本文選題：EF24　切入點(diǎn)：重癥急性胰腺炎　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一種突發(fā)性致死率較高的炎癥性疾病,有發(fā)展為持續(xù)性多器官功能衰竭和廣泛的感染性壞死的趨勢。急性胰腺炎的病理過程包括水腫和出血,甚至壞死。急性胰腺炎的發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過程,涉及到生活方式和環(huán)境因素等許多方面,如酗酒、胰管狹窄、高脂血癥、感染等,但該病機(jī)制目前尚未完全研究清楚。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)對低氧異常敏感,在缺氧條件下HIF-1可表現(xiàn)為與低氧程度依賴性的穩(wěn)定高表達(dá)。HIF-1有廣泛的靶基因譜,可調(diào)控近百種下游基因的表達(dá),包括與炎癥發(fā)展、組織修復(fù)、細(xì)胞分化及凋亡、腫瘤生長及血管舒縮控制等生理病理過程,可使機(jī)體產(chǎn)生一系列應(yīng)激反應(yīng)。而急性胰腺炎腺泡細(xì)胞的凋亡及壞死則由缺氧引起,通過缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)激活并引起一系列的應(yīng)激反應(yīng)。水通道蛋白(AQP)是一族廣泛存在于哺乳動(dòng)物的上皮和內(nèi)皮細(xì)胞膜上的小分子蛋白,是水分子跨膜快速轉(zhuǎn)運(yùn)的通道,在不同的哺乳動(dòng)物的器官的生理和病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。AQP1基因敲除或基因缺陷的小鼠受損血管通透性增加,促進(jìn)炎癥細(xì)胞泄露。最近的研究表明,在阿爾茨海默病、缺血性腦卒中和蛛網(wǎng)膜下腔出血的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?姜黃素可限制多種離子通道的轉(zhuǎn)運(yùn)及限制炎癥和神經(jīng)的損傷,并通過該實(shí)驗(yàn)推測,姜黃素可能通過上調(diào)AQP1的表達(dá)限制了腦水腫的發(fā)展,但其相關(guān)機(jī)制尚未清楚。姜黃素類似物聯(lián)苯二氟酮(diphenyl difluoroketone,EF24)較姜黃素效果更強(qiáng),穩(wěn)定性和溶解性更好。以往對EF24在腫瘤方面的研究較多,但在炎癥方面的研究甚少,尤其在重癥急性胰腺炎導(dǎo)致的胰腺損傷中的作用,目前尚未見研究。目的:本實(shí)驗(yàn)建立重癥急性胰腺炎大鼠模型,觀察SAP時(shí)胰腺組織學(xué)方面的變化,及應(yīng)用EF24后HIF-1α、AQP1蛋白和m RNA在胰腺的表達(dá)情況,從分子水平闡明在SAP時(shí)EF24對胰腺組織的作用機(jī)制,為臨床上治療SAP提供新的思路。方法:1將60只SD大鼠隨機(jī)分成對照(Con)組、SAP模型(SAP)組和EF24(EF24)組,每組再分為6h、12h 2個(gè)亞組,每組各10只。2采用間隔1小時(shí)分兩次于腹腔內(nèi)注射20%L-精氨酸(L-Arg)3 g/kg的方法誘發(fā)動(dòng)物模型。SAP組于造模后1h腹腔注射聚乙二醇(聚乙二醇:生理鹽水=1:1)100μl;EF24組于造模后1h腹腔注射EF24 0.4 mg/kg(溶于聚乙二醇:生理鹽水=1:1的混合物100μl中)。Con組腹腔注射聚乙二醇(聚乙二醇:生理鹽水=1:1)100μl。3分別于造模后6h、12h留取血、胰腺組織,從股動(dòng)脈采血,室溫放置1h待自然凝固后,3000 rpm離心10min后,取上清,置于-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆�。ELISA檢測血清IL-6、TNF-α水平,采用RT-PCR、Western-blot的方法觀察比較三組胰腺組織HIF-1α、AQP1(Aquaporin-1)m RNA及蛋白的表達(dá)差異。4所有數(shù)據(jù)采用(x±S)表示,應(yīng)用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。設(shè)α=0.05,P0.05為差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 HE染色觀察,模型組胰腺組織可見結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞及間質(zhì)充血水腫明顯,腺體細(xì)胞出血、壞死,炎性細(xì)胞浸潤,且病理損傷程度隨時(shí)間延長進(jìn)行性加重,胰腺病理采用Schmidt評分,提示L-精氨酸成功誘導(dǎo)重癥急性胰腺炎,與SAP組相比,EF24組對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)胰腺病變程度有所減輕。2血清IL-6:SAP組(6h 99.9±4.6;12h 131.1±8.9)與Con組(6h38.8±5.4;12h 40.9±7.2)各時(shí)間點(diǎn)比較,大鼠血清含量明顯升高(P0.01);EF24組(6h 74.6±7.0;12h 79.7±8.3)與Con組相比,血清IL-6含量明顯升高(P0.01);EF24組與SAP組相比其含量顯著降低(P0.01);各組的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,SAP組的12h組高于6h組(P0.01)。3血清TNF-α:SAP組(6h 106.6±10.0;12h 146.3±8.3)與Con組(6h 31.1±5.5;12h 38.7±4.0)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較,大鼠血清TNF-α含量明顯升高(P0.01);EF24組(6h 75.1±5.0;12h 83.2±6.8)與Con組相比,大鼠血清TNF-α含量明顯升高(P0.01);EF24組與SAP組相比顯著降低(P0.01);各組的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比,SAP組的12h組高于6h組(P0.01)。4 RT-PCR檢測HIF-1αm RNA的表達(dá):SAP組和EF24組HIF-1αm RNA的量較Con組均升高(P0.01);EF24組與SAP組相比各個(gè)時(shí)間點(diǎn)m RNA的量均降低(P0.01);Con組、EF24組HIF-1αm RNA量6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比各自無顯著差異(P0.05),SAP組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,12h m RNA的量高于6h,且有顯著差異(P0.01)。5 RT-PCR檢測AQP1 m RNA的表達(dá):SAP組較Con組和EF24組AQP1 m RNA的量均下降(P0.01);EF24組較Con組相比各個(gè)時(shí)間點(diǎn)m RNA的量均下降(P0.01);Con組、EF24組AQP1 m RNA量6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比各自無顯著差異(P0.05),SAP組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,12h m RNA的量低于6h,且有顯著差異(P0.01)。6 Western blot檢測HIF-1α蛋白的表達(dá):SAP組與EF24組HIF-1α蛋白量與Con組比較各時(shí)間點(diǎn)均顯著升高(P0.01);EF24組與SAP組HIF-1α蛋白量相比各時(shí)間點(diǎn)均下降(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Con組、EF24組HIF-1α蛋白量6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比各自無顯著差異(P0.05),SAP組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,12h蛋白的量高于6h,且有顯著差異(P0.01)。7 Western blot檢測AQP1蛋白的表達(dá):SAP組與EF24組和Con組AQP1蛋白量比較各時(shí)間點(diǎn)均顯著下降(P0.01);EF24組較Con組AQP1蛋白量相比各時(shí)間點(diǎn)均下降(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Con組、EF24組AQP1蛋白量6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比各自無顯著差異(P0.05),SAP組6h、12h時(shí)間點(diǎn)相比,12h蛋白的量低于6h,且有顯著差異(P0.01)。結(jié)論:1 SAP時(shí)胰腺中HIF-1α蛋白及m RNA表達(dá)升高,AQP1蛋白及m RNA的表達(dá)降低,提示此二者參與了重癥急性胰腺炎胰腺組織的損傷。2 EF24可以減少SAP血清IL-6、TNF-α水平,減輕胰腺損傷,提示EF24對重癥急性胰腺炎起到保護(hù)作用。3 EF24可抑制SAP胰腺組織HIF-1α的表達(dá),上調(diào)AQP1的表達(dá),提示EF24與HIF-1α、AQP1存在一定的調(diào)節(jié)關(guān)系,EF24通過抑制HIF-1α和上調(diào)AQP1的表達(dá)減輕SAP胰腺損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R576

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉雙林;王志華;胡志全;曾星;李有元;葉章群;;姜黃素對雄激素非依賴性前列腺癌抑制效應(yīng)及其機(jī)制[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2010年11期

2 ;Decreased expression of human aquaporin-5 correlated with mucus overproduction in airways of chronic obstructive pulmonary disease[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年08期

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本文編號：1609555