本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對小鼠脂肪肝缺血再灌注損傷的保護(hù)及Gadd45a表達(dá)分析

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【摘要】：目的:建立小鼠脂肪肝缺血再灌注損傷模型,檢測白藜蘆醇對Gadd45a表達(dá)的影響,探討白藜蘆醇對脂肪肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法本實驗分為兩部分。第一部分為預(yù)實驗階段(建立小鼠脂肪肝缺血再灌注損傷模型)。第二部分為正式試驗階段,即在成功建立小鼠脂肪肝缺血再灌注損傷模型后,研究白藜蘆醇預(yù)處理對脂肪肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用以及可能的相關(guān)機制。1.預(yù)實驗階段:選取8-12周健康的、雄性的KM小鼠(南華大學(xué)實驗動物中心購買)14只,體重17-24g。采用國際上被廣泛認(rèn)可的小鼠脂肪肝模型:缺乏蛋氨酸及膽堿飲食誘發(fā)的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型。實驗前予以缺乏蛋氨酸及膽堿飲食喂養(yǎng)14d,實驗當(dāng)天參照Pringle’s法創(chuàng)立小鼠脂肪肝缺血再灌注模型,夾閉肝蒂血管20分鐘。缺血再灌注2h后再剪取小鼠肝組織化驗,觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)變化。2正式實驗階段:選擇8-12周健康的雄性km小鼠21只,體重在17-24g之間;完全隨機分成3組,每組7只:一組小鼠在實驗前給予普通飲食14d;在實驗前連續(xù)2d及實驗當(dāng)天,每天清晨給予0.9%氯化鈉注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg劑量計算);第二組小鼠在實驗前給予缺乏蛋氨酸及膽堿飲食14d;在實驗前連續(xù)2d及實驗當(dāng)天,每天清晨給予0.9%氯化鈉注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg劑量計算);第三組小鼠在實驗前給予缺乏蛋氨酸及膽堿的飲食14d,在實驗前連續(xù)2d及實驗當(dāng)天,每天清晨給予10%白藜蘆醇注射液腹腔注射1次(按照30mg/kg劑量計算)。實驗當(dāng)天第一組僅行簡單的開關(guān)腹即可,不夾閉肝蒂血管;第二組以及第三組參照pringle’s法創(chuàng)立小鼠脂肪肝缺血再灌注模型,夾閉肝蒂血管20分鐘。待各組小鼠造模成功后,再剪取小鼠肝組織及抽取血清化驗;檢測各組小鼠肝功能水平,觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)變化;使用western-blot檢測肝組織gadd45a的表達(dá)水平。最后采用spss17.0軟件統(tǒng)計分析各組數(shù)據(jù)結(jié)果。結(jié)果:1.預(yù)實驗階段:共選取14只小鼠建立脂肪肝缺血再灌注損傷模型。基本掌握了小鼠脂肪肝喂養(yǎng)方法、外科無菌術(shù)、外科開腹肝蒂血管夾閉、麻醉劑量控制、外科補液等問題的技巧;其中死亡2例。死亡原因為開腹時損傷膈肌致氣胸所致。其余12例小鼠缺血再灌注2小時后仍較活潑。肝組織病例切片顯示:12例小鼠肝臟都有明顯的空泡狀變性,肝小葉多處有炎癥細(xì)胞浸潤,肝組織結(jié)構(gòu)紊亂,未見纖維化及肝硬化表現(xiàn)。提示小鼠脂肪肝缺血再灌注損傷造模成功。2.正式實驗階段:(1)三組均未見死亡病例。經(jīng)過14d的mcd飲食,b、c組小鼠肝細(xì)胞均產(chǎn)生空泡狀變性。(2)肝功能:選用高靈敏度生化分析儀檢測小鼠血清alt;第一組小鼠血清alt均在正常范圍內(nèi)波動;第二季第三組小鼠血清alt均明顯高于第一組,并且通過白藜蘆醇預(yù)處理過的第三組小鼠比第二組小鼠血清alt均有不同程度的下降;統(tǒng)計軟件分析結(jié)果提示各組小鼠血清結(jié)果有比較明顯的差異,p0.01,有統(tǒng)計學(xué)意義。提示白藜蘆醇預(yù)處理能顯著減輕脂肪肝缺血再灌注損傷的程度,保護(hù)肝功能。(3)肝組織病理學(xué)變化:第一組小鼠肝小葉及肝血竇形態(tài)正常,肝細(xì)胞未見炎癥浸潤及壞死,未見大泡性脂肪變性;第二及第三組小鼠肝細(xì)胞均有不同程度的空泡狀變性、炎癥侵犯及肝細(xì)胞壞死,但是經(jīng)過白藜蘆醇預(yù)處理過的第三組肝細(xì)胞空泡狀變性、壞死及炎癥程度比第二組明顯下降;提示白藜蘆醇能減少脂肪肝缺血再灌注損傷中的空泡狀變性以及炎癥壞死程度。4.Western-blot檢測:第一組Gadd45a的表達(dá)較為微弱;第二組及第三組Gadd45a表達(dá)水平比第一組明顯增高,但是經(jīng)過白藜蘆醇預(yù)處理的第三組Gadd45a表達(dá)水平比第二組高;經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析各組Gadd45a表達(dá)水平有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示白藜蘆醇能增加脂肪肝缺血再灌注損傷中Gadd45a的表達(dá)水平。結(jié)論:1.白藜蘆醇能明顯減輕小鼠脂肪肝臟缺血再灌注損傷的程度,從而保護(hù)肝功能。2.白藜蘆醇可提高脂肪肝缺血再灌注損傷中肝組織Gadd45a的表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1253998