發(fā)布時間：2018-04-08 22:22

  本文選題：Toll樣受體3　切入點：Toll樣受體9　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 1.探討在乙肝疫苗中單獨或聯(lián)合應(yīng)用TLR3與TLR9激動劑對小鼠體液免疫水平、mDC活化和細(xì)胞因子分泌的影響。 2.探討TLR3與TLR9激動劑單獨或聯(lián)和應(yīng)用作為乙肝疫苗佐劑的可行性。 方法： 將50只周齡為6~7周的BALB/c雌性小鼠隨機分為5組，分別為：①空白對照組；②HepB組；③HepB+Poly(I:C)組；④HepB+CpG ODN組；⑤HepB+Poly(I:C)+CpG ODN組；各組小鼠分別于實驗開始后第0、4周左脛前肌注射疫苗和相應(yīng)激動劑，第6周采集非抗凝血和抗凝血，處死小鼠并摘取脾臟。采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay, ELISA)檢測小鼠血清中抗-HBs濃度，采用流式細(xì)胞術(shù)(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)檢測全血中B細(xì)胞和mDC的比例，采用ELISA法檢測脾臟組織勻漿上清液中IL-2、6、10、12的濃度。 結(jié)果： 1.各組小鼠完成全程免疫后使用ELISA檢測小鼠血清抗-HBs濃度，結(jié)果顯示：與空白對照組相比，其他各組小鼠血清抗-HBs濃度均顯著增高(P0.05)。與HepB組相比，TLR3與TLR9激動劑單獨或聯(lián)合使用組小鼠血清抗-HBs濃度均有不同程度升高，其中單獨使用TLR9激動劑的小鼠血清抗-HBs濃度最高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 進一步檢測小鼠全血中B細(xì)胞含量，結(jié)果顯示：使用TLR9激動劑的小鼠全血中B細(xì)胞含量顯著高于空白對照組和HepB組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑的小鼠其B細(xì)胞含量低于其他各組，，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。其他組間小鼠全血B細(xì)胞含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2.檢測小鼠全血中mDC含量，結(jié)果顯示：與空白對照組相比，HepB組小鼠全血mDC含量顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。單獨使用TLR3或TLR9激動劑的小鼠全血mDC含量高于空白組，低于HepB組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。TLR3與TLR9激動劑聯(lián)合使用組小鼠全血mDC含量低于HepB組，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3. ELISA法檢測小鼠脾臟組織液中細(xì)胞因子濃度，Th1型細(xì)胞因子檢測結(jié)果顯示各組間小鼠脾臟組織液IL-2濃度總體上存在統(tǒng)計學(xué)差異(F=5.717,P0.05)。其中，HepB組小鼠脾臟組織液IL-2濃度低于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。單獨使用TLR3或TLR9激動劑組小鼠脾臟組織液IL-2濃度高于空白對照組和HepB組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑的小鼠脾臟組織液IL-2濃度顯著高于空白對照組和HepB組，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IL-12濃度測量結(jié)果顯示，單獨或聯(lián)合使用TLR9激動劑組小鼠脾臟組織液中IL-12濃度均低于空白對照組和HepB組，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 Th2型細(xì)胞因子濃度檢測結(jié)果顯示，各組間小鼠脾臟組織液IL-6濃度總體上存在統(tǒng)計學(xué)差異(F=5.355, P0.05)。其中，聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑的小鼠IL-6濃度顯著低于空白對照組和HepB組(P0.05)。其他各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IL-10濃度測量結(jié)果顯示，單獨或聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑的小鼠脾臟組織液IL-10濃度低于空白對照組和HepB組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.接種乙肝疫苗后小鼠血清抗-HBs濃度顯著升高。單獨或聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑可不同程度提高抗-HBs分泌水平，其中TLR9激動劑的效果最強。此外，使用TLR9激動劑能夠顯著提高全血中B細(xì)胞含量，提示其可能通過抑制B細(xì)胞凋亡來提高體液免疫應(yīng)答水平，刺激機體持續(xù)分泌抗體。由此推測TLR9激動劑可能是乙肝疫苗良好的潛在佐劑。 2.接種乙肝疫苗可顯著提升小鼠全血細(xì)胞中mDC比例，促進小鼠對HBsAg的識別與提呈。TLR3與TLR9激動劑單獨應(yīng)用后小鼠mDC比例未見顯著改變，TLR3與TLR9激動劑聯(lián)合應(yīng)用后mDC比例顯著下降，其機制有待進一步研究。 3.聯(lián)合使用TLR3與TLR9激動劑可顯著增強小鼠脾臟組織分泌IL-2的能力，同時抑制其IL-6的分泌，提示TLR3與TLR9激動劑聯(lián)合應(yīng)用可在一定程度上改善乙肝疫苗中鋁佐劑誘導(dǎo)的Th2型免疫應(yīng)答偏倚。
[Abstract]:Objective:
1. to investigate the effects of TLR3 and TLR9 agonists on the level of humoral immunity, mDC activation and cytokine secretion in HBV vaccine.
2. the feasibility of TLR3 and TLR9 agonists alone or in combination as a hepatitis B vaccine adjuvant is explored.
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本文編號：1723618