)組大鼠與空白組大鼠肝纖維化分期比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組大鼠比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；丹參組、易善復(fù)組大鼠之間的肝纖維化分期無明顯差異(P0.05)。Ishak評(píng)分的比較：模型組、丹參組和易善復(fù)組的肝纖維化評(píng)分均高于空白組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；而丹參組和易善復(fù)組的肝纖維化評(píng)分均低于模型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；并且丹參組和易善復(fù)組之間的肝纖維化評(píng)分無明顯差異(P0.05)。 3.免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果 DNAM-1在四組大鼠肝臟組織中均有出現(xiàn)弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性三種表達(dá)結(jié)果。經(jīng)過非參數(shù)法秩和檢驗(yàn)多樣本兩兩比較實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)：模型組和空白對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.498,P=0.012)；丹參組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.577,P=0.564),丹參組與空白對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=0.001,P=0.999)；易善復(fù)組與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.788,P=0.431),易善復(fù)與空白對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=-0.655,P=0.935)。 4.DNAM-1免疫組化定量分析結(jié)果 PU值越大,陽性表達(dá)強(qiáng)度越高；PU值越小,陽性表達(dá)強(qiáng)度越低。經(jīng)比較DNAM-1在模型組中陽性表達(dá)最強(qiáng),最大PU值達(dá)(62.05±10.172)；空白對(duì)照組中表達(dá)最弱,最大PU值僅為(41.65±7.451)；丹參組最大PU值為(57.55±4.392),易善復(fù)組最大PU值為(54.52±6.539)。模型組DNAM-1表達(dá)的陽性強(qiáng)度明顯高于空白對(duì)照組和藥物組。 結(jié)論： 1.實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)CCL4皮下注射10周可誘導(dǎo)具有典型肝纖維化特征的動(dòng)物模型。 2.病理學(xué)觀察可見,在CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化形成過程中,采用中藥丹參、西藥易善復(fù)進(jìn)行干預(yù)能夠減輕大鼠肝纖維化程度。 3.DNAM-1在肝纖維化大鼠肝臟組織中的表達(dá)情況,說明了DNAM-1在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的促進(jìn)作用。在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中DNAM-1的作用可能為肝纖維化發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。 4.經(jīng)藥物干預(yù)發(fā)現(xiàn),傳統(tǒng)抗肝纖維化中藥丹參和西藥易善復(fù)在大鼠肝纖維形成過程中不能抑制肝臟中DNAM-1的表達(dá),這兩種藥物可能通過其他途徑而不是通過抑制DNAM-1的過表達(dá)影響肝纖維化進(jìn)程。
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【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2295224