本文選題：酒精 + 脂肪性肝病　； 參考：《河北醫(yī)科大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的:酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是一種由于長期大量飲酒引起的中毒性肝臟疾病,肝臟病理改變最初表現(xiàn)為肝細胞脂肪變性,其后發(fā)展為肝炎、肝纖維化,最終出現(xiàn)肝硬化。酒精性脂肪性肝病(alcohol fatty liver disease,AFLD)是ALD的早期表現(xiàn)。課題組應(yīng)用酒精灌胃建立大鼠AFLD模型,發(fā)現(xiàn)其發(fā)病機理主要是脂質(zhì)代謝紊亂導(dǎo)致大量脂質(zhì)沉積于肝細胞,從而引起肝細胞脂肪變性。大量研究表明叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)參與脂質(zhì)代謝及氧化應(yīng)激。FoxO1受轉(zhuǎn)錄后修飾(磷酸化、乙酰化、泛素化等)關(guān)聯(lián)的亞細胞定位調(diào)節(jié)。定位于細胞核內(nèi)的FoxO1,能結(jié)合相應(yīng)的DNA序列,調(diào)控下游分子的表達。微粒體TG轉(zhuǎn)運蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP)及脂聯(lián)素受體2(adiponectin recpetor 2,AdipoR2)受FoxO1的調(diào)控。課題組前期發(fā)現(xiàn)酒精抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)的活性,并選擇性抑制脂聯(lián)素受體2(adiponectin recpetor 2,AdipoR2)的表達。Fox O1可能是SIRT1與AdipoR2連接樞紐,酒精抑制SIRT1的活性,導(dǎo)致FoxO1的去乙�；瘻p少,乙酰化增多,從而使其定位于細胞質(zhì)增多、核定位減少,削弱FoxO1的DNA結(jié)合能力,減弱其轉(zhuǎn)錄活性,導(dǎo)致AdipoR2的表達減少,造成其下游一系列脂代謝過程紊亂。微粒體TG轉(zhuǎn)運蛋白(microsomal triglyceride transfer protein,MTP作為FoxO1的下游蛋白,在極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)的組裝與分泌中起著重要作用,參與脂質(zhì)向細胞外的轉(zhuǎn)運。酒精引起FoxO1的轉(zhuǎn)錄活性減弱可能造成MTP的表達變化,導(dǎo)致肝細胞內(nèi)脂肪沉積。研究通過酒精灌胃法建立大鼠AFLD的模型,應(yīng)用分子生物學方法探討FoxO1及其下游蛋白MTP在不同時間段的表達情況,探索FoxO1在AFLD中的作用。方法:選用健康雄性Wister大鼠50只,體重200±20g,正常飼養(yǎng)7天,隨機分出10只為正常對照組(即0周),余40只用酒精灌胃,于第4周末隨機處死大鼠10只、8周末9只、12周末8只、16周末8只;處死后立即取出肝組織,剪取部分肝組織給予10%福爾馬林液固定,過夜后石蠟包埋切片,剩余肝組織經(jīng)液氮速凍后置于-80℃冰箱。應(yīng)用實時熒光定量聚合酶連反應(yīng)(realtime-quantitativepolymerasechainreaction,rt-qpcr)檢測foxo1mrna的表達,應(yīng)用免疫沉淀法提取乙酰化蛋白,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(westernblot)檢測foxo1總蛋白、乙酰化foxo1蛋白及mtp表達水平。應(yīng)用免疫組化比較細胞質(zhì)及細胞核內(nèi)foxo1的表達情況。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。結(jié)果:1肝臟組織病理學改變:應(yīng)用蘇丹Ⅳ染色法顯示,正常對照組(0周組)未見脂肪變,隨著造模時間延長,肝細胞橘紅色脂滴逐漸增多,提示大鼠酒精性脂肪性肝病模型造模成功。免疫組化法檢測肝細胞foxo1的表達:對照組及造模早期(4周組),foxo1的表達量少,隨著造模時間的延長,foxo1表達量逐漸增多,尤其在細胞質(zhì)的表達增加顯著(見fig.1-5)。2rt-qpcr法檢測foxo1mrna的表達:正常組大鼠肝細胞中foxo1mrna表達較少,隨著酒精喂養(yǎng)時間的延長,foxo1mrna表達成逐漸增多趨勢(見fig.7及table2)。3westrenblot法檢測總foxo1蛋白的表達:正常組大鼠肝細胞中總foxo1蛋白表達較少,造模前期,總foxo1蛋白的表達量增多不明顯,(0周與4周組比較p0.05,無統(tǒng)計學差異),8周后總foxo1蛋白量呈逐漸增多趨勢(見fig.6、fig.8及table3)。4為進一步探究foxo1的活性,應(yīng)用westrenblot法檢測ac-foxo1蛋白的表達:正常組大鼠肝細胞中ac-foxo1蛋白表達較少,隨著酒精造模時間的延長,ac-foxo1蛋白量逐漸增多,且foxo1的乙�；�(ac-foxo1/總foxo1)呈逐漸升高趨勢(見fig.6、fig.10及table4)。5westrenblot法檢測mtp蛋白的表達:正常組大鼠肝組織中表達mtp較多,隨著酒精造模時間的延長,其表達量呈逐漸減少趨勢(見fig.6、fig.9及table3)。結(jié)論:在大鼠酒精性肝病模型中,酒精抑制foxo1-mtp通路導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細胞內(nèi)沉積,這可能是afld發(fā)生的重要機制之一。
[Abstract]:Objective : Liver disease ( ALD ) is a kind of medium - toxic liver disease caused by long - term drinking alcohol . The pathological changes of liver were initially characterized by fatty degeneration of hepatocytes . It was found that the pathogenesis of alcoholic fatty liver disease ( AFLD ) was the early manifestation of ALD . The expression of foxo1 was detected by means of immunohistochemistry . The expression of foxo1 was detected by immunohistochemistry . The expression of foxo1 was detected by immunohistochemistry . The expression of foxo1 was detected by immunohistochemistry . The expression of foxo1 was increased significantly ( see fig . 1 - 5 ) . In the normal group , the expression of the total foxo1 protein was significantly increased ( see fig . 6 , fig . 8 and table3 ) . In the normal group , the expression of ac - foxo1 protein was gradually increased ( see fig . 6 , fig . 10 and table3 ) . Conclusion : In the rat model of alcoholic liver disease , the inhibition of foxo1 - mtp pathway by alcohol can lead to the deposition of lipids in hepatocytes , which may be one of the important mechanisms of afld .
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 聶尚燕;周俊英;;沉默信息調(diào)節(jié)因子1在酒精性脂肪性肝病發(fā)病機制中的作用[J];中華肝臟病雜志;2014年09期

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本文編號：2005031