本文選題：急性腸系膜缺血 + 神經(jīng)導(dǎo)向因子��； 參考：《南京大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:急性腸系膜缺血(acute mesenteric ischemia,AMI)作為一種致命性腹部血管危重癥具有較高的死亡率。腸缺血初期表現(xiàn)為血管舒張,但隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng)血管會(huì)發(fā)生收縮,并在腸管血運(yùn)恢復(fù)后仍會(huì)持續(xù)存在。急性腸系膜缺血進(jìn)一步加重可引起血管痙攣加劇、腸粘膜屏障功能受損、全身性炎癥反應(yīng)通路激活、局部缺血加重腸損傷,在不加干預(yù)的情況下甚至進(jìn)一步發(fā)展為廣泛腸壞死進(jìn)而導(dǎo)致短腸綜合征、多器官功能障礙(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)最終危及生命。盡管治療技術(shù)不斷發(fā)展,但對(duì)于已缺血的腸道的處理和治療尚缺乏相應(yīng)策略,只能待腸管壞死后予以切除。因此對(duì)已缺血的腸道予以充分保護(hù),促進(jìn)其缺血后血供和功能的恢復(fù),最大程度上減少腸壞死的發(fā)生尤為重要。在打通腸系膜血管主干之后,微血管新生對(duì)于缺血腸道的功能恢復(fù)具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn),血管生成和神經(jīng)軸突生長(zhǎng)具有一定相似性,引導(dǎo)神經(jīng)定向生長(zhǎng)的神經(jīng)導(dǎo)向因子(netrin-1)能誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)。本研究旨在探究netrin-1在急性腸系膜缺血腸道及缺氧細(xì)胞中的表達(dá)及微血管新生的機(jī)制和作用,為臨床中急性腸系膜缺血后腸道保護(hù)治療提供治療靶點(diǎn)和理論依據(jù)。研究方法:第一部分:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(Caco-2)置于低氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)(2%O2,5%CO2),分別培養(yǎng) Oh,12h,24h,36h,48h,應(yīng)用免疫印跡、Real-timePCR和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)不同低氧時(shí)間下Caco-2細(xì)胞Netrin-1 mRNA和蛋白的表達(dá),探究不同低氧時(shí)間下Caco-2細(xì)胞Netrin-1的表達(dá)變化。第二部分:根據(jù)Vicrhow三要素,使用構(gòu)建狹窄、損傷內(nèi)皮和注射凝血酶的方法構(gòu)建外周型和中央型急性腸系膜上靜脈血栓形成(ASMVT)模型,模型臨床中患者ASMVT的臨床情景,同時(shí)構(gòu)建僅分離腸系膜血管的假手術(shù)組,應(yīng)用免疫印跡、Real-time PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)不同缺血模型腸道netrin-1表達(dá)差異以及netrin-1的表達(dá)與腸屏障功能的相關(guān)性。第三部分:收集ASMVT與正常腸管標(biāo)本,應(yīng)用免疫印跡、Real-time PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)缺血腸道netrin-1的表達(dá),比較正常腸管與缺血腸管之間netrin-1表達(dá)的差異,探究netrin-1的表達(dá)量與腸道功能恢復(fù)和患者預(yù)后之間的關(guān)系。研究結(jié)果:第一部分:Caco-2細(xì)胞在低氧條件(2%02,5%C02)下,隨著低氧時(shí)間延長(zhǎng),netrin-1的轉(zhuǎn)錄增加從而上調(diào)netrin-1 mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平,同時(shí)netrin-1蛋白的表達(dá)變化趨勢(shì)與mRNA變化趨勢(shì)相一致。第二部分:蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果提示中央型ASMVT組大鼠腸道netrin-1表達(dá)高于外周型ASMVT組,外周型ASMVT組Chu's腸粘膜病理評(píng)分、血I-FABP、內(nèi)毒素水平均高于中央型ASMVT組。在SD大鼠ASMVT模型中,腸道組織netrin-1在mRNA及蛋白水平表達(dá)增加,與外周型ASMVT相比,中央型ASMVT模型netrin-1表達(dá)增加,腸屏障功能損傷較輕繼發(fā)較輕的內(nèi)毒素血癥。第三部分:Real-time PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果提示缺血腸管中netrin-1表達(dá)高于正常腸管;根據(jù)ASMVT患者手術(shù)切除腸管標(biāo)本免疫組化切片進(jìn)行免疫反應(yīng)總評(píng)分(IHC score),netrin-1高表達(dá)組患者腸切除長(zhǎng)度相對(duì)更短,SBS發(fā)生率更低。研究結(jié)論:(1)隨著低氧時(shí)間延長(zhǎng),Caco-2細(xì)胞中netrin-1的表達(dá)逐漸增加;(2)SD大鼠ASMVT模型中,腸道組織netrin-1表達(dá)增加促進(jìn)微血管新生;(3)與外周型ASMVT相比,中央型ASMVT模型netrin-1表達(dá)更加明顯,進(jìn)而促進(jìn)微血管新生,減輕腸屏障功能損傷及其繼發(fā)的內(nèi)毒素血癥;(4)ASMVT患者手術(shù)切除腸管netrin-1高表達(dá),netrin-1高表達(dá)組預(yù)后優(yōu)于netrin-1低表達(dá)組。
[Abstract]:Objective : To study the expression of Netrin - 1 mRNA and protein in acute mesenteric ischemia ( AMI ) . The expression of netrin - 1 in central ASMVT group was higher than that in peripheral ASMVT group , and the expression of netrin - 1 was higher than that in peripheral ASMVT group . The results suggested that the expression of netrin - 1 in central ASMVT group was higher than that in peripheral ASMVT group .

【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R572.3
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本文編號(hào)：1745135