本文選題：凝膠包被　切入點(diǎn)：胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究凝膠包被的人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(human placental derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)對(duì)2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎是否有治療作用及可能的治療機(jī)制。為應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞局部/原位治療炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)提供理論依據(jù)。方法:分離、培養(yǎng)、鑒定hPMSCs,構(gòu)建含熒光素酶(luciferase)和綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)雙報(bào)告基因的慢病毒轉(zhuǎn)染hPMSCs,將hPMSCs包被于凝膠中制成可用于灌腸的劑型。大鼠隨機(jī)均分為3組:對(duì)照組、模型組、細(xì)胞治療組。禁食24小時(shí)后,對(duì)照組大鼠接受1ml生理鹽水灌腸,模型組和細(xì)胞治療組大鼠接受1ml TNBS/乙醇混合溶液灌腸。各組大鼠在造模的第3天接受治療,對(duì)照組、模型組大鼠接受1ml空白凝膠灌腸,細(xì)胞治療組大鼠接受1ml細(xì)胞密度1*106/ml凝膠包被的hPMSCs灌腸。造模第0天起記錄大鼠體重、糞便形狀、精神、飲食、活動(dòng)量、皮毛光澤等狀態(tài),計(jì)算每天疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease activity index,DAI)。造模第7天殺鼠取材,計(jì)算各組大鼠結(jié)腸組織的HE病理組織學(xué)評(píng)分、結(jié)腸長度、應(yīng)用RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中和心臟血清中促炎細(xì)胞因子。RT-PCR檢測(cè)結(jié)腸組織中T細(xì)胞亞群轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、ROR-γt mRNA水平和巨噬細(xì)胞極化蛋白CD68、CD163、MCP-1 mRNA水平。活體成像技術(shù)和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)luciferase/GFP陽性的hPMSCs信號(hào)以明確灌腸后的hPMSCs在大鼠腸道的存活情況和分布。結(jié)果:凝膠包被的hPMSCs可以明顯改善實(shí)驗(yàn)性大鼠結(jié)腸炎的體重減輕癥狀和組織病理改變。hPMSCs能降低大鼠結(jié)腸組織中和心臟血液上清中的促炎細(xì)胞因子IL-17,IL-1β,TNF-α,IFN-γ和IL-6的mRNA水平和蛋白水平,提高抗炎因子的TGF-βmRNA水平和蛋白水平。凝膠包被的hPMSCs能調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞群平衡和巨噬細(xì)胞極化方向�；铙w成像及免疫熒光結(jié)果表明只有少量的luciferase/GFP陽性的hPMSCs存在于腸道。結(jié)論:凝膠包被的hPMSCs對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎具有治療作用。hPMSCs可以降低結(jié)腸組織和心臟血液上清中的促炎因子的m RNA水平和蛋白水平和提高抗炎因子的mRNA水平和蛋白水平;hPMSCs可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群轉(zhuǎn)錄因子平衡和巨噬細(xì)胞的極化方向。凝膠包被的hPMSCs只有少量在大鼠腸道內(nèi)存活,但仍有很好的治療效果,我們推測(cè)凝膠包被的hPMSCs可能是通過分泌可溶性細(xì)胞因子來治療TNBS誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎。
[Abstract]:Objective: to study whether gel coated human placental derived mesenchymal stem cells (hPMSCs) has therapeutic effect on experimental colitis induced by 2NZ 4N 6 trinitrobenzene sulfonic trinitrobenzene sulfonic trinitrobenzene in rats and its possible therapeutic mechanism. Local / in situ treatment of inflammatory bowel disease with mesenchymal stem cells (MSCs) provides theoretical basis for the treatment of inflammatory bowel disease (IBDs). The lentivirus containing luciferase (luciferase) gene and green fluorescent protein (GFP) gene was constructed and transfected into hPMSCs.The hPMSCs was coated in gel to make the preparation form of hPMSCs.Rats were randomly divided into three groups: control group, model group, and control group. After fasting for 24 hours, rats in the control group received 1 ml saline enema, and the rats in the model group and the cell therapy group received 1 ml TNBS/ ethanol mixed solution enema. The rats in each group were treated on the 3rd day of the model, and the control group, the control group, and the control group. Rats in the model group were treated with 1 ml blank gel enema, and those in the cell therapy group were treated with hPMSCs enema with 1ml cell density of 1106ml gel. The body weight, fecal shape, spirit, diet, activity and fur luster of the rats were recorded from the 0th day after the establishment of the model. Daily disease activity index was calculated. The rats were killed on the 7th day of the model. The HE histopathological score and colonic length of the colonic tissue of the rats in each group were calculated. RT-PCR and Elisa were used to detect the levels of pro-inflammatory cytokines. RT-PCR in rat colon tissue and heart serum. The levels of T cell subgroup transcription factor T-beta-GATA-3- ROR- 緯 t mRNA and macrophage polarization protein CD68, CD163 and MCP-1 mRNA were detected in vivo. Imaging and immunofluorescence techniques were used to detect luciferase/GFP positive hPMSCs signals to determine the survival and distribution of hPMSCs in the intestine of rats after enema. Results: Gel coated hPMSCs could significantly improve the weight loss of experimental colitis in rats. Symptoms and histopathological changes of hPMSCs could reduce the levels of mRNA and protein of IL-17, IL-1 尾, TNF- 偽, IFN- 緯 and IL-6 in rat colon and heart blood supernatant. Increase the level of TGF- 尾 mRNA and protein of anti-inflammatory factor. HPMSCs coated with gel can regulate the balance of Th cell subsets and the polarization direction of macrophage. The results of in vivo imaging and immunofluorescence showed that only a small number of luciferase/GFP positive hPMSCs existed in the intestinal tract. Conclusion: Gel coated hPMSCs has therapeutic effect on experimental colitis induced by TNBS in rats. HPMSCs can reduce the level of mRNA and protein of proinflammatory factor in colon tissue and blood supernatant of heart and increase mRNA of anti-inflammatory factor. HPMSCs could regulate the balance of transcription factors of T cell subsets and the polarization direction of macrophages. Only a few hPMSCs coated with gel could survive in the intestinal tract of rats. However, there is still a good therapeutic effect. We speculate that the gel coated hPMSCs may be treated with TNBS induced experimental colitis by secreting soluble cytokines.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574.62

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