發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 02:23

  本文選題：脂質(zhì)過氧化　切入點(diǎn)：損傷指數(shù)　出處：《山東大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景： 大量飲酒與胃腸道疾病相關(guān),長期適量飲酒對胃腸道的影響尚待研究。 高濃度乙醇對胃黏膜損害的動(dòng)物模型較為容易建立,長期適量乙醇攝入對胃黏膜的影響的動(dòng)物模型鮮有報(bào)道。 Benjiamin Taylor[7]通過系統(tǒng)性回顧研究對于長期適度飲酒對胃腸的作用和影響得出結(jié)論：適量的乙醇攝入對于疾病發(fā)展起消極、積極的作用,總得來說適量乙醇攝入不是胃腸疾病發(fā)展的高危因素。Taylor B把適量飲酒定義為每天乙醇攝入約為10-40g/d,據(jù)此我們給予Wistar大鼠乙醇15%(V/V)lml/d灌胃,相對于適量攝入乙醇量。 流行病學(xué)研究[8]表明適量飲酒是肝病、食管腫瘤、胰腺炎的危險(xiǎn)因素,但是對于慢性胃炎、膽囊結(jié)石卻有積極意義,機(jī)制并不明確。人體中95%左右乙醇分解是通過氧化途徑進(jìn)行,包括乙醇的首過代謝(first-pass metabolism, FPM),微粒體乙醇氧化體系(microsomal ethanol-oxidizing system, MEOS),脂肪酸過氧化氫酶(catalase),乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase, ALDH)[9]。乙醇首過代謝[10]是指一定量的乙醇攝入后進(jìn)入系統(tǒng)循環(huán)之前在胃和肝中代謝。Lieber[11]等廣泛的研究了這種現(xiàn)象,他們提出FPM主要發(fā)生在胃組織,胃黏膜乙醇脫氫酶起重要作用。ADH和ALDH途徑是乙醇代謝的主要途徑,ADH介導(dǎo)乙醇氧化,使底物乙醇上的氫轉(zhuǎn)移到輔酶NAD上,轉(zhuǎn)化為NADH,產(chǎn)生底物乙醛。乙醛利用輔酶NAD在ALDH作用下轉(zhuǎn)化為乙酸,產(chǎn)生NADH。乙酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A,進(jìn)入三羧酸循環(huán),最終分解為二氧化碳和水。 隨著酒精攝入量的增加和蓄積微粒體乙醇氧化系統(tǒng)參與乙醇氧化代謝,活性氧(reactive oxygen species, ROS)、氧自由基(oxygen free radical, OFR)隨之產(chǎn)生,包括線粒體在內(nèi)的細(xì)胞膜性系統(tǒng)出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化,細(xì)胞進(jìn)入氧化應(yīng)激(oxidative stress, OS)狀態(tài)[12],轉(zhuǎn)錄因子缺氧誘導(dǎo)因子-1a表達(dá)增加,從而引起細(xì)胞處于乏氧適應(yīng)狀態(tài),以及新的功能。而免疫功能也會(huì)發(fā)生改變,以適應(yīng)細(xì)胞內(nèi)低氧的環(huán)境。 1992年,Semenza, Wang首先發(fā)現(xiàn)了HIF1蛋白。HIF1是異源二聚體蛋白,由HIF1-α和HIF1-β組成,在缺氧條件下HIFlα迅速表達(dá)。一旦激活,HIFlα加強(qiáng)基因轉(zhuǎn)錄,包括幾乎所有的參與糖酵解的酶,增強(qiáng)細(xì)胞糖酵解能力[13]。HIF1α激活丙酮酸脫氫酶激酶,抑制線粒體丙酮酸脫氫酶復(fù)合體,減少進(jìn)入三羧酸循環(huán)的丙酮酸量。進(jìn)入三羧酸循環(huán)的丙酮酸減少,減少缺氧狀態(tài)下氧化磷酸化及氧耗量。 HIF1α參與免疫的調(diào)節(jié)。 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(hymic stromal lymphopoietin, TSLP)源于細(xì)胞上皮的一種淋巴因子,可以直接作用于黏膜中樹突細(xì)胞(dendritic cells, DCs)[14,15]。使后者分泌OX40L促使TH0細(xì)胞向TH2細(xì)胞極化,形成TH2免疫。 正常胃黏膜上皮中存在DCs。TSLP是抗炎因子。 TSLP是否在正常胃黏膜中表達(dá),尚未有研究。 目的與方法： 我們研究長期乙醇攝入后大鼠胃黏膜病理形態(tài)變化,胃黏膜丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量變化及胃黏膜損傷程度,探討胃黏膜上皮細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下,脂質(zhì)過氧化與上皮損傷的關(guān)系。我們分別用15%、30%、45%不同濃度乙醇灌胃制備胃黏膜上皮氧化狀態(tài)模型,觀察胃黏膜大體及鏡下形態(tài)學(xué)變化并評估黏膜損傷指數(shù)(lesion index,LI),硫代巴比妥酸法(thiobarbituric acid, TBA)測定胃黏膜內(nèi)MDA含量,MDA與LI、病理損傷積分的關(guān)系。 結(jié)果： 我們發(fā)現(xiàn)(1)15%乙醇攝入組,3、6、9周后黏膜損傷指數(shù)、病理損傷積分、及MDA數(shù)量分別與對照組相比,均沒有顯著變化。(P0.05,n=9)(2)30%、45%組胃黏膜損傷指數(shù)與胃黏膜MDA含量呈正相關(guān),隨著乙醇濃度的升高及作用時(shí)間的延長,胃黏膜MDA含量增加,胃黏膜損傷程度加重(p0.01,n=9)。 結(jié)論： 對于大鼠5ml/kg/d15%v/v乙醇攝入后,大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)不明顯。 隨著濃度升高、攝入時(shí)間延長,長期乙醇攝入可引起胃黏膜上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化,細(xì)胞整體上處于缺氧狀態(tài)。 研究背景 細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝與細(xì)胞免疫是細(xì)胞內(nèi)兩種不同的功能。乙醇在胃黏膜上皮細(xì)胞代謝后是否能夠影響胃黏膜上皮細(xì)胞的功能,尚未有研究。 乙醇與胃黏膜的關(guān)系主要集中于損傷與修復(fù)的關(guān)系。 長期乙醇攝入經(jīng)過胃黏膜上皮的首過代謝作用、微粒體乙醇氧化系統(tǒng)作用,胃黏膜上皮細(xì)胞細(xì)胞膜出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化及大量活性氧產(chǎn)生,細(xì)胞內(nèi)固有還原劑NADPH減少,細(xì)胞為適應(yīng)常氧到缺氧環(huán)境的變化,轉(zhuǎn)錄因子缺氧誘導(dǎo)因子-lalpha (HIF-1α)功能增強(qiáng),增強(qiáng)細(xì)胞缺氧耐受。HIF-1α是1992年發(fā)現(xiàn)的一種重要轉(zhuǎn)綠因子,HIF-1α的下游靶基因目前有超過200個(gè),參與能量代謝、血管新生、一氧化氮合成、鐵與血紅素代謝以及免疫調(diào)節(jié)[27]。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)是一種上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞因子,作用于髓樣和淋巴樣樹突細(xì)胞,調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫,在起始和促進(jìn)Th2細(xì)胞免疫過程中起重要作用。TSLP與樹突細(xì)胞上TSLPR直接作用,通過CD40L促使Th0極化為Th2細(xì)胞,形成體液免疫,參與對胞外菌及寄生蟲清除。其激活途徑是獨(dú)立于MCHII分子、共刺激分子之外的另一條途徑。TSLP是否在胃黏膜上皮中表達(dá),以及其表達(dá)的機(jī)制尚未有人研究。我們設(shè)想在長期乙醇攝入條件下HIF-la被激活,其靶基因TSLP表達(dá)。豐富黏膜免疫理論,為適量飲酒可以有助于清除幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori, HP)提供理論支持。 目的 1.建立適量飲酒的大鼠動(dòng)物模型。 2.大鼠胃胃黏膜上皮能否表達(dá)TSLP,以及表達(dá)量是否與攝入乙醇量、時(shí)間有關(guān)系。 3.轉(zhuǎn)錄因子HIF-la是否調(diào)控TSLP表達(dá)。 材料與方法 選用健康雄性Wistar大鼠33只,按照不同濃度分為3組,分別給予生理鹽水、15%、45%乙醇灌胃,8%水合氯醛1ml麻醉后給予取出胃黏膜,用RT-PCR檢查各組HIF-1α、TSLPmRNA相對表達(dá)量,免疫組化進(jìn)行蛋白定位,Western blot技術(shù)測定細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、TSLP表達(dá)量并進(jìn)行相關(guān)性分析。 統(tǒng)計(jì)方法： SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以P0.05為顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 生理鹽水組大鼠胃黏膜mRNA水平檢測到HIF-1α,未檢測到TSLP。蛋白質(zhì)水平未檢測到HI-1α、TSLP。15%,45%組mRNA水平、蛋白質(zhì)水平均有HIF-lα、 TSLP表達(dá)。隨著乙醇濃度增加與攝入時(shí)間延長,HIF-1α表達(dá)量增加(p0.01,n=9), TSLP水平在45%組6、9w相比未有明顯增加,(p0.01,n=9)。TSLP表達(dá)與HIF-α表達(dá)有相關(guān)性r=0.87。 結(jié)論 正常大鼠胃黏膜中沒有HIF-1α蛋白、TSLP蛋白表達(dá)。隨著細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高,HIF-1α水平、TSLP水平升高。 乙醇轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α調(diào)控TSLP蛋白表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R573

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Ultrastructure and molecular biological changes of chronic gastritis,gastric cancer and gastric precancerous lesions:a comparative study[J];World Journal of Gastroenterology;2003年04期

2 Mehmet Kanter;Halit Demir;Cengiz Karakaya;Hanefi Ozbek;;Gastroprotective activity of Nigella sativa L oil and its constituent, thymoquinone against acute alcohol-induced gastric mucosal injury in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2005年42期

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本文編號：1637092