本文選題：白介素-22　切入點：酒精性肝纖維化　出處：《山西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究白介素-22(interleukin-22,IL-22)對乙醛誘導的肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSCs)增殖活化的影響,并探討抗氧化軸Nrf2-keap1-ARE在該作用中的地位。方法:(1)HSC-T6s的培養(yǎng):用含10%體積分數(shù)胎牛血清、1%青-鏈霉素混合液的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)HSC-T6s,并置于37℃、5%CO2的孵箱中。(2)酒精性肝纖維化體外模型的建立:對數(shù)生長期的大鼠HSC-T6s分為空白對照組和乙醛刺激組�？瞻讓φ战M:常規(guī)培養(yǎng)HSC-T6s;乙醛刺激組:在常規(guī)培養(yǎng)基中加入不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的乙醛,并于干預后的24h和48h,四甲基偶氮唑藍法(3-(4,5-dimethylthiazol-2-thiazolyl)-2,5-di-phenly retrazolium bromid,MTT法)檢測各孔570nm處吸光度(Optical Density,OD)值,以此篩選出最佳乙醛干預濃度及時間。(3)IL-22對乙醛誘導的HSC-T6s增殖活化的影響:對數(shù)生長期的HSC-T6s分為5組,空白對照組(常規(guī)培養(yǎng)48h)、乙醛模型組(常規(guī)培養(yǎng)基中加入200μmol/L乙醛作用48h)及低、中、高劑量IL-22干預組(含200μmol/L乙醛的培養(yǎng)基預處理24h后,再分別加用10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml IL-22共培養(yǎng)24h)。MTT法檢測HSC-T6s增殖情況,流式細胞術檢測HSC-T6s細胞周期分布,western blotting及細胞免疫組化(immunocytochemistry,ICC)檢測α-平滑肌抗原(α-Smooth muscle antigen,α-SMA)蛋白的表達。(4)IL-22作用機制的探討:對數(shù)生長期的HSC-T6s如(3)分組,western blotting及ICC法檢測核因子相關因子(nuclear factor erythroid-2related factor,Nrf)2蛋白的表達及定位,分光光度法檢測培養(yǎng)上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量。采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,結果以均數(shù)±標準差(X±S)表示,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。多組樣本均數(shù)的兩兩比較采用One-way ANOVA分析。結果:(1)HSC-T6s細胞貼壁生長良好,且性能穩(wěn)定。(2)與空白對照組相比,不同濃度乙醛刺激后HSC-T6s的OD值均升高(P0.05),尤以200μmol/L作用48h最明顯,故選作后續(xù)造模條件。(3)流式細胞術結果顯示乙醛刺激HSC-T6s后G0/G1期細胞比例明顯降低,S期比例明顯升高,而加用IL-22干預后HSC-T6s則發(fā)生G1/S期阻滯,且呈現(xiàn)出劑量依賴性;western blotting和ICC結果顯示模型組HSC-T6s內α-SMA表達明顯上調(P0.05),而梯度濃度的IL-22則可呈劑量依賴性的抑制α-SMA蛋白表達。(4)western blotting結果顯示各組Nrf2總蛋白表達無明顯差異;但Nrf2核蛋白在空白對照組表達很少,模型組表達明顯增加,梯度濃度IL-22干預后可呈劑量依賴性進一步促進其表達(P0.05)。ICC結果也顯示,與空白組相比,模型組Nrf2胞核陽性率增加,加用IL-22干預后,隨著IL-22濃度增加,Nrf2胞核陽性率也進一步遞增,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。分光光度法結果顯示,與空白組相比,模型組上清液中MDA及GSH含量均明顯升高(P0.05);加用梯度濃度IL-22干預后MDA含量顯著下降,而GSH含量進一步明顯升高(P0.05),二者均存在劑量依賴性。結論:(1)乙醛誘導HSC-T6s活化增殖,成功構建了酒精性肝纖維化的體外研究模型;(2)IL-22對乙醛誘導的HSC-T6s活化增殖具有顯著的抑制作用,該作用至少部分是通過促進HSC-T6s內Nrf2核轉位及下游靶基因GSH表達、增強機體抗氧化軸Nrf2-keap1-ARE活性而實現(xiàn)的。
[Abstract]:Objective : To study the effect of interleukin - 22 ( IL - 22 ) on the proliferation and activation of hepatic stellate cells ( HSCs ) induced by acetaldehyde . The expression and localization of 偽 - smooth muscle antigen ( 偽 - SMA ) were detected by flow cytometry . Compared with blank group , the positive rate of MDA and GSH increased significantly in the model group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575

【參考文獻】

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本文編號：1673638