【摘要】：目的:探究人臍帶源間充質(zhì)干細胞(MSCs)的分離、培養(yǎng)方法,通過對MSCs與IL-10聯(lián)合治療四氯化碳誘導的大鼠肝纖維化的研究,觀察其協(xié)同效應(yīng),為臨床治療肝纖維化尋找新方法,并闡明其在肝纖維化治療中的部分機制。方法:自然貼壁法分離、純化人臍帶間充質(zhì)干細胞并進行體外培養(yǎng)和擴增。50只大鼠隨機選取5只入選正常對照組(n=5),其余45只大鼠采用皮下多點注射CCl_4方法制備大鼠肝纖維化模型,造模成功后隨機分為模型損傷組(n=15)、細胞移植組(n=15)和聯(lián)合用藥組(n=15)。細胞移植組在模型制備成功后的第1周、第2周、第3周經(jīng)尾靜脈給予1×10~6臍帶間充質(zhì)干細胞治療;聯(lián)合治療組在給予細胞移植組相同的細胞治療基礎(chǔ)上,給予腹腔內(nèi)注射IL-10(4μg/kg),每周4次。4周后將大鼠處死,收集各組大鼠血液檢測肝功能、肝纖維化指標;摘取肝臟行蘇木精-伊紅染色,觀察病理變化;RT-PCR法檢測MMP-2 mRNA表達情況,Western blot法檢測TGF-β蛋白的表達。結(jié)果:細胞移植組與聯(lián)合治療組大鼠肝功能、肝纖維化指標均明顯改善,與對照組比較,差異有顯著性意義(P0.05),且聯(lián)合治療組改善更明顯(P0.05);大鼠肝組織蘇木精-伊紅染色提示,細胞移植組、聯(lián)合治療組肝纖維化程度明顯改善,聯(lián)合治療組肝臟病理更接近于正常;損傷組、細胞移植組MMP-2 mRNA表達明顯增高,明顯高于正常對照組(P0.05),聯(lián)合治療組MMP-2 mRNA表達增高,與正常對照組比較無顯著性差異(P0.05);與正常對照組比較,其他組TGF-β蛋白的表達都有所增高(P0.05),其中損傷組TGF-β蛋白的表達增高最明顯(P0.05),細胞移植組、聯(lián)合治療組TGF-β蛋白的表達較損傷組均有不同程度的降低(P0.05),聯(lián)合治療組與細胞移植組比較TGF-β蛋白的表達也有顯著降低(P0.05)。結(jié)論:臍帶間充質(zhì)干細胞單獨移植或與IL-10聯(lián)合治療均可以改善肝纖維化大鼠外周血液的生化特性和肝的組織學結(jié)構(gòu),且IL-10聯(lián)合治療效果更佳,這可能是由于間充質(zhì)干細胞與IL-10可下調(diào)MMP-2 mRNA的表達,保護肝小葉結(jié)構(gòu);抑制TGF-β蛋白的表達,減少肝星狀細胞的激活等原因。
[Abstract]:Objective: to investigate the isolation and culture of human umbilical cord derived mesenchymal stem cells (MSCs), and to investigate the synergistic effect of MSCs and IL-10 in the treatment of hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats, so as to find a new method for clinical treatment of hepatic fibrosis. The mechanism of its application in the treatment of hepatic fibrosis was also elucidated. Methods: natural adherent method was used to separate, Human umbilical cord mesenchymal stem cells were purified and cultured and amplified in vitro. Five rats were randomly selected as normal control group (NN5). The other 45 rats were induced hepatic fibrosis model by subcutaneous multi-point injection of CCl_4. The models were randomly divided into three groups: model injury group (nong15), cell transplantation group (nnm15) and combined drug therapy group (NN15). In the cell transplantation group, 1 脳 10 6 umbilical cord mesenchymal stem cells were treated through the tail vein at the first week, the second week and the third week after the successful establishment of the model, while the combined treatment group was treated with the same cell therapy as the cell transplantation group. IL-10 (4 渭 g/kg) was injected intraperitoneally, the rats were killed 4 times a week, the blood of each group was collected to detect liver function and hepatic fibrosis index, the liver was removed and stained with hematoxylin and eosin. The expression of MMP-2 mRNA was detected by RT-PCR and the expression of TGF- 尾 by Western blot. Results: compared with the control group, the liver function and hepatic fibrosis indexes in the cell transplantation group and the combined treatment group were significantly improved (P0.05), especially in the combined treatment group (P0.05), the hepatic tissue hematoxylin-eosin staining suggested that, In the cell transplantation group, the liver fibrosis degree in the combined treatment group was significantly improved, the liver pathology in the combined treatment group was closer to normal, and the expression of MMP-2 mRNA in the injured group was significantly higher than that in the cell transplantation group. The expression of MMP-2 mRNA in the combined treatment group was significantly higher than that in the normal control group (P0.05), but there was no significant difference between the combined treatment group and the normal control group (P0.05). The expression of TGF- 尾 protein was increased in other groups (P0.05). The expression of TGF- 尾 protein in injured group was the most obvious (P0.05). The expression of TGF- 尾 protein in the combined treatment group was lower than that in the injured group (P0.05), and the expression of TGF- 尾 protein in the combined treatment group was significantly lower than that in the cell transplantation group (P0.05). Conclusion: transplantation of umbilical cord mesenchymal stem cells alone or combined with IL-10 can improve the biochemical characteristics of peripheral blood fluid and histological structure of liver in rats with hepatic fibrosis, and the effect of IL-10 combined therapy is better. This may be because mesenchymal stem cells and IL-10 can down-regulate the expression of MMP-2 mRNA, protect the hepatic lobular structure, inhibit the expression of TGF- 尾 protein and decrease the activation of hepatic stellate cells.
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學院醫(yī)學檢驗系臨床檢驗診斷學教研室;
【基金】：安徽省教育廳重點項目(No.KJ2012A198)基金資助
【分類號】：R575.2

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本文編號：2259539