【摘要】：目的:在前期研究糞便微生物移植(FMT)治療小鼠潰瘍性結腸炎(UC)的基礎上,制備海藻酸鈉微球,探討糞便微生物微球移植對UC的治療作用。同時研究海藻酸鈉微球包裹小鼠黑色素瘤細胞B16抗原對小鼠免疫系統(tǒng)的激活作用,期望為臨床免疫治療黑色素瘤提供新的思路。方法:1將BALB/c小鼠分組,采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)進行UC造模,采用銳孔凝固浴法制得含菌微球,對UC小鼠進行灌胃治療,另外一組UC模型進行FMT治療。觀察小鼠體重和DAI指數變化;取不同分組的小鼠結腸進行組織學觀察,并對其進行16S RNA基因測序分析研究其菌群變化。2建立C57BL/6J小鼠的黑色素瘤模型。研究B16細胞抗原激活DC對黑色素瘤的抑制作用,觀察比較小鼠體內腫瘤的生長情況;采用組織病理學方法,觀察小鼠脾臟結構的變化。采用微乳法制備包有B16細胞抗原的海藻酸鈉微球,給C57BL/6J小鼠免疫之后通過ELISA實驗測定血清中IFN-γ、IL-12等細胞因子水平的變化。結果:1、采用銳孔凝固浴法制備的海藻酸鈉微球大小在500μm左右,符合小鼠灌胃要求;耐酸性和腸溶性實驗表明海藻酸鈉微球可以抵抗胃酸的強酸環(huán)境,在腸液和結腸液中逐漸崩解,釋放糞便微生物;經DSS造模后,小鼠的體重出現明顯下降、DAI指數逐漸升高。造模7天后,進行不同的處理,其中糞菌移植組和糞菌微球組,連續(xù)治療7天,小鼠體重自治療第二天開始上升,DAI指數治療一天后開始下降,直至降到0左右;沒有給予治療組和用空微球灌胃治療組,體重均呈逐漸下降趨勢,DAI指數逐步上升,第11天(停止DSS后的第三天)死亡或因為嚴重腹瀉而被處死。另外,組織病理學研究結果表明UC模型小鼠結腸組織黏膜表面有潰爛,有多處凸起,隱窩數量減少;經過糞便菌群移植或者采用糞菌微球連續(xù)治療7天后,小鼠的結腸組織粘膜層與正常小鼠的組織結構相似,黏膜層恢復光滑。將小鼠結腸進行16S rRNA基因測序分析發(fā)現,DSS處理組與健康組相比,其結腸內螺桿菌、大腸桿菌和擬桿菌的數量顯著增多,乳桿菌數量明顯下降;經含糞菌微球治療后螺桿菌、大腸桿菌和擬桿菌的數量顯著下降,乳桿菌數量顯著回升。2、小鼠黑色素瘤模型結果:接種B16細胞抗原激活的DC小鼠未見腫瘤生長;接種B16細胞1周后再接種B16細胞激活的DC細胞的小鼠,與只接種B16細胞的小鼠比較,腫瘤體積有顯著性減小。荷瘤小鼠的脾臟結構有顯著變化:C57BL/6J小鼠接種B16細胞14天后,脾臟的濾泡結構增加;而接種B16細胞激活的DC細胞后,小鼠脾臟的濾泡結構顯著減少。小鼠接種包含B16細胞抗原后進行血清細胞因子的測定,與對照小鼠比較,發(fā)現IFN-γ和IL-12的水平顯著增加。結論:采用糞便微生物微球化移植治療UC有效果,可考慮作為FMT的替代治療方法;給荷瘤小鼠接種被黑色素瘤抗原激活后的DC細胞,可以抑制腫瘤生長;將黑色素瘤B16細胞抗原微球化后對小鼠進行免疫能夠增加IFN-γ和IL-12細胞因子水平,具有潛在的抗腫瘤效果。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62;R739.5

【參考文獻】

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本文編號：2283082