本文選題：骨髓間充質干細胞　切入點：體外培養(yǎng)　出處：《南方醫(yī)科大學學報》2015年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的優(yōu)化一套簡便、可靠、穩(wěn)定的大鼠骨髓間充質干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定及肝向分化的方案。方法采用全骨髓差速貼壁法分離提取大鼠骨髓間充質干細胞,通過優(yōu)化的1.5 h差速貼壁結合12 h首次全量換液方法,及體外改良培養(yǎng)方案實現(xiàn)細胞高效純化擴增。流式細胞術表面標志物檢測結合成脂、成骨、成軟骨誘導分化鑒定細胞群。采用添加b FGF、HGF、EGF等多種生長因子的三步誘導法促使骨髓間充質干細胞向肝系分化,并進行形態(tài)學、免疫學、基因水平評估。結果分離純化的細胞群陽性表達CD29、CD44、CD90,陰性表達CD34、CD45,經(jīng)成脂、成骨、成軟骨誘導液作用后,油紅O、茜素紅、甲苯胺藍染色均呈陽性。經(jīng)三步法肝向誘導處理后,細胞群呈肝樣細胞形態(tài)改變,表達肝臟特異性標志物ALB、AFP,肝系相關基因表達水平呈時間依賴性逐漸上升。結論優(yōu)化后的方案能夠簡便、可靠、穩(wěn)定地獲得高純度的大鼠骨髓間充質干細胞,并能在特定微環(huán)境作用下實現(xiàn)肝向分化。
[Abstract]:Objective to optimize a set of simple, reliable, stable rat bone marrow mesenchymal stem cell isolation, culture, identification and differentiation of liver program. By using the whole bone marrow differentialadherence was isolated from rat bone marrow mesenchymal stem cells, through the optimization of 1.5 h differential adherent combined with 12 h for the first time around the amount of liquid change method, and in vitro modified culture scheme cells highly purified and amplified. Flow cytometry surface markers and adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation of cells. By adding B FGF, HGF, EGF and other growth factor induced by three step method to promote bone marrow mesenchymal stem differentiation to hepatic cells, and the morphology, immunology and gene level evaluation. Results the purified cells were positive for CD29, CD44, CD90, CD45, CD34 negative expression, the adipogenic, osteogenic, chondrogenic media after oil red O, alizarin red, toluidine blue staining was positive. The three step to the liver after treatment, cells showed morphologic changes of hepatocyte like cells, expression of liver specific markers ALB, AFP, liver related gene expression in a time-dependent manner gradually increased. Conclusion the optimized scheme can be simple, reliable and stable to obtain high purity of rat bone marrow mesenchymal stem cells and, in a specific micro environment under the action of liver differentiation.

【作者單位】： 西安交通大學第一附屬醫(yī)院肝膽外科;西安交通大學先進外科技術與工程研究所;陜西省人民醫(yī)院腫瘤外科;
【基金】：教育部高等學校博士學科點專項科研基金(20110201130009) 陜西省科學技術研究發(fā)展計劃國際合作項目(2012KW-39-01)
【分類號】：R575

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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