本文選題：可溶性膳食纖維　切入點：潰瘍性結(jié)腸炎　出處：《南京大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景:潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不明確的結(jié)腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病,其臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛、腹瀉和粘液膿血便、消瘦及貧血等,同時還可伴有不同程度的腸外表現(xiàn)。該病在歐美發(fā)達國家發(fā)病率較高,近年來,隨著我國經(jīng)濟社會的發(fā)展以及人民生活水平的提高,該病在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。UC時往往存在腸道動力功能障礙,且與腸道炎癥互相影響,從而導(dǎo)致腸道炎癥與腸道動力障礙持續(xù)加重,進而增加UC治療的難度。目前UC的發(fā)病機制尚不十分明確,大量研究表明遺傳易感性、腸道菌群失調(diào)、腸道免疫功能異常以及環(huán)境因素的改變在其發(fā)生與發(fā)展的過程中起著重要的作用。近年來研究已證實腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system,ENS)尤其是腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(Enteric glial cell,EGC)作為一個新興因素在UC的炎癥過程中起著重要的作用,同時研究顯示,EGC還參與了腸道動力的調(diào)控過程。UC時可溶性膳食纖維(果膠)可通過腸道菌群的作用,在結(jié)腸內(nèi)分解為短鏈脂肪酸(Short chain fatty acid,SCFA)降低結(jié)腸黏膜的通透性,維持腸道黏膜屏障功能的穩(wěn)定,進而改善腸道炎癥,在UC的治療中起著重要作用。但可溶性膳食纖維對UC腸道動力功能異常是否具有調(diào)控作用以及EGC在UC腸道動力中的作用機制尚不十分清楚。研究目的:本課題旨在探究UC時腸道動力與EGC的異常改變,以及可溶性膳食纖維能否通過調(diào)控EGC的異常改變進而調(diào)控腸道動力的改變;并在此基礎(chǔ)上探討可溶性膳食纖維調(diào)控EGC及改善腸道動力的可能機制,以期為UC臨床治療中應(yīng)用可溶性膳食纖維調(diào)控腸道動力功能障礙提供部分理論依據(jù)。材料與方法:實驗動物選擇野生型雄性C57BL/6小鼠,以DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎作為小鼠UC的實驗?zāi)Ｐ?實驗過程分為四組即正常對照組、DSS造模組、果膠處理組和果膠聯(lián)合抗生素處理組。各組小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,然后開始實驗過程。正常對照組實驗過程中自由飲水,DSS造模組在實驗過程最后一周改用5%DSS溶液自由飲用,果膠處理組則提前四周給予4%果膠自由飲用,最后一周改用5%DSS溶液聯(lián)合4%果膠自由飲用,果膠聯(lián)合抗生素處理組提前四周給予4%果膠聯(lián)合四聯(lián)抗生素,最后一周改用4%果膠聯(lián)合四聯(lián)抗生素及5%DSS溶液共同處理。第6周造模過程中,定期觀察各組小鼠進食、飲水、活動性、大便性狀、大便隱血情況以及體重變化并進行疾病活動度評分(DAI),造模結(jié)束前一天,分別通過珠球排出實驗評估各組小鼠結(jié)腸運輸時間,造模結(jié)束后,麻醉處死各組小鼠,取結(jié)腸組織,部分立即放入固定液中,進行結(jié)腸動力檢測實驗以評估結(jié)腸收縮強度與頻率,一部分用于HE染色,用于評估腸道炎癥狀況,同時酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測結(jié)腸組織炎癥因子(TNF-α IL-1β和PGE2)表達水平,通過免疫熒光和蛋白質(zhì)印記(Western blot)法分別定性和定量檢測各實驗組腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGC)異�；罨�(S100B、GFAP 和 Connexin-43 蛋白)。實驗結(jié)果:與對照組相比,DSS造模組小鼠結(jié)腸運輸時間顯著增加,果膠處理組及果膠聯(lián)合抗生素處理組結(jié)腸運輸時間介于對照組及DSS造模組之間,且兩組之間無顯著差異;同時DSS造模組小鼠體重下降明顯,口服果膠及口服果膠聯(lián)合處理可減輕由DSS所引起的體重下降,DAI評分顯示DSS造模組顯著增加,經(jīng)過果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理后,DAI評分均有不同程度的下降。HE染色結(jié)果顯示,DSS造模組小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞遭到破壞,上皮脫落,部分隱窩破壞,杯狀細(xì)胞明顯減少,腺體排列紊亂,黏膜及黏膜下充血水腫,可見大量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤,同時可見彌漫小潰瘍分布,符合UC的病理學(xué)改變,表明本實驗UC造模成功,經(jīng)過果膠及果膠聯(lián)合抗生素干預(yù)后的兩組小鼠,HE染色結(jié)果顯示炎癥癥狀均有不同程度的減輕,進一步的ELISA實驗結(jié)果顯示,DSS造模組小鼠結(jié)腸黏膜中,TNF-α、IL-1β和PGE2等炎癥因子表達水平顯著增高,果膠及果膠聯(lián)合抗生素干預(yù)后表達水平均有不同程度的下降,表明可溶性膳食纖維(果膠)具有改善UC腸道炎癥的作用。結(jié)腸動力檢測實驗結(jié)果顯示,與正常對照組相比,DSS造模組小鼠無論結(jié)腸的的收縮強度及收縮頻率均有顯著下降,使用果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理則可明顯提高小鼠結(jié)腸的收縮強度與收縮頻率,同時免疫熒光及Westernblot結(jié)果均顯示DSS造模組小鼠結(jié)腸S100B及GFAP蛋白水平顯著增加,提示此時EGC的異�；罨�,當(dāng)使用果膠及果膠聯(lián)合抗生素處理后,S100B及GFAP水平顯著下降,表明UC時可溶性膳食纖維(果膠)可通過調(diào)控EGC從而調(diào)控腸道動力。進一步的免疫熒光及Western blot結(jié)果顯示DSS造模組小鼠EGC中連接蛋白Connexin-43表達水平顯著下降,果膠干預(yù)后其表達水平顯著增加,同時腸道動力異常得到顯著改善。實驗結(jié)論:在DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型中,結(jié)腸動力及腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGC)發(fā)生了異常改變,可溶性膳食纖維可通過調(diào)控腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGC)的異�；罨^程進而調(diào)控UC時結(jié)腸動力的異常改變,進一步的機制研究表明可溶性膳食纖維通過對EGC細(xì)胞中連接蛋白Connexin-43的表達調(diào)控繼而調(diào)控UC腸道動力的異常。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62
，

本文編號：1607572