發(fā)布時間：2018-04-16 07:04

  本文選題：嗎啡 + HIV-1　； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：第一部分：嗎啡對HⅣ-1在MT2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制的影響目的：探討嗎啡對艾滋�、裥筒《�(HⅣ-1)在MT2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制的影響。方法：MT2細(xì)胞隨機分為4份,依據(jù)不同處理方式分為4組：嗎啡處理MT2細(xì)胞組(A組)、嗎啡+納洛酮共處理MT2細(xì)胞組(B組)、納洛酮處理MT2細(xì)胞組(C組)和MT2細(xì)胞-病毒對照組(D組)；巨噬細(xì)胞也隨機分為4份,依據(jù)不同處理方式分為4組：嗎啡處理巨噬細(xì)胞組(E組)、嗎啡+納洛酮共處理巨噬細(xì)胞組(F組)、納洛酮處理巨噬細(xì)胞組(G組)和巨噬細(xì)胞-病毒對照組(H組)。先用濃度為10-8mol/L的納洛酮預(yù)處理B、C、F和G組0.5小時,再用10-12、10-10和10-8mol/L 3個濃度的嗎啡處理A和E組24h,同時用濃度為10-10mol/L的嗎啡處理B和F組24h；24h后8組細(xì)胞分別加入終濃度為100TCID50的HIV-1 B'亞型毒株。HⅣ-1感染A-D組的第3、4、5和6天,取培養(yǎng)上清,用ELISA雙抗體夾心法檢測p24抗原表達(dá)；HⅣ-1感染E～H組的第4、6、8、10和12天,取培養(yǎng)上清,用ELISA雙抗體夾心法檢測p24抗原表達(dá)。用Student-t檢驗或方差分析(ANOVA)比較不同細(xì)胞處理組間p24抗原表達(dá)差異；采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析的方法比較不同時間A和E組分別比D和H組的p24抗原表達(dá)增加或減少倍數(shù)的變化趨勢。結(jié)果：1.HⅣ-1感染MT2細(xì)胞第3-6天,A組的p24抗原表達(dá)均高于D組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.01)；2.HⅣ-1感染MT2細(xì)胞第3-6天,B、C和D組的p24抗原表達(dá)兩兩比較,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05);3.3個濃度的A組的p24抗原表達(dá)比D組增加的倍數(shù),隨HIV-1感染MT2細(xì)胞的時間的延長具有上升的趨勢,重復(fù)測量趨勢性分析結(jié)果顯示,時間效應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=842.18,P0.01)。4.HⅣ-1感染巨噬細(xì)胞第4-10天,E組的p24抗原表達(dá)均高于H組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.01)；5.HⅣ-1感染巨噬細(xì)胞第4-10天,F、G和H組的p24抗原表達(dá)兩兩比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)；6.3個濃度的E組的p24抗原表達(dá)比H組增加的倍數(shù),隨HIV-1感染時間的延長具有上升的趨勢,重復(fù)性測量趨勢性分析結(jié)果顯示,時間效應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=135.58,P0.01)。結(jié)論：1.嗎啡能夠促進(jìn)HⅣ-1在MT2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制,并且隨著感染時間的延長促進(jìn)的作用程度增強；2.嗎啡的促進(jìn)HⅣ-1復(fù)制到作用可被納洛酮阻斷。第二部分：嗎啡對拉米夫定抗HⅣ-1藥效的影響目的：探討嗎啡是否能夠影響拉米夫定(3TC)抗HⅣ-1的抗病毒效果。方法：MT2細(xì)胞鋪在48孔培養(yǎng)板,將各孔MT2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞順序編號,按照隨機數(shù)據(jù)表進(jìn)行分組：嗎啡+3TC處理組(A組)、嗎啡+納洛酮+3TC處理組(B組)、納洛酮+3TC處理組(C組)、3TC對照組(D組)和病毒對照組(E組)；用濃度為10-8 mol/L的納洛酮處理B和C組0.5h,然后用濃度為10-12、10-10和10-8 mol/L的嗎啡處理A組24h,按照嗎啡濃度從小到大,A組又分為：A1、A2和A3組；用濃度為10-10 mol/L的嗎啡處理B組24h；最后每組細(xì)胞加入等量的HIV-1ⅢB毒株和3TC溶液;HⅣ-1感染MT2細(xì)胞第3、4、5和6天,每天取培養(yǎng)上清,用ELISA雙抗體夾心法檢測培養(yǎng)上清的p24抗原表達(dá),根據(jù)p24抗原表達(dá)量和公式：p24抗原抑制率%=[(病毒對照組p24抗原值-給藥組(A、B、C和D組)p24抗原值)／病毒對照組p24抗原值]×100%,計算A、B、C和D組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率。結(jié)果：1.HⅣ-1感染細(xì)胞第3天,A1、A2和A3組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率最低,與D組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)；2.HⅣ-1感染細(xì)胞第4天,A1和A2組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率與D組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),而A3組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率與D組相比差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)；3.HⅣ-1感染細(xì)胞第3和第4天,B和C組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率相當(dāng),兩組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),這兩組分別與D組相比,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；4.病毒感染細(xì)胞第5和第6天,A1、A2、A3、B和C組的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率與D組相比,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.A-D組的3TC的抗HIV-1 p24抗原抑制率隨著感染時間的延長而降低,呈現(xiàn)時間—效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論1.嗎啡在病毒感染初期能降低3TC的抗HⅣ-1藥效；2.納洛酮能夠阻滯嗎啡降低3TC的抗HⅣ-1藥效的作用。第三部分：嗎啡對3TC誘導(dǎo)HⅣ-1耐藥的影響目的：通過體外細(xì)胞-病毒傳代培養(yǎng),觀察嗎啡對我國HIV-1 B'亞型野生毒株誘導(dǎo)成耐藥毒株的影響,并誘導(dǎo)出能穩(wěn)定傳代的HIV-1 B'亞型耐藥株。方法：MT4細(xì)胞鋪在48孔培養(yǎng)板,將各孔細(xì)胞順序編號,按照隨機數(shù)據(jù)表進(jìn)行分組：嗎啡+3TC處理組(Ⅰ組)、嗎啡處理組(Ⅱ組)、3TC處理組(Ⅲ組)和病毒對照組(Ⅳ組)。用濃度分別為10-10、10-8和10-6 mol/L的嗎啡預(yù)處理Ⅰ和Ⅱ組2h,按照嗎啡濃度從小到大,Ⅰ組又分為：Ⅰ1、Ⅰ2和Ⅰ3組；Ⅱ組又分為：Ⅱ1、Ⅱ2和Ⅱ3組；然后每組細(xì)胞加入終濃度為100TCID50從我國河南病人分離出來的類似泰B’亞型HⅣ-1毒株,最后加入終濃度為3.5gM/L的3TC藥物溶液,保持嗎啡和3TC的濃度不變傳代(一代6天,即1周)培養(yǎng)病毒,每周收集培養(yǎng)上清,并傳給下一代病毒,每次實驗共培養(yǎng)8-10周。每周提取培養(yǎng)上清的病毒RNA,用巢式PCR法擴增HIV-1 pol區(qū)基因,收集目的片段并測序,將所得的DNA序列拼接后提交到斯坦福大學(xué)的HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.stanford.edu/),進(jìn)行基因型耐藥性分析。收集4次實驗的結(jié)果,用Student-t檢驗比較不同處理組產(chǎn)生突變的差異。結(jié)果：1.Ⅰ組能誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生M184I、V118I、T69N、T215I、D67G和V90I耐藥突變；Ⅱ組能誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生Ⅴ118I、V90I和T215I突變：Ⅲ組能誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生M184I、M184Ⅴ和Ⅴ118I突變；Ⅳ組未發(fā)現(xiàn)突變。2. Ⅰ1組誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生M184I突變的時間短于Ⅳ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；3.Ⅰ組和Ⅲ組誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生V118I/V突變的時間與Ⅳ組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；4. Ⅰ組誘導(dǎo)HⅣ-1最早產(chǎn)生M184I突變的時間短于Ⅳ組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；5.Ⅰ組誘導(dǎo)HⅣ-1最早產(chǎn)生V118I/V突變的時間與Ⅳ組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；6.在病毒培養(yǎng)8-10周的時間內(nèi),Ⅰ1和Ⅰ2組存在M184I突變的時間長于Ⅳ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；7.Ⅱ1和Ⅱ2組存在Ⅴ118I/Ⅴ突變的時間長于Ⅳ組天,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)結(jié)論：1.嗎啡能夠縮短3TC誘導(dǎo)HⅣ-1病毒產(chǎn)生M184I核苷類主要耐藥突變的時間,并輔助產(chǎn)生M1841和Ⅴ118I突變的耐藥株的復(fù)制；2.在嗎啡的作用下,3TC可誘導(dǎo)HⅣ-1產(chǎn)生更多類型的多態(tài)性突變;3.誘導(dǎo)和培育出可能穩(wěn)定傳代的M184V和M1841耐藥株,可用于HⅣ-1耐藥性的研究和HⅣ-1藥物的藥效學(xué)評價。
[Abstract]:絎竴閮ㄥ垎錛氬悧鍟″H鈪，

本文編號：1757783