本文關(guān)鍵詞：AMPK和SIRT-1參與定時(shí)高脂飲食對(duì)小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2015年

AMPK和SIRT-1參與定時(shí)高脂飲食對(duì)小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究

黃艷  

【摘要】：目的:觀察定時(shí)高脂飲食對(duì)高脂性脂肪肝小鼠肝臟生物鐘基因及其脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響,并探討其可能的機(jī)制。方法:選用雄性昆明種小鼠,嚴(yán)格控制明/暗條件(8:00-20:00/20:00-次日8:00),以晚上(19:00)定時(shí)給予高脂飲食6周復(fù)制高脂性脂肪肝小鼠模型,然后分別在不同授時(shí)時(shí)相(8:00、12:00、16:00、20:00、24:00和4:00)處置實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,用比色法測(cè)定肝組織中總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)和氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)含量;用光鏡檢查肝組織的形態(tài)學(xué)變化;用ELISA法測(cè)定肝組織中AMP依賴的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)含量;用Real-time PCR法檢測(cè)肝組織中生物鐘基因Clock、Bmal1、Per1-2和Cry1-2,以及過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)α、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子-1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1,PGC-1)α、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、二脂酰甘油�；D(zhuǎn)移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGAT)2、乙酰輔酶A羧化酶-1(acetyl-Co A carboxylase-1,ACC-1)α、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)和煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT)m RNA表達(dá)的情況;用Western blot法測(cè)定肝組織中AMPK、p-AMPK、沉默信息調(diào)節(jié)因子-1(silent information regulator of transcription 1,SIRT-1)、Cry2和Per2的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:在晚上定時(shí)給予高脂飲食6周后,可見小鼠肝組織中有大量的脂質(zhì)空泡形成,測(cè)得的肝組織中TC、TG和FFA含量在不同時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的升高,而且與正常對(duì)照組相比,TC含量的變化較平緩,但在光照期間有明顯的幅度增加;TG含量亦以光照期間升高幅度更為明顯,于12:00達(dá)到峰值;FFA含量則未見有明顯的節(jié)律改變。Real-time PCR測(cè)定結(jié)果顯示,脂質(zhì)代謝相關(guān)基因PPARα、PGC-1α、LPL、DGAT2、ACC-1α和CPT-1 m RNA表達(dá)在節(jié)律和/或振幅上有明顯改變,而肝臟生物鐘基因Clock、Bmal1、Per1-2和Cry2 m RNA表達(dá)的量也有明顯的改變。Western blot測(cè)得Per2和Cry2蛋白表達(dá)在振幅上也發(fā)生了明顯的變化。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),晚上定時(shí)給予高脂飲食6周后,小鼠肝組織中平均AMPK和p-AMPK蛋白表達(dá)均降低。與正常對(duì)照組相比,高脂飲食組的AMPK峰值延遲了8 h,振幅在12:00和20:00有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而p-AMPK在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與正常對(duì)照組比較,則在12:00明顯降低,在20:00顯著增加。晚上定時(shí)高脂飲食也可以使肝組織中NAMPT m RNA、NAD+含量和SIRT-1蛋白表達(dá)在節(jié)律和/或振幅上發(fā)生明顯的改變。結(jié)論:小鼠晚上定時(shí)高脂飲食會(huì)改變肝臟內(nèi)部分生物鐘基因的表達(dá),以及一些脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá),從而導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)的增加,這可能部分與肝臟中能量感受器AMPK和SIRT-1節(jié)律改變介導(dǎo)的生物鐘基因Cry2和Per2蛋白降解后使其對(duì)Clock/Bmal 1的負(fù)反饋?zhàn)饔脺p弱有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

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