【摘要】：目的:Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)被定義為食管復(fù)層鱗狀上皮被單層柱狀上皮所取代的病理現(xiàn)象。BE是胃食管反流病(Gastroesophageal reflex disease,GERD)的并發(fā)癥,與食管腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。它已經(jīng)被公認(rèn)為是食管腺癌最重要的癌前病變,其發(fā)展為食管腺癌的危險(xiǎn)性高達(dá)正常人的30~50倍[1]。目前抑酸治療對(duì)反流性食管炎治療有效,從而減少BE的發(fā)生。這提示酸性刺激在BE的發(fā)生過(guò)程中起到重要作用,但其具體發(fā)生機(jī)制目前尚不清楚,因此本課題擬通過(guò)研究酸性刺激如何促進(jìn)BE發(fā)生的作用機(jī)制,為BE的臨床治療靶點(diǎn)提供理論支持。方法:1.鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)不同pH值及阻斷劑對(duì)SHEE細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化。2.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)正常人食管下段粘膜和Barrett食管下段病變粘膜中CDX2、TRPC6的表達(dá)情況。3.免疫印跡法檢測(cè)pH處理24小時(shí)以后HEEC細(xì)胞株中CDX2、TRPC6的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.鈣離子成像技術(shù)結(jié)果顯示:(1)與對(duì)照組(pH 7.4)比較,在pH值為7.0、6.5、6.0時(shí),SHEE細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平無(wú)明顯差異(P0.05),在pH值為5.5、5.0時(shí),SHEE細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)加入細(xì)胞內(nèi)鈣螯合劑BAPTA-AM和TRPC6阻斷劑SKF96365后,SHEE細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高被顯著抑制(P0.05)。2.免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示:CDX2、TRPC6在正常食管粘膜組織和BE食管粘膜組織中均有表達(dá),與正常食管粘膜組(NE)比較,Barrett食管粘膜組(BE)中的表達(dá)水平均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且CDX2與TRPC6在BE中的表達(dá)具有相關(guān)性。3.免疫印跡結(jié)果顯示:pH值為5.5處理HEEC細(xì)胞24小時(shí)后與對(duì)照組(pH 7.2)相比TRPC6和CDX2蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05),加入阻斷劑BAPTA-AM和SKF96365后,CDX2與TRPC6蛋白增加被顯著抑制(P0.05)。結(jié)論:酸暴露激活TRPC6通道,使細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平升高,進(jìn)而上調(diào)CDX2的表達(dá),促進(jìn)Barrett食管的發(fā)生。
[Abstract]:Objective to define Barrett's Barrett's esophagus (Barrett's esophagus be) as a pathological phenomenon in which esophageal squamous epithelium is replaced by monolayer columnar epithelium. Be is a complication of (Gastroesophageal reflex disease of gastroesophageal reflux disease and is closely related to the occurrence of esophageal adenocarcinoma. It has been recognized as the most important precancerous lesion of esophageal adenocarcinoma. Acid suppression therapy is effective for reflux esophagitis, thus reducing the incidence of be. This suggests that acid stimulation plays an important role in the development of be, but its specific mechanism is not clear, so this paper intends to study the mechanism of acid stimulation to promote the occurrence of be. To provide theoretical support for the clinical target of be. Method 1: 1. Calcium ion imaging technique was used to detect the changes of calcium ions in SHEE cells with different pH values and blockers. Immunohistochemical method was used to detect the expression of CDX2 / TRPC6 in the lower esophageal mucosa of normal subjects and the lesion mucosa of Barrett's lower esophagus. The protein expression of CDX2 and TRPC6 in HEEC cells was detected by Western blotting after 24 hours of pH treatment. The result is 1: 1. The results of calcium imaging showed that: (1) compared with the control group (pH 7.4), there was no significant difference in the intracellular calcium level in SHEE cells at pH 7.0 ~ 6.5 ~ 6.0 (P0.05), but the intracellular calcium level in SHEE cells was significantly increased at pH 5.55 ~ 5.0. The difference was statistically significant (P0.05); (2) after the addition of intracellular calcium chelator BAPTA-AM and TRPC6 blocker SKF96365, the increase of intracellular calcium ion concentration was significantly inhibited (P0.05). 2. The results of immunohistochemistry showed that the expression of (BE) in the normal esophageal mucosa and be esophageal mucosa was significantly higher than that in the normal esophageal mucosa group and in the be esophageal mucosal tissue, compared with the normal esophageal mucosa group, the expression of (BE) in the normal esophageal mucosa group was significantly higher than that in the normal esophageal mucosa group. The difference was statistically significant (P0.05), and the expression of CDX2 and TRPC6 in be was related. 3. The results of Western blot showed that the expression of TRPC6 and CDX2 protein was up-regulated 24 hours after the treatment of HEEC cells with a pH value of 5.5 (P0.05), and the increase of CDX2 and TRPC6 protein was significantly inhibited by the addition of BAPTA-AM and SKF96365 (P0.05). Conclusion: acid exposure activates TRPC6 channels, elevates intracellular calcium level, upregulate the expression of CDX2 and promote the development of Barrett esophagus.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R571

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本文編號(hào)：2181988