【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是多向分化潛能的非造血祖細(xì)胞,可以分化成多種組織細(xì)胞。除了分化功能外,MSC可以抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞的激活和增殖并且可以影響DC細(xì)胞的成熟。臍帶來源的MSC由于其原始性、高擴(kuò)增率、高分化能力、易獲取、無倫理爭論和菌污染機(jī)會(huì)小等優(yōu)勢,所以更具基于細(xì)胞治療發(fā)展?jié)摿�。已�?bào)道,MSC在體外和體內(nèi)都具有免疫抑制功能,可治療多種疾病尤其是有關(guān)免疫反應(yīng)的組織損傷。有趣的是,許多研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ影響MSC的功能,如增加IDO的表達(dá)及增強(qiáng)MSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用、增加趨化因子受體,細(xì)胞間和血管粘附分子的表達(dá)、增加IDO的表達(dá)量進(jìn)而影響MSC的分化和單核細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、減弱MSC對(duì)NK細(xì)胞的敏感性和在異體移植中受體對(duì)移植物的拮抗,但是高表達(dá)IFN-γ對(duì)MSC的免疫調(diào)節(jié)功能的影響還沒有被闡述。我們假設(shè),利用IFN-γ基因修飾MSC,使其成為高表達(dá)IFN-γ的MSC,可能有望改善MSC的免疫抑制功能。因此,本研究進(jìn)行了高表達(dá)IFN-γ的MSC (IFN-γ-MSC)構(gòu)建,并分析了IFN-γ-MSC對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型中的免疫細(xì)胞作用及療效。我們首先成功構(gòu)建了pcDNA3.1-IFNγ質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)染進(jìn)第5代MSC來進(jìn)行基因修飾,檢測了轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后的MSC的表面抗原。結(jié)果表明,pcDNA3.1-IFNγ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MSC (IFN-y-MSC)不僅高表達(dá)IFN-y,而且高表達(dá)CD44、CD90、 CD105 (SH2)和CD73 (SH3)等抗原,低表達(dá)CD45、CD14、CD34和CD31等造血干細(xì)胞表型抗原,這些結(jié)果提示,高表達(dá)IFN-γ的MSC構(gòu)建成功。我們還分析了轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-IFNγ對(duì)MSC的活力、凋亡、周期及增殖的影響,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-IFNγ沒有明顯影響MSC的基本性狀。進(jìn)一步我們分析了轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-IFNγ的MSC對(duì)T細(xì)胞的免疫抑制功能的影響,我們利用淋巴細(xì)胞分離液從正常健康人的外周血中獲得PBMC后與MSC共同培養(yǎng),MSC和PBMC以1：10和1：60的比例共同鋪于96孔板中,200ul/孔,3天后用3H參入法檢測T細(xì)胞的增殖情況,將PHA (2.5g/ml)刺激的PBMC作為實(shí)驗(yàn)組,沒有經(jīng)過刺激的PBMC作為陰性對(duì)照組。結(jié)果顯示當(dāng)MSC/PBMC為1：10時(shí),高表達(dá)IFN-γ的MSC對(duì)T細(xì)胞具有明顯的抑制作用。其次,我們分析了高表達(dá)IFN-γ的MSC對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型中的免疫細(xì)胞作用及療效。根據(jù)已有報(bào)道,在C57BL/6小鼠的飲用水中融入DSS(3% W/V)連續(xù)7天給藥即可誘導(dǎo)腸炎模型。DSS誘導(dǎo)的腸炎模型在形態(tài)和生化方面有明顯特征如DSS模型組小鼠結(jié)腸縮短、小鼠體重減輕、腹瀉、便血、精神不振等明顯癥狀；在組織學(xué)中結(jié)腸隱窩損壞、粘膜層損壞、潰瘍、炎性細(xì)胞侵潤等癥狀。對(duì)于DSS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型,當(dāng)?shù)诙煳察o脈注射經(jīng)過不同處理的MSC進(jìn)行治療時(shí),發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-IFNγ的MSC可明顯緩解在實(shí)驗(yàn)過程中的小鼠體重減輕、明顯增加結(jié)腸的長度、降低炎癥活性指標(biāo)(DAI)以及改善小腸的組織結(jié)構(gòu)。還發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-IFNγ的MSC可提高模型小鼠腸系膜淋巴結(jié)和脾臟中的Treg細(xì)胞比例和脾臟中Th2細(xì)胞數(shù)量,明顯抑制結(jié)腸組織的炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表達(dá)。這些結(jié)果提示,IFN-γ基因修飾的MSC具有較強(qiáng)的免疫抑制功能。綜上所述,本研究成功構(gòu)建了高表達(dá)IFN-γ的MSC；發(fā)現(xiàn)高表達(dá)IFN-γ的MSC (IFN-γ-MSC)可明顯抑制T細(xì)胞增殖及具有較強(qiáng)地改善DSS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型癥狀的功能。本研究將為進(jìn)一步利用基因修飾MSC且使其更加適用于相關(guān)疾病的治療提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:In addition to the differentiation function , the MSCs can inhibit the activation and proliferation of T cells and B cells and can influence the maturation of DC cells . The results showed that when MSC / PBMC was 1 : 10 , the effect of IFN - 緯 - stimulated PBMC on T - cells was inhibited . The results showed that when MSC / PBMC was 1 : 10 , the high - expression of IFN - 緯 could induce enteritis model . The DSS - induced enteritis model had obvious characteristics in morphology and biochemistry such as shortened colon of mouse in DSS model group , weight loss in mice , diarrhea , hematochezia , and mental invibration .
It was found that MSCs transfected with pcDNA3.1 - IFN緯 could obviously alleviate the weight loss of mouse body weight , increase the length of colon , decrease the inflammatory activity index ( DAI ) and improve the structure of small intestine .
It was found that MSC ( IFN - 緯 - MSC ) with high expression of IFN - 緯 could significantly inhibit the proliferation of T cells and the ability to improve the symptoms of DSS - induced colitis model . This study provides a theoretical basis for further utilization of genetically modified MSC and making it more suitable for treatment of related diseases .
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R574

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2119784