本文選題：獻(xiàn)血人群　切入點(diǎn)：隱匿性乙肝病毒感染　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:了解大連地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者人群中隱匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的流行情況,并對(duì)OBI的分子生物學(xué)特征與S區(qū)基因突變進(jìn)行分析。探討國(guó)內(nèi)血站對(duì)獻(xiàn)血人群乙型肝炎病毒實(shí)行核酸篩查的安全性和可靠性,為OBI感染的預(yù)防控制與監(jiān)測(cè)策略提供重要依據(jù),改進(jìn)血液篩查方法,降低HBV的漏檢率。方法:1.收集常規(guī)標(biāo)本,5ml置于EDTA.K2真空采血管,采集血袋旁路留樣的靜脈血,2-8℃保存,用于血篩 4 項(xiàng)(HBsAg、抗-HCV、HIVAg/Ab 和抗-TP)、ALT、ABO正型反型定型、RhD血型定型以及需要補(bǔ)充的乙肝血清學(xué)HBsAg,HBsAb(定量,IU/L),HBcAb,HBeAg,HBeAb 5項(xiàng)(乙肝血清學(xué)5項(xiàng))的測(cè)定;核酸標(biāo)本:5mlEDTA.K2分離膠真空采血管,采集血袋旁路留樣的靜脈血,2-8℃保存,用于NAT檢測(cè)和HBV DNA提取。2.應(yīng)用血清學(xué)方法(ELISA)常規(guī)篩查HBsAg聯(lián)合核酸檢測(cè),從68565例無(wú)償獻(xiàn)血者樣本中篩選出95例HBsAg陰性NAT陽(yáng)性樣本加以跟蹤或回溯,結(jié)合乙型肝炎血清學(xué)5項(xiàng)試驗(yàn)、鑒別試驗(yàn)和半巢式PCR來(lái)確認(rèn)是否為HBV感染;經(jīng)分析進(jìn)一步確認(rèn)是否為OBI感染。3.對(duì)95例HBsAg-NAT+血漿樣本進(jìn)行手工HBV DNA的提取,對(duì)preSS區(qū)和S區(qū)進(jìn)行巢式PCR以及序列測(cè)定,并與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)分析基因變異。使用MEGA5.2軟件進(jìn)行OBI分析生物學(xué)特征和S區(qū)氨基酸突變分析。結(jié)果:(1)68565例大連地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者樣本共篩查出95例HBsAg-/NAT陽(yáng)性樣本,95例HBsAg-NAT+獻(xiàn)血者的血清學(xué)結(jié)果:其中產(chǎn)生HBcAb(不考慮HBsAb)占 64.2%(61/95);產(chǎn)生保護(hù)性 HBsAb(不考慮 HBcAb)占 50.5%(48/95);全陰性占 16.8%(16/95);僅 HBcAb 陽(yáng)性 29 例,占 30.5%(29/95);僅 HBsAb 陽(yáng)性16 例,占 16.8%(16/95)。(2)95 例 HBsAg(-)/NAT(+)樣本血漿中確定存在 HBVDNA的人數(shù)為40例。通過(guò)原樣本鑒別為HBVDNA反應(yīng)性39例,其中包括鑒別試驗(yàn)得到30例,鑒別率為31.2%(30/95);未鑒別出HBV但是手工抽提得到序列的有9例。另有1例當(dāng)次獻(xiàn)血未鑒別出HBV也未獲得序列,但在其跟蹤數(shù)據(jù)中鑒別HBV陽(yáng)性。(3)從40例獻(xiàn)血者血漿中存在HBV DNA的樣本中共確認(rèn)OBI樣本35例,大連地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者人群OBI感染率為1:1959(35/68565)。(4)35例樣本中有27例樣本成功進(jìn)行S區(qū)基因巢式PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定,HBV基因型分型結(jié)果顯示22例為C型,4例為B型,1例為A2型,以C型為主,占81.5%(22/27)。(5)突變分析發(fā)現(xiàn)27例OBI樣本中HBV S區(qū)氨基酸變異率高,尤其是HBsAg抗原決定簇基因及周邊主要親水區(qū)域(MHR)發(fā)生氨基酸突變。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)從68565例無(wú)償獻(xiàn)血人群中篩查出95例HBsAg(-)/NAT(+)血液樣本,其中35例確認(rèn)為OBI感染,大連地區(qū)OBI的流行以C基因型為主。HBV S區(qū)主要親水區(qū)(MHR)氨基酸的突變可能影響了 HBsAg的分泌和蛋白的表達(dá),與OBI的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。此研究數(shù)據(jù)結(jié)果為血液篩查方法的改進(jìn)以及OBI的研究提供了依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the prevalence of occult hepatitis B virus infection (OBI) among unpaid blood donors in Dalian area. The molecular biological characteristics and S region mutation of OBI were analyzed. The safety and reliability of nucleic acid screening for hepatitis B virus (HBV) in blood donors in China were discussed, which provided an important basis for the prevention, control and surveillance of OBI infection. To improve the method of blood screening and to reduce the rate of missed detection of HBV. Methods 1. Collect 5 ml of routine samples and put them into EDTA.K2 vacuum to collect blood vessels, and collect venous blood samples from blood bag bypass to be preserved at 2-8 鈩，

本文編號(hào)：1557739