【摘要】：原發(fā)性膽汁性肝硬化一種典型的器官特異性自身免疫性疾病，病原體的感染可能是其發(fā)病的一個(gè)重要因素。I型干擾素主要包括IFN-α和IFN-β，它們具有抑制病毒復(fù)制的免疫學(xué)功能。當(dāng)機(jī)體受到病原體感染時(shí)，機(jī)體通過一系列途徑啟動I型干擾素的表達(dá)，從而通過炎癥反應(yīng)的方式非特異性清除入侵機(jī)體的病原體。然而，I型干擾素反應(yīng)是一把“雙刃劍”，適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)有助于病原體的清除而反應(yīng)亢進(jìn)則會造成機(jī)體的免疫病理損傷。研究表明I型干擾素反應(yīng)亢進(jìn)可能會引起自身免疫性疾病。細(xì)胞因子信號抑制分子（SOCS）是一類可以通過多種途徑對細(xì)胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行負(fù)向調(diào)控的蛋白分子。有研究指出SOCS可以通過JAK/STAT信號通路調(diào)節(jié)I型干擾素的生物學(xué)功能。本課題旨在研究I型干擾素信號通路調(diào)節(jié)的異常在PBC發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究共分為四個(gè)部分。 第一部分PBC患者外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型干擾素信號通路亢進(jìn) 以往有研究發(fā)現(xiàn)自身免疫性疾病中Ⅰ型干擾素信號通路亢進(jìn)的現(xiàn)象，但是其與原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系尚不明確。在本部分研究中，我們采用ELISA法檢測了PBC患者血清中IFN-α和IFN-β水平，以RT-PCR檢測了PBC患者PBMC中干擾素誘導(dǎo)基因（ISG）MX1、OAS1和ITIF3的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)PBC患者外周血IFN-α和IFN-β水平較健康個(gè)體明顯增高；PBMC中MX1、OAS1和ITIF3的表達(dá)也明顯增高。這些結(jié)果提示Ⅰ型干擾素信號通路亢進(jìn)是PBC發(fā)病機(jī)制的重要特征。 第二部分PBC患者外周血PBMC中SOCS7表達(dá)變化 以往的研究表明SOCS家族分子是極為重要的Ⅰ型干擾素信號通路負(fù)向調(diào)節(jié)因子。為明確PBC患者Ⅰ型干擾素信號通路亢進(jìn)是否與SOCS家族的分子有關(guān)。我們首先以外源性的IFN-α和IFN-β刺激PBC患者的PBMC，以RT-PCR法檢測SOCS7mRNA、ISG mRNA的表達(dá)，以免疫印跡檢測SOCS7蛋白的表達(dá)。分析了PBC患者和健康個(gè)體外周血中SOCS7表達(dá)水平的變化，PBC患者外周血SOCS7的表達(dá)與健康個(gè)體差異顯著。通過上調(diào)和下調(diào)SOCC7的表達(dá)來研究SOCS7對Ⅰ型干擾素信號通路的調(diào)節(jié)作用。我們發(fā)現(xiàn)，外源性的IFN-α和IFN-β可以上調(diào)PBMC中SOCS7和ISG的表達(dá)。上調(diào)SOCS7的表達(dá)可以抑制ISG的表達(dá)而下調(diào)SOCS7的表達(dá)可以促進(jìn)ISG的表達(dá)。同時(shí)我們用免疫組化法檢測到PBC患者肝臟浸潤的淋巴細(xì)胞表達(dá)SOCS7，這就表明在PBC患者肝臟浸潤的淋巴細(xì)胞可能會受到SOCS7的調(diào)節(jié)。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：PBC患者中SOCS7表達(dá)“遲鈍”，導(dǎo)致Ⅰ型干擾素信號通路沒有得到應(yīng)有的抑制，，是導(dǎo)致PBC患者Ⅰ型干擾素信號通路亢進(jìn)的原因。 第三部分SOCS7是miR-106b的作用靶點(diǎn) 為研究microRNA是否參與了調(diào)節(jié)SOCS7的表達(dá)，我們首先以生物信息學(xué)軟件對可能作用于SOCS7的靶點(diǎn)進(jìn)行了預(yù)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-106b可以作用于SOCS7。我們進(jìn)一步采用報(bào)告基因技術(shù)證實(shí)了miR-106b可以與SOCS7mRNA的3’UTR發(fā)生相互作用。Ⅰ型干擾素不能上調(diào)miR-106b的表達(dá)。最后我們將miR-106b的前體和抑制體轉(zhuǎn)染入PBC患者的PBMC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其可以調(diào)節(jié)SOCS7和ISG的表達(dá)。本部分研究結(jié)果表明，PBC患者PBMC中SOCS7表達(dá)降低可能與miR-106b有關(guān)。 第四部分PBC患者ISG、miR-106b和SOCS7的相關(guān)性分析 為明確前三部分體外研究的結(jié)論，我們對PBC患者PBMC中Ⅰ型干擾素、ISG、miR-106b和SOCS7進(jìn)行了相關(guān)性分析。結(jié)果表明，PBC患者較健康個(gè)體PBMC中miR-106b表達(dá)水平明顯降低，且與SOCS7水平呈負(fù)相關(guān)，與ISG呈正相關(guān)。Ⅰ型干擾素與SOCS7呈正相關(guān)，與miR-106b的ISG之間的相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SOCS7mRNA與OAS1、MX1和ITIF3之間均存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。這些結(jié)果表明，在PBC患者外周血中，miR-106b可能通過SOCS7而調(diào)節(jié)了ISG的表達(dá)。 結(jié)論 我們的研究結(jié)論表明，正常情況下，高水平的Ⅰ型干擾素對誘導(dǎo)細(xì)胞上調(diào)SOCS7的表達(dá)起著重要作用。SOCS7表達(dá)上調(diào)的意義在于抑制Ⅰ型干擾素信號通路的強(qiáng)度。這種反饋調(diào)節(jié)機(jī)制對于機(jī)體免遭自身免疫性疾病具有極為重要的意義。然而，PBC患者PBMC中miR-106b表達(dá)增高，導(dǎo)致SOCS7表達(dá)降低，雖然PBC患者外周血存在高水平Ⅰ型干擾素，但仍然不能上調(diào)SOCS7的表達(dá)，最終導(dǎo)致Ⅰ型干擾素通路亢進(jìn)。因此，miR-106b可能是PBC潛在的治療靶點(diǎn)。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.22

【參考文獻(xiàn)】

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1 王海坤;韓代書;;Toll樣受體(TLRs)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與免疫調(diào)節(jié)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2006年09期

本文編號：2268840