本文選題：肝纖維化　切入點：肝星狀細胞　出處：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：肝纖維化是對由于病毒、代謝、酒精、化學毒物、遺傳等各種原因導致的慢性肝臟損傷的應答及修復反應，這一進程會致使細胞外基質(extracellular matrix, ECM)過多沉積，多以Ⅰ型膠原為主。若是病因持續(xù)存在，肝纖維化最后將會發(fā)展成肝硬化甚至于肝癌。肝星狀細胞(hepaticstellate cell, HSC)的活化、增殖，致使ECM大量合成及異常堆積，是形成肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。 HSC是肝臟的非實質細胞，健康狀態(tài)下以靜止形式存在于正常肝臟中。多數(shù)研究顯示，當致病因素作用于肝臟使肝受到損害時，HSC即轉變?yōu)榧せ钚螒B(tài)且持續(xù)增殖，大量Ⅰ型膠原等的分泌推進了肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展進程，基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)和金屬蛋白酶抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)是調節(jié)ECM降解的重要細胞因子，而活化的HSC是其主要來源。多種細胞因子能夠引起HSC增殖、膠原合成及細胞遷移，如表皮生長因子(epidermal growthfactor, EGF)、血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)等。 肝素結合性表皮生長因子(heparin-binding epidermal growth factor-likegrowth factor, HB-EGF)是表皮生長因子受體家族(ErbB)的配體之一,且擁有一個與肝素相結合的特殊區(qū)域。它可以結合表皮生長因子受體(EGFR/ErbB1和ErbB4)，激活細胞內信號轉導通路；經(jīng)由絲裂原蛋白激酶(MAPK)信號通路，參加了許多細胞的增殖與遷移過程。研究表明，HB-EGF能夠促進HSC的增殖、抑制凋亡，其對HSC膠原代謝及細胞遷移的影響尚不明確。 本課題研究HB-EGF對肝星狀細胞膠原代謝和細胞遷移的影響，進一步探討HB-EGF在肝纖維化發(fā)生過程中的作用，從而作為了解肝纖維化的發(fā)生機制和給予有效醫(yī)治的理論依據(jù)。 目的：研究HB-EGF對HSC膠原代謝及細胞遷移的影響，探討HB-EGF影響細胞生物學行為的機制。 方法：人肝星狀細胞株HSC LX-2用于實驗，運用體外HSC培養(yǎng)技術，應用HB-EGF的特異性抑制劑CRM197預干預24h，外源性給予HB-EGF干預24h。免疫細胞化學方法檢測α-SMA的表達；Western Blot方法檢測Ⅰ型膠原、α-SMA的表達；Real time-PCR方法檢測α-SMA、Ⅰ型膠原、MMP-1和TIMP-1的mRNA表達；ELISA法檢測Ⅰ型膠原、MMP-1和TIMP-1蛋白表達；采用劃痕實驗方法檢測細胞遷移能力。 結果：①免疫細胞化學方法檢測α-SMA的表達：HB-EGF組較control組陽性表達的細胞明顯增多，，CRM197組較control組陽性表達減少。②Western blot方法檢測α-SMA的蛋白表達，HB-EGF組(0.74±0.04)較control組(0.43±0.02)升高，CRM197組(0.33±0.01)與control組(0.43±0.02)相比、HB-EGF+CRM197組(0.44±0.02)與HB-EGF組(0.74±0.04)相比，表達下降(P0.01)；檢測Ⅰ型膠原的蛋白表達，HB-EGF組(0.57±0.06)與control組(0.36±0.02)比較，表達升高(P0.05)；CRM197組(0.14±0.02)與control組(0.36±0.02)相比、HB-EGF+CRM17組(0.17±0.02)與HB-EGF組(0.57±0.06)相比，表達下降(P0.01)。③Real time-PCR方法檢測α-SMA的mRNA表達，control組、HB-EGF組、HB-EGF+CRM17組、CRM197組結果分別為1、4.37±0.43、1.97±0.26、0.32±0.12，結果與Western blot結果一致(P0.01)；檢測Ⅰ型膠原的mRNA表達，HB-EGF組(4.77±0.62)較control組(1±0)明顯升高(P0.01)，CRM197組(0.15±0.05)與control組(1±0)相比、HB-EGF+CRM17組(0.49±0.18)與HB-EGF組(4.77±0.62)相比，表達下降(P0.05)；檢測TIMP1、MMP1表達：HB-EGF組與control組相比，TIMP1表達增加(5.90±0.34vs1±0)(P0.01)，MMP1的表達無明顯差異(1.27±0.20vs1±0)(P＞0.05)，MMP1/TIMP1比值下降(0.22±0.04、1±0)(P0.05)。④ELISA方法檢測Ⅰ型膠原、TIMP1、MMP1的表達，結果與Real time-PCR結果一致(P0.05)。⑤劃痕實驗檢測細胞遷移:干預后檢測劃痕未融合面積，HB-EGF組(1.23±0.1)比control組(1.78±0.3)明顯減小，CRM197組(2.49±0.38)比control組(1.78±0.3)增大，兩組之間有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論：HB-EGF使HSC的α-SMA表達增多，證實HSC進一步活化；HB-EGF促進HSC膠原合成；HB-EGF可通過從mRNA水平增加TIMP-1的表達，從而加劇MMP-1和TIMP-1比例失衡，抑制已合成的ECM降解、促進沉積；HB-EGF促進細胞遷移。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 張莉娟;何彬彬;黃月紅;陳治新;王小眾;;HB-EGF對HSC-T6細胞Ras/ERK通路的激活及對MMP-2、TIMP-1表達的影響[J];福建醫(yī)科大學學報;2016年02期

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1 何彬彬;大鼠肝星狀細胞活化過程中Ras/ERK信號通路及miR-221/222表達的變化[D];福建醫(yī)科大學;2015年

本文編號：1574159