本文選題：非酒精性脂肪性肝病 + SIRT3��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：近年來非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的全球發(fā)病率逐年上升,且有患者逐漸年輕化的趨勢(shì)。據(jù)報(bào)道,目前全世界約20%~30%的成年人可能患有NAFLD,其中大部分處于SFL階段,且早期不會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的癥狀或肝功能損害,因此并未得到足夠的重視。而SFL患者中又有約1/5的人可能會(huì)在數(shù)年內(nèi)進(jìn)展成為NASH患者甚至肝硬化和肝癌。因此,NAFLD已成為一種對(duì)大眾健康造成嚴(yán)重身心危害的常見病和多發(fā)病,各國(guó)政府和全社會(huì)對(duì)于該病的科研性和診治性投入也不斷增多。但目前尚無防治NAFLD的有效措施,這有賴于對(duì)該病發(fā)生機(jī)制的深入探索。既往研究提示SIRT3分子是肝臟脂肪代謝調(diào)控的重要分子,能夠通過對(duì)一系列的底物去乙�；揎椃磻�(yīng)來參與調(diào)節(jié)肝臟細(xì)胞的脂肪酸氧化、氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)、線粒體功能改變以及炎癥因子表達(dá)等生物學(xué)過程,這些過程均可能與NAFLD的發(fā)病及進(jìn)展關(guān)系密切。本課題組長(zhǎng)期從事糖尿病、脂肪肝等慢性代謝性疾病的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方案研究,發(fā)現(xiàn)SIRT3是運(yùn)動(dòng)、卡路里限制和植物化合物等營(yíng)養(yǎng)、運(yùn)動(dòng)干預(yù)方案的核心分子。為了找到SIRT3基因是否在人群脂肪肝發(fā)生的證據(jù),我們選取SIRT3作為目的靶標(biāo)基因,首先利用生物信息學(xué)方法分析SIRT3基因的連鎖不平衡關(guān)系和基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點(diǎn);然后建立NAFLD的人群研究隊(duì)列,納入384名NAFLD患者和384名正常對(duì)照者,分別提取其基因組DNA,并對(duì)SIRT3基因的13個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型和關(guān)聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)了SNP位點(diǎn)rs11246020,rs3782118和rs73392700與疾病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。為進(jìn)一步研究SIRT3功能獲得(gain-of-function)如何影響NAFLD的疾病過程,我們利用長(zhǎng)程高脂喂養(yǎng)方法成功構(gòu)建NAFLD小鼠模型,構(gòu)建了SIRT3真核表達(dá)質(zhì)粒載體,采用轉(zhuǎn)染試劑包裝后用間斷性尾靜脈注射的方法成功誘導(dǎo)模型小鼠肝臟發(fā)生SIRT3基因的高表達(dá),監(jiān)測(cè)并分析動(dòng)物膳食攝入和體重增長(zhǎng)的關(guān)系,并采用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)小鼠肝臟和血液中脂質(zhì)代謝相關(guān)的甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,CHO)和游離脂肪酸(free fat acid,FFA)等生化指標(biāo),同時(shí)采用肝臟HE染色、油紅O染色觀察肝細(xì)胞脂肪聚積等病理學(xué)變化,并提取蛋白和RNA,分別采用蛋白印跡和Real-time PCR等方法檢測(cè)相關(guān)蛋白和脂肪酸代謝相關(guān)信號(hào)通路中Pparα、cpt1a、cpt1b和Acox1等基因的表達(dá)情況。主要結(jié)果如下:(1)SIRT3基因編碼區(qū)SNP rs11246020的基因型分布在NAFLD和對(duì)照人群中分布有顯著差異,GG基因型個(gè)體相對(duì)AG+AA基因型個(gè)體有風(fēng)險(xiǎn)增加的效應(yīng)(OR=1.4,P=0.0427)。rs3782118和rs73392700不同等位基因型(allele)與NAFLD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(ORT/C-rs3782118=1.27,P=0.0361;ORC/G-rs73392700=1.45,P=0.0361)。(2)長(zhǎng)程高脂膳食喂養(yǎng)可成功構(gòu)建小鼠NAFLD模型,采用SIRT3基因質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染方法可成功將人源性的SIRT3基因轉(zhuǎn)至模型小鼠肝臟內(nèi),并導(dǎo)致SIRT3蛋白在肝內(nèi)的高表達(dá);處理25天后SIRT3高表達(dá)組NAFLD模型小鼠的體重顯著低于空載體組小鼠,被有效地控制在較低的水平;而空載體組小鼠的體重則呈持續(xù)上升的趨勢(shì),并穩(wěn)定在較高的水平。(3)SIRT3基因治療模型小鼠肝臟組織中的脂肪組織蓄積、細(xì)胞空泡樣變性和脂肪樣變的程度均顯著低于空載體組,肝臟中TG、CHO、FFA的產(chǎn)生以及血清中FFA的水平也顯著低于空載體組。SIRT3基因高表達(dá)后,肝臟中與脂代謝密切相關(guān)的基因Pparα及下游靶基因Acox1的轉(zhuǎn)錄顯著下降。結(jié)論:(1)SIRT3基因多態(tài)性參與影響人群NAFLD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。(2)SIRT3的基因獲得效應(yīng)(gain-of-function)對(duì)NAFLD模型小鼠肝臟脂肪積累表現(xiàn)出顯著的改善作用。以上調(diào)SIRT3為靶標(biāo)的NAFLD膳食營(yíng)養(yǎng)方案可直接通過調(diào)節(jié)線粒體代謝改善NAFLD。
[Abstract]:In order to find out whether SIRT3 gene is an important molecule to regulate fatty acid oxidation , oxidative stress regulation , mitochondrial function change and inflammatory factor expression , it has been found that SIRT3 molecule is an important molecule of liver fat metabolism . The expression of Ppar 偽 , cpt1a , cpt1b and Acox1 in the liver tissues of the mice with SIRT3 gene was significantly lower than that in the empty vector group .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575

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本文編號(hào)：1838057