本文關(guān)鍵詞： 36個氨基酸多肽片段 伴刀豆蛋白A 肝損傷 肝細(xì)胞凋亡 生存分析　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：肝病是一類較常見的嚴(yán)重影響人類健康的疾病，若肝損傷長期得不到及時有效的治療，最終會進(jìn)展為肝癌或肝衰竭，顯著降低病人生存質(zhì)量并直接威脅生命。雖然不同的肝病發(fā)生機(jī)制各不相同，但有研究表明免疫系統(tǒng)在大多數(shù)發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。伴刀豆蛋白A(Con A)誘導(dǎo)的急性肝損傷模型是一個較理想的T細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎小鼠模型，用來模擬人病毒性和自身免疫性肝病。 36個氨基酸多肽片段是本室前期在尋找早期肝炎臨床診斷的生物標(biāo)志物時運(yùn)用基質(zhì)輔助激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）從慢性肝炎病人血清中檢測到的一個含量較高的多肽。經(jīng)初步研究發(fā)現(xiàn)該多肽高表達(dá)可改變體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞的增殖周期，，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入S期。 迄今為止，還沒有關(guān)于該多肽在肝炎動物模型中生理和病理作用的研究，我們推測其可能在肝炎的進(jìn)展過程中發(fā)揮作用，故進(jìn)行本研究。本研究利用ConA誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型研究該36個氨基酸多肽片段在免疫誘導(dǎo)的肝損傷中的作用，并初步探討其作用機(jī)制，為下一步臨床肝病治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1預(yù)防性給予小鼠人工合成的36個氨基酸多肽片段或地塞米松，一小時后注射Con A誘導(dǎo)肝損傷。Con A注射12小時后檢測各組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平，肝組織進(jìn)行石蠟包埋并作HE染色，觀察該多肽預(yù)防性給藥對ConA誘導(dǎo)肝損傷的影響。 2預(yù)防性給予小鼠人工合成的36個氨基酸多肽片段或地塞米松，一小時后給予致死劑量Con A，觀察各組小鼠72小時內(nèi)的死亡情況，進(jìn)行生存分析，進(jìn)一步確定該多肽片段對ConA誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)性作用。 3流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測各組小鼠肝細(xì)胞凋亡及有絲分裂情況，從肝細(xì)胞角度探討該多肽片段在ConA誘導(dǎo)肝損傷過程中的作用機(jī)制。 4FCM檢測各組小鼠肝組織淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞、NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞）浸潤情況，探討該多肽片段在ConA誘導(dǎo)肝損傷免疫應(yīng)答方面的作用機(jī)制。 5通過尾靜脈注射Con A誘導(dǎo)肝損傷，0.5小時后給予36個氨基酸多肽片段進(jìn)行治療，檢測Con A注射后12小時后各組血清ALT和AST水平，肝組織進(jìn)行石蠟包埋并作HE染色，觀察其對ConA誘導(dǎo)肝炎的治療作用。此外，用致死劑量ConA處理小鼠后，用多肽片段或地塞米松治療，觀察其72小時內(nèi)的死亡情況，做生存分析，進(jìn)一步確定該多肽片段對ConA所致肝損傷的治療效果。 結(jié)果： 136個氨基酸多肽片段預(yù)防性給藥對Con A誘導(dǎo)的肝損傷的影響 與模型組相比，各多肽片段及地塞米松預(yù)防性給藥組均顯著降低血清ALT和AST水平(均P0.05)。HE染色結(jié)果顯示模型組小鼠肝組織出現(xiàn)典型肝壞死表現(xiàn)及淋巴細(xì)胞浸潤；多肽片段75μg/kg組肝細(xì)胞壞死明顯減少，其他劑量組（150μg/kg、300μg/kg和600μg/kg）以及地塞米松組均未見肝細(xì)胞壞死區(qū)域。 236個氨基酸多肽片段預(yù)防性給藥對致死劑量Con A導(dǎo)致的小鼠生存情況的影響 多肽片段和地塞米松預(yù)防性給藥組小鼠生存率分別為70%和80%，中位生存時間均為72小時，均顯著高于模型組（20%，11小時），可見多肽片段能有效降低小鼠的死亡率(均P=0.004)。 336個氨基酸多肽片段預(yù)防性給藥對肝細(xì)胞周期和凋亡的影響 各多肽片段及地塞米松預(yù)防性給藥組小鼠凋亡肝細(xì)胞所占比例分別為14.73±3.37%，10.01±0.78%，6.41±0.98%，12.86±1.79%，8.4±2.01%，均顯著低于Con A模型組30.24±1.29%，P值均小于0.01；隨著多肽片段劑量增大凋亡細(xì)胞所占比例呈現(xiàn)下降趨勢，當(dāng)多肽片段達(dá)到600μg/kg時凋亡細(xì)胞所占比例出現(xiàn)上升。多肽片段600μg/kg組G0/G1期肝細(xì)胞所占比例顯著高于模型組，G2/M期和S期肝細(xì)胞所占比例顯著低于模型組(均P0.01)；多肽片段75μg/kg、150μg/kg和300μg/kg組G2/M肝細(xì)胞所占比例均低于模型組(均P0.05)；地塞米松組G0/G1期肝細(xì)胞所占比例顯著高于模型組，G2/M期和S期肝細(xì)胞所占比例顯著低于模型組(均P0.01)。 436個氨基酸多肽片段預(yù)防性給藥對肝組織淋巴細(xì)胞浸潤數(shù)量的影響 各多肽片段預(yù)防性給藥組小鼠肝組織浸潤T細(xì)胞、NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞比例與模型組相比無明顯差異，地塞米松組T細(xì)胞和NKT細(xì)胞比例顯著低于模型組(均P0.01)。 536個氨基酸多肽片段對Con A所引起的肝損傷的治療作用 多肽片段治療組和地塞米松治療組血清ALT和AST水平均顯著低于模型組(均P0.01)，HE染色均未見明顯肝細(xì)胞壞死區(qū)域。對致死劑量ConA誘導(dǎo)的肝損傷，多肽片段治療后小鼠生存率和中位生存時間分別為50%和58小時，地塞米松治療后小鼠生存率和中位生存時間分別為60%和72小時，兩組的生存率和中位生存時間均顯著高于模型組（20%，13小時，P0.026，P0.011），說明治療性給藥也可提高小鼠生存率和中位生存時間。 結(jié)論： 1外源性給予36個氨基酸多肽片段可有效預(yù)防和治療Con A誘導(dǎo)的肝炎。 2外源性給予36個氨基酸多肽片段減輕Con A所引起肝損傷的機(jī)制可能與抑制肝細(xì)胞凋亡及影響細(xì)胞有絲分裂有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號：1499636