本文選題：白介素-22　切入點(diǎn)：酒精性肝纖維化　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究白介素-22(interleukin-22,IL-22)對(duì)乙醛誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSCs)增殖活化的影響,并探討抗氧化軸Nrf2-keap1-ARE在該作用中的地位。方法:(1)HSC-T6s的培養(yǎng):用含10%體積分?jǐn)?shù)胎牛血清、1%青-鏈霉素混合液的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)HSC-T6s,并置于37℃、5%CO2的孵箱中。(2)酒精性肝纖維化體外模型的建立:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的大鼠HSC-T6s分為空白對(duì)照組和乙醛刺激組。空白對(duì)照組:常規(guī)培養(yǎng)HSC-T6s;乙醛刺激組:在常規(guī)培養(yǎng)基中加入不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的乙醛,并于干預(yù)后的24h和48h,四甲基偶氮唑藍(lán)法(3-(4,5-dimethylthiazol-2-thiazolyl)-2,5-di-phenly retrazolium bromid,MTT法)檢測(cè)各孔570nm處吸光度(Optical Density,OD)值,以此篩選出最佳乙醛干預(yù)濃度及時(shí)間。(3)IL-22對(duì)乙醛誘導(dǎo)的HSC-T6s增殖活化的影響:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HSC-T6s分為5組,空白對(duì)照組(常規(guī)培養(yǎng)48h)、乙醛模型組(常規(guī)培養(yǎng)基中加入200μmol/L乙醛作用48h)及低、中、高劑量IL-22干預(yù)組(含200μmol/L乙醛的培養(yǎng)基預(yù)處理24h后,再分別加用10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml IL-22共培養(yǎng)24h)。MTT法檢測(cè)HSC-T6s增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HSC-T6s細(xì)胞周期分布,western blotting及細(xì)胞免疫組化(immunocytochemistry,ICC)檢測(cè)α-平滑肌抗原(α-Smooth muscle antigen,α-SMA)蛋白的表達(dá)。(4)IL-22作用機(jī)制的探討:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HSC-T6s如(3)分組,western blotting及ICC法檢測(cè)核因子相關(guān)因子(nuclear factor erythroid-2related factor,Nrf)2蛋白的表達(dá)及定位,分光光度法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多組樣本均數(shù)的兩兩比較采用One-way ANOVA分析。結(jié)果:(1)HSC-T6s細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好,且性能穩(wěn)定。(2)與空白對(duì)照組相比,不同濃度乙醛刺激后HSC-T6s的OD值均升高(P0.05),尤以200μmol/L作用48h最明顯,故選作后續(xù)造模條件。(3)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示乙醛刺激HSC-T6s后G0/G1期細(xì)胞比例明顯降低,S期比例明顯升高,而加用IL-22干預(yù)后HSC-T6s則發(fā)生G1/S期阻滯,且呈現(xiàn)出劑量依賴性;western blotting和ICC結(jié)果顯示模型組HSC-T6s內(nèi)α-SMA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),而梯度濃度的IL-22則可呈劑量依賴性的抑制α-SMA蛋白表達(dá)。(4)western blotting結(jié)果顯示各組Nrf2總蛋白表達(dá)無明顯差異;但Nrf2核蛋白在空白對(duì)照組表達(dá)很少,模型組表達(dá)明顯增加,梯度濃度IL-22干預(yù)后可呈劑量依賴性進(jìn)一步促進(jìn)其表達(dá)(P0.05)。ICC結(jié)果也顯示,與空白組相比,模型組Nrf2胞核陽(yáng)性率增加,加用IL-22干預(yù)后,隨著IL-22濃度增加,Nrf2胞核陽(yáng)性率也進(jìn)一步遞增,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。分光光度法結(jié)果顯示,與空白組相比,模型組上清液中MDA及GSH含量均明顯升高(P0.05);加用梯度濃度IL-22干預(yù)后MDA含量顯著下降,而GSH含量進(jìn)一步明顯升高(P0.05),二者均存在劑量依賴性。結(jié)論:(1)乙醛誘導(dǎo)HSC-T6s活化增殖,成功構(gòu)建了酒精性肝纖維化的體外研究模型;(2)IL-22對(duì)乙醛誘導(dǎo)的HSC-T6s活化增殖具有顯著的抑制作用,該作用至少部分是通過促進(jìn)HSC-T6s內(nèi)Nrf2核轉(zhuǎn)位及下游靶基因GSH表達(dá)、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化軸Nrf2-keap1-ARE活性而實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:Objective : To study the effect of interleukin - 22 ( IL - 22 ) on the proliferation and activation of hepatic stellate cells ( HSCs ) induced by acetaldehyde . The expression and localization of 偽 - smooth muscle antigen ( 偽 - SMA ) were detected by flow cytometry . Compared with blank group , the positive rate of MDA and GSH increased significantly in the model group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1673638