本文選題：可溶性膳食纖維　切入點：潰瘍性結腸炎　出處：《南京大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景:潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不明確的結腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病,其臨床表現(xiàn)為反復發(fā)作的腹痛、腹瀉和粘液膿血便、消瘦及貧血等,同時還可伴有不同程度的腸外表現(xiàn)。該病在歐美發(fā)達國家發(fā)病率較高,近年來,隨著我國經濟社會的發(fā)展以及人民生活水平的提高,該病在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。UC時往往存在腸道動力功能障礙,且與腸道炎癥互相影響,從而導致腸道炎癥與腸道動力障礙持續(xù)加重,進而增加UC治療的難度。目前UC的發(fā)病機制尚不十分明確,大量研究表明遺傳易感性、腸道菌群失調、腸道免疫功能異常以及環(huán)境因素的改變在其發(fā)生與發(fā)展的過程中起著重要的作用。近年來研究已證實腸神經系統(tǒng)(Enteric nervous system,ENS)尤其是腸神經膠質細胞(Enteric glial cell,EGC)作為一個新興因素在UC的炎癥過程中起著重要的作用,同時研究顯示,EGC還參與了腸道動力的調控過程。UC時可溶性膳食纖維(果膠)可通過腸道菌群的作用,在結腸內分解為短鏈脂肪酸(Short chain fatty acid,SCFA)降低結腸黏膜的通透性,維持腸道黏膜屏障功能的穩(wěn)定,進而改善腸道炎癥,在UC的治療中起著重要作用。但可溶性膳食纖維對UC腸道動力功能異常是否具有調控作用以及EGC在UC腸道動力中的作用機制尚不十分清楚。研究目的:本課題旨在探究UC時腸道動力與EGC的異常改變,以及可溶性膳食纖維能否通過調控EGC的異常改變進而調控腸道動力的改變;并在此基礎上探討可溶性膳食纖維調控EGC及改善腸道動力的可能機制,以期為UC臨床治療中應用可溶性膳食纖維調控腸道動力功能障礙提供部分理論依據(jù)。材料與方法:實驗動物選擇野生型雄性C57BL/6小鼠,以DSS誘導的結腸炎作為小鼠UC的實驗模型,實驗過程分為四組即正常對照組、DSS造模組、果膠處理組和果膠聯(lián)合抗生素處理組。各組小鼠適應性喂養(yǎng)一周,然后開始實驗過程。正常對照組實驗過程中自由飲水,DSS造模組在實驗過程最后一周改用5%DSS溶液自由飲用,果膠處理組則提前四周給予4%果膠自由飲用,最后一周改用5%DSS溶液聯(lián)合4%果膠自由飲用,果膠聯(lián)合抗生素處理組提前四周給予4%果膠聯(lián)合四聯(lián)抗生素,最后一周改用4%果膠聯(lián)合四聯(lián)抗生素及5%DSS溶液共同處理。第6周造模過程中,定期觀察各組小鼠進食、飲水、活動性、大便性狀、大便隱血情況以及體重變化并進行疾病活動度評分(DAI),造模結束前一天,分別通過珠球排出實驗評估各組小鼠結腸運輸時間,造模結束后,麻醉處死各組小鼠,取結腸組織,部分立即放入固定液中,進行結腸動力檢測實驗以評估結腸收縮強度與頻率,一部分用于HE染色,用于評估腸道炎癥狀況,同時酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測結腸組織炎癥因子(TNF-α IL-1β和PGE2)表達水平,通過免疫熒光和蛋白質印記(Western blot)法分別定性和定量檢測各實驗組腸神經膠質細胞(EGC)異常活化(S100B、GFAP 和 Connexin-43 蛋白)。實驗結果:與對照組相比,DSS造模組小鼠結腸運輸時間顯著增加,果膠處理組及果膠聯(lián)合抗生素處理組結腸運輸時間介于對照組及DSS造模組之間,且兩組之間無顯著差異;同時DSS造模組小鼠體重下降明顯,口服果膠及口服果膠聯(lián)合處理可減輕由DSS所引起的體重下降,DAI評分顯示DSS造模組顯著增加,經過果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理后,DAI評分均有不同程度的下降。HE染色結果顯示,DSS造模組小鼠結腸黏膜上皮細胞遭到破壞,上皮脫落,部分隱窩破壞,杯狀細胞明顯減少,腺體排列紊亂,黏膜及黏膜下充血水腫,可見大量中性粒細胞、淋巴細胞等炎性細胞浸潤,同時可見彌漫小潰瘍分布,符合UC的病理學改變,表明本實驗UC造模成功,經過果膠及果膠聯(lián)合抗生素干預后的兩組小鼠,HE染色結果顯示炎癥癥狀均有不同程度的減輕,進一步的ELISA實驗結果顯示,DSS造模組小鼠結腸黏膜中,TNF-α、IL-1β和PGE2等炎癥因子表達水平顯著增高,果膠及果膠聯(lián)合抗生素干預后表達水平均有不同程度的下降,表明可溶性膳食纖維(果膠)具有改善UC腸道炎癥的作用。結腸動力檢測實驗結果顯示,與正常對照組相比,DSS造模組小鼠無論結腸的的收縮強度及收縮頻率均有顯著下降,使用果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理則可明顯提高小鼠結腸的收縮強度與收縮頻率,同時免疫熒光及Westernblot結果均顯示DSS造模組小鼠結腸S100B及GFAP蛋白水平顯著增加,提示此時EGC的異�；罨�,當使用果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理后,S100B及GFAP水平顯著下降,表明UC時可溶性膳食纖維(果膠)可通過調控EGC從而調控腸道動力。進一步的免疫熒光及Western blot結果顯示DSS造模組小鼠EGC中連接蛋白Connexin-43表達水平顯著下降,果膠干預后其表達水平顯著增加,同時腸道動力異常得到顯著改善。實驗結論:在DSS誘導的小鼠結腸炎模型中,結腸動力及腸神經膠質細胞(EGC)發(fā)生了異常改變,可溶性膳食纖維可通過調控腸神經膠質細胞(EGC)的異常活化過程進而調控UC時結腸動力的異常改變,進一步的機制研究表明可溶性膳食纖維通過對EGC細胞中連接蛋白Connexin-43的表達調控繼而調控UC腸道動力的異常。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62
，

本文編號：1607572