本文選題：CCl_4　切入點：急性肝損傷　出處：《河南師范大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：肝臟是機體的重要器官,承擔(dān)著物質(zhì)代謝、氨基酸利用、膽汁酸合成與轉(zhuǎn)化、生物合成與轉(zhuǎn)化、氧化保護、解毒等生理功能。許多理、化、生等因素均可損傷肝臟,導(dǎo)致一系列肝臟疾病的發(fā)生,如肝衰竭、肝纖維化、肝硬化等。研究發(fā)現(xiàn),自噬是真核細胞中存在的溶酶體依賴性降解途徑,在清除錯誤折疊或聚集的蛋白質(zhì),損壞的細胞器例如過氧化物酶、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng),以及消除細胞內(nèi)病原體等方面發(fā)揮了重要作用。研究表明,自噬在肝臟損傷的過程中起著重要的作用,肝臟的許多功能依賴自噬的發(fā)生反應(yīng)。然而,對四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)誘導(dǎo)的急性肝損傷中自噬的作用及調(diào)控機制尚不明確。因此本實驗以SD大鼠作為研究模型,將它們分為CCl_4誘導(dǎo)的急性肝損傷組與正常對照組。首先,為了觀察CCl_4誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷中自噬的動態(tài)變化,實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western blot)檢測肝損傷過程中自噬相關(guān)基因和蛋白的表達,免疫熒光方法檢測LC3蛋白熒光聚點的積聚現(xiàn)象,之后用MDC染色法觀察晚期自噬溶酶體的分布,HE染色觀察大鼠急性肝損傷過程中肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,油紅O染色檢測脂肪滴生成情況。實驗結(jié)果表明,與對照組相比較,LC3B在CCl_4肝損傷后3-6 h的基因表達上調(diào),隨后開始逐漸下調(diào);Atg5基因和蛋白的表達變化趨勢和LC3B相一致;SQSTM1/p62的表達在急性肝損傷中3-6 h表達量降低,之后逐漸升高。免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),正常肝組織的LC3B蛋白呈彌散狀態(tài)分布,CCl_4誘導(dǎo)的急性肝損傷3h后,細胞核周圍有LC3熒光聚集;MDC染色結(jié)果指出,正常組肝臟中,MDC熒光表達量較弱,CCl_4肝損傷6 h MDC熒光聚點逐步的增加,熒光信號此時最強,之后逐漸減弱。綜上可知,自噬在CCl_4急性肝損傷早期有明顯的上調(diào),而且在一定的范圍內(nèi)具有明顯的時間-效應(yīng)關(guān)系。為了進一步研究自噬在CCl_4誘導(dǎo)的急性肝損傷過程中的作用,實驗采用腹腔注射自噬特異性抑制劑羥氯喹(CQ)進行預(yù)處理后,再聯(lián)合CCl_4誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷,通過免疫熒光方法來檢測自噬流的變化;HE染色觀察CQ聯(lián)合CCl_4處理后肝組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和油紅O染色檢測脂肪滴生成情況;同時取下腔靜脈血進行ALT和AST血清酶活性檢測。免疫熒光結(jié)果表明,CQ處理組肝臟組織中有少量的LC3蛋白斑點積聚,CQ聯(lián)合CCl_4處理6 h后,LC3蛋白的熒光聚點現(xiàn)象顯著。CQ處理組與對照組相比,HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),正常肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有顯著性的變化,但CQ聯(lián)合CCl_4組,隨著處理時間增加,肝索逐漸消失,肝小葉結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂;油紅O染色結(jié)果表明,CQ聯(lián)合CCl_4處理組,脂肪滴顯著性增多,細胞核碎裂。酶活性檢測結(jié)果表明,CCl_4肝損傷后ALT和AST酶活性呈現(xiàn)明顯的上升趨勢,CQ聯(lián)合CCl_4處理組酶活性增加程度更加明顯。最后,免疫熒光進一步檢測p21蛋白在肝損傷中的表達變化。自噬受到抑制以后,p21蛋白表達程度增加,說明自噬可以通過抑制p21蛋白的表達來調(diào)節(jié)肝臟損傷。綜上所述得出如下結(jié)論,在CCl_4引起的大鼠急性肝損傷早期,自噬水平明顯上調(diào),并在一定的時間范圍內(nèi)具有時間-效應(yīng)關(guān)系;自噬在CCl_4處理的大鼠急性肝損傷過程中起到了保護作用;自噬可以通過抑制p21蛋白的表達來調(diào)節(jié)肝臟損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575

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本文編號：1654920