本文選題：腸易激綜合征 + 三硝基苯磺酸　； 參考：《鄭州大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：背景 腸易激綜合征（IBS）是一種臨床以腹痛、腹脹、排便習(xí)慣改變?yōu)樘攸c(diǎn)的功能性胃腸道疾病，其病理生理機(jī)制仍不明確。全球范圍內(nèi)IBS總患病率為5%～25%，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家患病率為10%～15%，發(fā)病率為15%～20%。亞洲國(guó)家的IBS患病率在5%～10%之間，各地區(qū)報(bào)道IBS的患病率差異較大，而發(fā)病率為5%～10%，近年來呈上升趨勢(shì)，尤其在我國(guó)差異尤為明顯。研究顯示，影響IBS發(fā)病的危險(xiǎn)因素主要包括社會(huì)心理因素、遺傳、感染、食物藥物因素等。目前，IBS的病因和發(fā)病機(jī)制尚未明了，一個(gè)有效而穩(wěn)定的動(dòng)物模型是進(jìn)行基礎(chǔ)研究的重要因素。腸易激綜合征(IBS)的發(fā)病機(jī)理尚不清楚。CD4+T細(xì)胞被認(rèn)為參與IBS的致病過程。益生菌可以緩解IBS患者臨床癥狀。越來越多的證據(jù)表明腸道微生物是IBS重要的致病機(jī)制之一。研究證實(shí)腸腔內(nèi)的微生物定植、腸上皮屏障和腸道免疫系統(tǒng)相互影響。小腸和結(jié)腸緊密連接蛋白表達(dá)降低，導(dǎo)致腸道通透性增加已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)。 目的 利用三硝基苯磺酸(TNBS)結(jié)腸灌注成功誘導(dǎo)出內(nèi)臟過敏、腸道黏膜通透性、腸道免疫功能紊亂的IBS小鼠模型。研究以CD4+T細(xì)胞為代表，以及CD4+T細(xì)胞分化異常等的腸道免疫系統(tǒng)紊亂在腸易激綜合征（IBS）的病理生理機(jī)制重要作用。評(píng)價(jià)酪酸桿菌如何降低腸道內(nèi)臟高敏狀態(tài)、減輕腸道免疫系統(tǒng)紊亂和降低腸道通透性的干預(yù)的作用。 方法 ①C57BL/6雄性6周齡小鼠共70只，隨機(jī)分為3組。實(shí)驗(yàn)組（n=10）一次性TNBS結(jié)腸灌注，誘導(dǎo)IBS小鼠模型，每次200μl（2.5mg/只）。對(duì)照組（n=20）小鼠TNBS結(jié)腸灌注后等體積生理鹽水灌腸。酪酸桿菌組（n=20），TNBS造模前2小時(shí)，酪酸桿菌灌胃每次500μL（活菌濃度1×109CFU/ml）每天1次，連續(xù)6天。同時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)菌株組（n=20）使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（E. coli）對(duì)照評(píng)價(jià)益生菌的作用。檢測(cè)生理指標(biāo)、結(jié)腸高敏狀態(tài)、腸道病理損傷程度,評(píng)價(jià)IBS模型。分離腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IELs)和固有層單核細(xì)胞（LPMC），流式分析，進(jìn)一步評(píng)價(jià)IBS模型小鼠腸道免疫功能異常激活和紊亂狀態(tài)及酪酸桿菌對(duì)腸道免疫系統(tǒng)紊亂的調(diào)節(jié)作用。 ②CD4-KO小鼠均一次性結(jié)腸灌注TNBS，同時(shí)分別進(jìn)行生理鹽水、益生菌（酪酸桿菌）等體積灌胃干預(yù)。C57BL/J6小鼠作為野生型對(duì)照。在24天,結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)評(píng)估痛覺閾值改變情況。流式分析外周血T細(xì)胞水平變化情況，固有層巨噬細(xì)胞和記憶T細(xì)胞分布改變情況。過繼轉(zhuǎn)移CD4+T細(xì)胞值CD4-KOIBS小鼠，評(píng)價(jià)其免疫紊亂改變情況。 ③CD4+T cells與結(jié)腸固有層來源的樹突狀細(xì)胞（DCs）共培養(yǎng)3天。檢測(cè)CD4+T細(xì)胞亞型比例變化情況，上清液中細(xì)胞分泌炎癥因子水平以及細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)分子蛋白變化。 ④C57BL/6雄性6周齡小鼠共40只，隨機(jī)分為4組。實(shí)驗(yàn)組（n=10）一次性TNBS結(jié)腸灌注，誘導(dǎo)IBS小鼠模型，每次200μ（l2.5mg/只）。對(duì)照組（n=10）小鼠TNBS結(jié)腸灌注后等體積生理鹽水灌腸。酪酸桿菌組（n=10），TNBS造模前2小時(shí)，酪酸桿菌灌胃每次500μl（活菌濃度1×109CFU/ml）每天1次，連續(xù)6天；標(biāo)準(zhǔn)菌株組（E. coli）灌胃每次500μl（活菌濃度1×109CFU/ml）。24天后①檢測(cè)腸道病理損傷程度和內(nèi)臟敏感性改變；②檢測(cè)腸道通透性和炎癥水平；③檢測(cè)腸上皮細(xì)胞（IEC）間緊密連接蛋白（TJ）（occludin-1、claudin-1、ZOL-1）蛋白水平變化。評(píng)價(jià)益生菌（酪酸桿菌）干預(yù)的影響。 結(jié)果 三硝基苯磺酸（TNBS）結(jié)腸灌注是一個(gè)有效的IBS動(dòng)物模型.①實(shí)驗(yàn)組小鼠生理指標(biāo)改變明顯，實(shí)驗(yàn)組腸道出現(xiàn)低度炎癥狀態(tài)結(jié)腸膨脹試驗(yàn)（CRD）和最低閾值明顯降低（t=8.926、6.103，P均＜0.001），提示C-IBS模型造模成功；②與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組腸道IELs中樹突狀細(xì)胞（DCs）減少（t=2.878、3.086，P均＜0.05）而巨噬細(xì)胞增加（t=3.191，P＜0.05），記憶性T細(xì)胞無顯著變化；③與對(duì)照組相比，固有層（LP層）樹突狀細(xì)胞（DCs）減少（t=2.880、2.664，P均＜0.05），記憶性T細(xì)胞增加（t=3.732、2.682，P均＜0.05）；④與對(duì)照組相比，酪酸桿菌組生理指標(biāo)無變化；IELs中巨噬細(xì)胞、記憶性T細(xì)胞及DCs均接近正常水平(造模第6天，t=1.103、0.0243、0.418，P均＞0.05)，LP層中巨噬細(xì)胞和DCs (造模第6天，t=0.782、0.347，P均＞0.05)，與對(duì)照組相比均無顯著性差異；⑤與實(shí)驗(yàn)組相比，酪酸桿菌組腸道LP層記憶性T細(xì)胞數(shù)量也顯著下降（造模第6天，t=2.346，，P=0.0470，P＜0.05）有顯著性差異；仍高于對(duì)照組，有顯著性差異（t=2.233，P=0.0476，P＜0.05）。酪酸桿菌干預(yù)后，腸道免疫系統(tǒng)功能恢復(fù)并接近正常水平。 酪酸桿菌能夠顯著恢復(fù)腸道免疫系統(tǒng)紊亂的現(xiàn)象.野生型小鼠外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞水平顯著增高。 CD4-KO小鼠外周血CD8+T細(xì)胞水平也顯著增高。野生型小鼠固有層CD4+T細(xì)胞水平變化明顯。CD4-KO小鼠結(jié)腸固有層（LP）巨噬細(xì)胞和記憶T細(xì)胞的比例顯著提高。酪酸桿菌灌胃后，IBS痛覺閾值、LP層細(xì)胞比例和血清，均顯著降低。過繼轉(zhuǎn)移CD4+T細(xì)胞能夠顯著降低CD4-KO小鼠結(jié)腸腸道低度炎癥時(shí)的免疫反應(yīng)強(qiáng)度。 酪酸桿菌干預(yù)能有效調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞亞型分化及細(xì)胞因子分泌紊亂對(duì)IBS致病機(jī)制中的作用.①IBS組來源的未分化CD4+T細(xì)胞顯著增加。②CD4+T細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)后其亞型比例變化以Th1、Th17增加為主；酪酸桿菌干預(yù)后，以Th2、Treg增加為主，抑制Th1、Th17過度增加。③培養(yǎng)上清中細(xì)胞炎癥因子Th1（TNF-α、IFN-γ、IL-1β）、Th2（IL-4、IL-13）、Th17（IL-6、IL-17）及Treg（IL-10、TGF-β）及細(xì)胞內(nèi)蛋白變化與CD4+T細(xì)胞亞型變化基本一致。 酪酸桿菌能夠顯著降低IBS小鼠腸道通透性異常增加.①與對(duì)照組相比，TNBS實(shí)驗(yàn)組腸道出現(xiàn)低度炎癥和內(nèi)臟敏感性增加、最低閾值明顯降低(allP0.05)。酪酸桿菌和E. coli灌胃干預(yù)后生理指標(biāo)顯著改善，空腸黏膜損傷明顯減輕，浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞數(shù)目顯著減少，酪酸桿菌組優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)菌株組（E. coli）(P0.05)。②TNBS組小鼠血清D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)和髓過氧化氫酶（MPO）水平顯著增加（P0.05）。酪酸桿菌和標(biāo)準(zhǔn)菌株（E. coli）干預(yù)后，血清中D-LA、DAO、MPO水平顯著降低（P0.05）。酪酸桿菌組MPO水平低于標(biāo)準(zhǔn)菌株組（E. coli）組（P0.05）③TNBS組occludin-1、ZOL-1蛋白水平明顯降低（P均0.05）。酪酸桿菌和標(biāo)準(zhǔn)菌株（E. coli）干預(yù)后，occludin-1、ZOL-1水平明顯增加（P均0.05），酪酸桿菌組改善程度優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)菌株組（E. coli）（P0.05）。而claudin-1水平并未發(fā)生顯著變化（P均＞0.05）。 結(jié)論 1.三硝基苯磺酸（TNBS）結(jié)腸灌注能夠有效誘導(dǎo)腸易激綜合征（IBS）小鼠模型，是一個(gè)穩(wěn)定而有效動(dòng)物模型。 2.發(fā)現(xiàn)并證實(shí)腸道黏膜通透性增加與腸道CD4+T細(xì)胞活化及亞型分化，以及樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和記憶性T細(xì)胞等分布和激活異常等因素緊密相關(guān)。 3.本研究首次證實(shí)酪酸桿菌能夠有效抗炎、調(diào)節(jié)腸道免疫系統(tǒng)紊亂、顯著低腸道黏膜通透性和內(nèi)臟高敏狀態(tài)的干預(yù)的作用，有效治療IBS的各項(xiàng)癥狀，而恢復(fù)胃腸道功能。
[Abstract]:Background

IBS is a kind of functional gastrointestinal disease characterized by abdominal pain , abdominal distension and defecation habit . The morbidity of IBS is 5 % 锝

本文編號(hào)：1907158