本文關(guān)鍵詞：大鼠早期肝纖維化模型的建立及其活化肝星狀細(xì)胞磁共振顯像的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2014年

大鼠早期肝纖維化模型的建立及其活化肝星狀細(xì)胞磁共振顯像的實(shí)驗(yàn)研究

張維  

【摘要】：目的：采用SD大鼠皮下注射四氯化碳（CCl4）法，建立大鼠早期肝纖維化模型，為肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究提供可靠的動(dòng)物模型；探討以抗α5β1整合素受體單克隆抗體修飾的超微型超順磁性氧化鐵納米顆粒（ultrasmall superparamagnetic iron oxide, USPIO）作為特異性分子探針(α5β1-USPIO)，對(duì)大鼠早期肝纖維化活化肝星狀細(xì)胞（hepaticstellate cells, HSCs）進(jìn)行活體內(nèi)磁共振靶向分子顯像的可行性。 材料和方法：（1）大鼠建模：30只大鼠經(jīng)腹部皮下注射40%CCl4油溶液作為建模組，劑量為3ml/kg體重，每周2次，持續(xù)3周，首次劑量為5ml/kg體重，純凈水作為飲用水。10只大鼠經(jīng)腹部皮下注射生理鹽水作為對(duì)照組，劑量及用法同建模組。（2）分子探針構(gòu)建：將抗α5β1整合素受體單克隆抗體與表面包被有羧基(-COOH)的USPIO通過碳二亞胺法偶聯(lián)形成α5β1-USPIO特異性分子探針。（3）大鼠分組實(shí)驗(yàn)：末次注射CCl4油溶液3天后，從建模組和對(duì)照組分別隨機(jī)抽取12只、4只大鼠進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)研究，其余大鼠處死并取肝臟行病理組織學(xué)檢查（HE染色、Masson染色及網(wǎng)狀纖維染色）及透射電子顯微鏡檢查。12只建模組大鼠隨機(jī)分為三組（每組4只），分別經(jīng)股靜脈置管注射100μmol鐵/kg體重的α5β1-USPIO（α5β1-USPIO建模組）、單純USPIO（USPIO建模組）和抗α5β1整合素受體單克隆抗體（α5β1建模組）；4只對(duì)照組大鼠注射相同劑量的α5β1-USPIO（α5β1-USPIO對(duì)照組）。（4）MR檢查及分析：大鼠麻醉后，分別于注射前及注射后4h行肝臟MR掃描，計(jì)算并比較各組內(nèi)及各組間注射前與注射后4h大鼠肝臟與肌肉對(duì)比噪聲比(contrast-to-noise ratio, CNR)。（5）病理組織學(xué)檢查：MR掃描結(jié)束后處死大鼠，取肝臟組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查（HE染色、Masson染色、網(wǎng)狀纖維染色及普魯士藍(lán)染色）及透射電子顯微鏡檢查。 結(jié)果：（1）建模情況：建模組共有24只大鼠完成實(shí)驗(yàn)，死亡6只，死亡率為20%。建模組大鼠均出現(xiàn)營養(yǎng)不良、慢性肝病癥狀。大鼠肝臟病理組織學(xué)檢查見肝細(xì)胞變性、壞死，膠原及網(wǎng)狀纖維增生等改變。根據(jù)Ishak肝纖維化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，建模組大鼠均處于早期肝纖維化階段。對(duì)照組10只全部存活，無相應(yīng)癥狀且無肝纖維化。（2）大鼠肝臟MR信號(hào)變化：注射試劑后4h MR掃描顯示，，α5β1-USPIO建模組、α5β1-USPIO對(duì)照組及USPIO建模組大鼠肝臟信號(hào)強(qiáng)度均呈不同程度降低，且以α5β1-USPIO建模組肝臟信號(hào)強(qiáng)度降低最為明顯；而α5β1建模組大鼠肝臟信號(hào)強(qiáng)度無明顯改變。（3）大鼠肝臟與肌肉CNR分析：各組大鼠肝臟與肌肉CNR注射試劑前及注射后4h分別為：α5β1-USPIO建模組：44.63±1.61和255.74±18.3；α5β1-USPIO對(duì)照組：45.37±1.87和175.51±12.49；USPIO建模組：44.56±2.08和157.96±13.72；α5β1建模組：44.82±1.39和45.46±8.24。α5β1-USPIO建模組、α5β1-USPIO對(duì)照組、USPIO建模各組注射前與注射后4h大鼠肝臟與肌肉CNR比較差異均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），而α5β1建模組注射前與注射后4h大鼠肝臟與肌肉CNR比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.45, P=0.24）。各組大鼠注射試劑后4h肝臟與肌肉對(duì)比噪聲比（CNR）以α5β1-USPIO建模組最高，α5β1-USPIO對(duì)照組、USPIO建模組及α5β1建模組依次減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組間進(jìn)一步兩兩比較：α5β1-USPIO對(duì)照組與USPIO建模組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.094），其余各組間比較差異均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。（4）大鼠肝臟病理組織學(xué)檢查：普魯士藍(lán)染色顯示：α5β1-USPIO建模組大鼠肝臟藍(lán)染的鐵顆粒主要分布于竇周間隙（Disse間隙）內(nèi)，與肝星狀細(xì)胞分布一致；透射電子顯微鏡（TEM）檢查顯示：α5β1-USPIO建模組大鼠肝臟星狀細(xì)胞內(nèi)可見含鐵顆粒的溶酶體，而α5β1-USPIO對(duì)照組和USPIO建模組大鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi)均未見含鐵顆粒的溶酶體。 結(jié)論：采用皮下注射CCl4油溶液法可以成功建立大鼠早期肝纖維化模型。早期肝纖維化活化的HSCs能特異性吞噬分子探針α5β1-USPIO。應(yīng)用1.5T MR成像系統(tǒng)和靶向作用于HSCs表面α5β1整合素的特異性分子探針α5β1-USPIO，能夠?qū)崿F(xiàn)活體內(nèi)早期肝纖維化活化HSCs的磁共振靶向分子顯像。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.2;R445.2
【目錄】：

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5 王海燕;運(yùn)動(dòng)對(duì)SD大鼠與GK大鼠骨骼肌中COUP-TF Ⅰ與COUP-TFⅡ基因表達(dá)的影響[D];華東師范大學(xué);2010年

6 吉星;知母提取物的成分分析及對(duì)T2DM大鼠干預(yù)代謝組學(xué)初探[D];廣東藥學(xué)院;2010年

7 曾志;促紅細(xì)胞生成素對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)保護(hù)作用的研究[D];暨南大學(xué);2011年

8 汪春彥;金蕎麥對(duì)克雷伯桿菌肺炎大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

9 王媛媛;胡蘆巴總皂苷對(duì)大鼠脂肪肝的預(yù)防作用[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2005年

10 徐莉;康復(fù)訓(xùn)練對(duì)腦梗死大鼠大腦可塑性機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

  本文關(guān)鍵詞：大鼠早期肝纖維化模型的建立及其活化肝星狀細(xì)胞磁共振顯像的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：213870