【摘要】：魚油中的二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)多不飽和脂肪酸具有多種生物活性,例如調(diào)節(jié)血脂、改善記憶力、調(diào)節(jié)脂代謝、增強免疫等功效。目前由于多數(shù)針對于非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver diseases,NAFLD)治療的研究都是采用EPA和DHA的混合物如魚油膠囊或者含有的魚油飲食而不是單一的脂肪酸EPA和DHA,所以仍舊不清楚EPA和DHA對NAFLD是否有獨立的生理活性而,這兩種多不飽和脂肪酸EPA和DHA可能對NAFLD產(chǎn)生截然的不同的效果。并且這些研究大部分采用的的是市場上比較多的乙酯型或者游離型的n-3多不飽和脂肪酸(Omega-3 polyunsaturated fatty acids,n-3PUFA),但乙酯型的吸收率僅為2l%,游離型的EPA和DHA雖然吸收率為95%,但容易氧化,很不穩(wěn)定,且對消化道有刺激作用。甘油酯型是魚油的天然存在形式,符合人體吸收的油脂形式,其人體吸收率明顯高于乙酯型魚油,吸收可以達(dá)到60%左右,性質(zhì)相對穩(wěn)定。本實驗室采用酶法制備了高純度甘油三酯型EPA(trieicosapentaenoyl glycerol,tri EPA)和DHA(tridocosahexaenoyl glycerol,tri DHA),兩者純度純度都達(dá)到了80%。本論文以上兩種高純度魚油為研究對象,采用小鼠為動物模型探究了其對NAFLD的調(diào)節(jié)作用,并探討其治療機制。通過在飼料中添加1%的膽固醇和20%的飽和長鏈脂肪酸建立小鼠NAFLD的模型,研究tri EPA和tri DHA對小鼠非酒精性脂肪的治療作用。結(jié)果顯示,tri EPA和tri DHA補充高脂飼料誘導(dǎo)的NAFLD模型小鼠8w后,顯著降低了小鼠的肝重系數(shù)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase,ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transferase,AST)活性,血清游離脂肪酸(Free fatty acids,FFA)含量,顯著降低胰島素指數(shù),顯著降低了肝臟總甘油三脂(Total triglyceride,TG)和總膽固醇(Total cholesterol,TC)水平,顯著降低肝臟的脂變程度。由此,tri EPA和tri DHA能夠減輕胰島素抵抗,減少肝臟脂肪堆積,NAFLD有積極的預(yù)防和改善作用,而兩者在這些方面并未出現(xiàn)顯著性差異。維生素E(α-生育酚,a-tocopherol)作為天然的抗氧化劑能夠清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化作用。為進(jìn)一步加強tri EPA和tri DHA對小鼠NAFLD脂肪肝的治療效果,在本次研究中小鼠額外加入維生素E。結(jié)果顯示,補充8w后,相對于tri EPA,tri DHA對肝臟谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的提高更明顯,具有更好的抗氧化能力。相對于n-3 PUFA,n-3 PUFA+維生素E補充液對小鼠GSH、GSH-Px和SOD(超氧化物歧化酶,Superoxide dismutase)均有顯著提高,ALT和AST顯著降低。在其他指標(biāo)上未存在顯著性差異。單獨維生素E的補充并未改善以上指標(biāo)而與模型組較為接近,但維生素E可與n-3 PUFA協(xié)同治療NAFLD。進(jìn)一步了解n-3 PUFA對小鼠NAFLD的治療機理,本論文研究了tri DHA和tri EPA對小鼠肝臟脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)以及脂肪酸組成的的影響。RT-PCR結(jié)果顯示,補充tri EPA和tri DHA的小鼠,肝臟SREBP-1c表達(dá)量顯著下降,但PPARα并未顯著性升高,說明tri EPA和tri DHA并未在PPARα轉(zhuǎn)錄水平上其改善作用,但有研究顯示PUFA主要是通過結(jié)合PPARα,改變其構(gòu)象使其對應(yīng)的調(diào)控的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物提高。肝臟脂肪酸組成分析顯示,肝臟脂肪酸中多不飽和脂肪酸總量明顯提高,而花生四烯酸含量顯著下降。tri EPA和tri DHA補充組的DHA含量顯著高于EPA含量,因此tri EPA和tri DHA可通過調(diào)節(jié)肝臟脂肪酸組成和脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)來改善小鼠NAFLD,而EPA可能主要作為DHA的合成的前體。
[Abstract]:Eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA) polyunsaturated fatty acids in fish oil have a variety of biological activities, such as regulating blood lipids, improving memory, regulating lipid metabolism, and enhancing immune function. Both EPA and DHA have been studied in combination with fish oil capsules or diets containing fish oil rather than single fatty acids EPA and DHA, so it is still unclear whether EPA and DHA have independent physiological activity to NAFLD and the two polyunsaturated fatty acids EPA and DHA may have distinct effects on NAFLD. Most of these studies were carried out using ethyl-3 polyunsaturated fatty acids (Omega-3 polyunsaturated fatty acids, n-3PUFA), which were widely used in the market. However, the absorptivity of ethyl-3 polyunsaturated fatty acids (EPA and DHA) was only 2 l%. Although the absorptivity of EPA and DHA was 95%, they were easily oxidized, unstable and irritating to the digestive tract. Glycerol ester is a natural form of fish oil, which conforms to the form of oil absorbed by human body. The absorption rate of glycerol ester is higher than that of ethyl ester fish oil. The absorption rate of glycerol ester can reach about 60% and its properties are relatively stable. High purity EPA (trieicosapentaenoyl glycerol, tri EPA) and DHA (tridocosahexaenoyl glycerol) were prepared by enzymatic method in our laboratory. Rol, tri DHA, the purity of both reached 80%. In this paper, the above two kinds of high purity fish oil as the research object, using mice as animal models to explore its regulatory effect on NAFLD, and explore its therapeutic mechanism. By adding 1% cholesterol and 20% saturated long-chain fatty acids in the diet to establish mice NAFLD model, tri EPA and t were studied. The results showed that tri-EPA and tri-DHA supplementation significantly decreased the liver weight coefficient, the activities of serum Alanine transaminase (ALT) and aspartate transferase (AST), and serum free fatty acid (Free fatty acid) in NAFLD mice induced by high-fat diet for 8 weeks. The contents of CIDS and FFA decreased the insulin index, the levels of total triglyceride (TG) and total cholesterol (TC) in the liver, and the degree of hepatic steatosis. Vitamin E (a-tocopherol) as a natural antioxidant can scavenge free radicals and inhibit lipid peroxidation. In order to further enhance the therapeutic effect of tri EPA and tri DHA on NAFLD fatty liver in mice, vitamin E was added to the mice in this study. Compared with tri-EPA, tri-DHA had more significant effects on liver glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione (GSH) and had better antioxidant capacity. Compared with n-3 PUFA, n-3 PUFA + vitamin E supplement, tri-DHA had better antioxidant capacity on mice GSH, GSH-Px and SOD (superoxide dismutase, Superoxide dismu). There was no significant difference in other indicators. Vitamin E supplementation alone did not improve the above indicators, but vitamin E and n-3 PUFA could cooperate in the treatment of NAFLD. To further understand the mechanism of n-3 PUFA in the treatment of NAFLD in mice, tri DHA and tri EPA were studied in this paper. The results of RT-PCR showed that the expression of SREBP-1c in liver of tri-EPA and tri-DHA supplemented mice decreased significantly, but PPARa did not increase significantly, indicating that tri-EPA and tri-DHA did not improve the transcription of PPARa, but some studies showed that PUFA was mainly PUFA. The content of polyunsaturated fatty acids in liver fatty acids was significantly increased, while the content of arachidonic acid was significantly decreased. The content of DHA in tri EPA and tri DHA supplementation groups was significantly higher than that in EPA, so tri EPA and tri DHA could pass through. Mouse NAFLD was improved by regulating fatty acid composition and lipid metabolism related gene expression in liver, and EPA may be the main precursor of DHA synthesis.
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.5

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本文編號：2212608