本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽對(duì)體外誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝細(xì)胞LC3Ⅱ、p62表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:通過(guò)觀察胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)受體激動(dòng)劑利拉魯肽干預(yù)體外誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型,檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)指標(biāo)LC3Ⅱ、p62的變化,及細(xì)胞凋亡情況的變化,探討利拉魯肽對(duì)非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的治療作用效果及機(jī)制。方法:用含10%胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的DMEM培養(yǎng)液于體外培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞-L02細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)基中加入油酸、棕櫚酸(2:1)誘導(dǎo)肝脂肪變性,建立NAFLD模型。細(xì)胞分組:1)正常對(duì)照組;2)NAFLD模型組;3)NAFLD模型組+利拉魯肽治療組+高脂培養(yǎng)液組:高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L利拉魯肽;4)NAFLD模型組+利拉魯肽治療組+正常培養(yǎng)液組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;5)正常組+利拉魯肽:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;各組分別干預(yù)48h,收集樣品。應(yīng)用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)肝細(xì)胞中甘油三酯(Triglyceride,TG)的含量及上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)的水平,試劑盒檢測(cè)丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)含量,采用油紅“O”染色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂滴情況。采用q RT-PCR檢測(cè)LC3Ⅱ、p62 mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)微管相關(guān)蛋白1-輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)、真核細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)調(diào)控蛋白P62(sequestosome1,SQSTM1)蛋白表達(dá)的變化;采用TUNNEL分析法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況的變化。明確利拉魯肽改善人肝細(xì)胞系NAFLD模型療效的部分機(jī)制。數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn),對(duì)于符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析(one-way ANOVA),對(duì)于不符合正態(tài)分布的采用K-W秩和檢驗(yàn),以P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 利拉魯肽對(duì)正常L02細(xì)胞的TG、ALT、SOD、MDA水平、LC3Ⅱ、p62 mRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響(P0.05)。2 與正常對(duì)照組比較,NAFLD組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多,TG、ALT、MDA水平升高,SOD水平降低,LC3ⅡmRNA和蛋白表達(dá)均降低,p62mRNA蛋白表達(dá)增加,凋亡指數(shù)增加,差異均有顯著性(P0.05)。3 與NAFLD細(xì)胞模型組比較,NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組、NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯減少,TG、ALT、MDA水平下降,SOD水平明顯升高,LC3Ⅱ mRNA和蛋白表達(dá)均升高,p62 mRNA蛋白表達(dá)減少,凋亡指數(shù)下降,差異均有顯著性(P0.05)。4與NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組比較,NAFLD細(xì)細(xì)胞胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組內(nèi)脂滴減少幅度較低,TG、ALT、MDA水平下降幅度減少,SOD水平升高,LC3Ⅱ、p62 mRNA和蛋白表達(dá)、細(xì)胞凋亡指數(shù)水平改變幅度較低,差異均有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1 在體外成功建立非酒精性脂肪肝的細(xì)胞模型;2 GLP-1受體激動(dòng)劑利拉魯肽可減輕肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,改善肝細(xì)胞功能。3 GLP-1受體激動(dòng)劑利拉魯肽可通過(guò)增加細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平,改善細(xì)胞脂代謝,維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài),減少細(xì)胞凋亡,對(duì)非酒精性脂肪肝起到治療作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳蘭芳;肖亮;楊軍平;;細(xì)胞自噬的分子機(jī)制及其功能[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2014年02期

2 趙玲;徐勉;;非酒精性脂肪性肝病與脂聯(lián)素及胰島素抵抗的關(guān)系[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2009年01期

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本文編號(hào)：1280348