本文關(guān)鍵詞：血清（血漿）miRNA對慢性乙型肝炎肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷價值的臨床研究　出處：《上海交通大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一章慢性乙型肝炎肝纖維化進程中差異表達循環(huán)mi RNA的篩選目的:本研究旨在尋找在慢性乙型肝炎肝纖維化各分期分組之間差異表達的血清(血漿)mi RNA,為發(fā)現(xiàn)乙肝肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷標志物及組建診斷模型奠定基礎(chǔ)。方法:研究材料為2012年7月-2013年12月間于上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院行肝活檢的慢性HBV感染患者血漿樣本共50例(肝纖維化Scheuer分期S0-S4期各10例),提取血清(血漿)mi RNA,并采用安捷倫公司人類mi RNA芯片v 18.0(Affymetrix Human v18.0)進行mi RNA芯片雜交、掃描及數(shù)據(jù)提取。應(yīng)用Quantile歸一化法進行數(shù)據(jù)標準化后,主要采用獨立樣本t檢驗、ANOVA分析S0-S4組間、非顯著性肝纖維化和顯著性肝纖維化組間(S0-1/S2-4)、輕度肝纖維化和重度肝纖維化(S0-1/S3-4)組間mi RNA的差異表達。結(jié)果:從芯片結(jié)果來看,S1-S4組分別與S0組比較,差異倍數(shù)大于2倍的mi RNA共有140個(p0.05);在非顯著性肝纖維化(S0-1)和顯著性肝纖維化(S2-4)兩組間差異表達達2倍以上的mi RNA共有11個;重度纖維化組(S3-4)與輕度纖維化組(S0-1)相比,差異倍數(shù)達2倍以上的mi RNA共有7個。因hsa-mi R-1225-3p,hsv1-mi R-H7-3p,hsa-mi R-1238-3p,hsa-mi R-3162-3p,hsa-mi R-4721在輕度纖維化/明顯纖維化組間表達倍數(shù)達3-5倍以上,且在不同的分組比較中均有差異,我們擬定上述mi RNAs作為候選差異mi RNA進行進一步的實時熒光定量驗證實驗。結(jié)論:采用血清(血漿)mi RNA芯片技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)mi RNA表達譜的變化與肝纖維化分期密切相關(guān),該研究為肝纖維化無創(chuàng)性診斷物的開發(fā)和應(yīng)用提供了可能。第二章慢性乙型肝炎肝纖維化相關(guān)差異表達mi RNA的驗證、診斷模型的建立及評估目的:本研究旨在對mi RNA芯片實驗篩選的5個mi RNA進行進一步驗證,同時應(yīng)用logistic回歸方法優(yōu)化組合各mi RNA,建立顯著性肝纖維化(S2-4)的預(yù)測診斷模型,評估該模型診斷效能并進一步與其他預(yù)測模型(APRI評分、Forn's評分、FIB-4評分、S指數(shù))在預(yù)測診斷價值方面進行比較。方法:本部分的研究材料入選標準同第一部分實驗,均來自上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院,收集時間為2012年7月至2014年12月間,病例組血清(血漿)共83份(SO組10份,S1組15份,S2組13份,S3組10份,S4組10份,肝硬化代償組13份,肝硬化失代償組12份)及正常對照組血漿(血清)標本20份進行實時熒光定量PCR驗證實驗。本階段我們用Taqman q RT-PCR方法在103份樣本中驗證5個候選mi RNA的穩(wěn)定性,獲得5個mi RNA相對表達量后,采用獨立樣本t檢驗分析其在非顯著性肝纖維化(S0-1)/顯著性肝纖維化(S2-4)、肝纖維化/肝硬化組、代償期肝硬化/失代償期肝硬化組間的差異,從結(jié)果中進一步篩選目標mi RNA,并使用logistic回歸模型對其進行優(yōu)化組合獲得診斷模型,繪制診斷模型的ROC曲線及計算AUROC來判斷該模型的診斷價值,并同時與診斷模型Forns指數(shù)、APRI指數(shù)、FIB-4評分以及S指數(shù)進行診斷效能的比較。結(jié)果:5個候選mi RNA在顯著性肝纖維化組/非顯著性肝纖維化組組間表達水平有顯著性差異(p0.05),hsa-mir-1225-3p,hsa-mir-1238,hsa-mi R-3162-3P,hsa-mi R-4721,hsa-mi R-H7上調(diào)倍數(shù)分別為:10、10.23、16、4.85、4.7,與芯片結(jié)果基本相符,但上述mi RNA對肝纖維化/肝硬化組、代償期肝硬化/失代償期肝硬化組間區(qū)分度不高。我們通過建立受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC曲線),進行計算ROC曲線下面積(Area Under Curve,AUC)對每個mi RNA的診斷能力進行判斷,得到mi RNA-3162,mi RNA-1225,mi RNA-1238,mi RNA-4721,mi RNA-H7的AUROC面積分別為0.899,0.852,0.656,0.650,0.650,可見mi RNA-3162,mi RNA-1225對明顯肝纖維化診斷效能極強,而mi RNA-1238,mi RNA-4721,mi RNA-H7診斷價值較為一般。為進一步優(yōu)化診斷效能,我們對上述5個mi RNA進行逐步logistic回歸,得到診斷方程式Mi R-5=1.115*mi R1225+0.157*mi R1238+6.256*mi R3162+0.072*mi R4721-0.831mi RH7-2.729。同樣通過ROC曲線下面積評估其診斷效能,其區(qū)分明顯肝纖維化和輕度肝纖維化的AUC為0.909,診斷效能優(yōu)于Forns指數(shù)、APRI指數(shù)、FIB-4評分和S指數(shù)等預(yù)測模型及單個差異mi RNA。結(jié)論:采用Taqman q RT-PCR技術(shù),我們驗證hsa-mir-1225-3p,hsa-mir-1238,hsa-mi R-3162-3P,hsa-mi R-4721,hsa-mi R-H7是一組新的有前景的非創(chuàng)傷性肝纖維化分子診斷標志物。診斷方程式Mi R-5能十分高效的將顯著性肝纖維化和非顯著性肝纖維組區(qū)分開來,保持較高的敏感度、特異度,且優(yōu)于現(xiàn)存的其他無創(chuàng)性診斷模型(Forns指數(shù)、APRI指數(shù)、FIB-4評分以及S指數(shù))及單個差異mi RNA。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2;R512.62

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本文編號：1323437