本文關(guān)鍵詞：角蛋白1對實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障功能的影響

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【摘要】：[目的]通過葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sulfate Sodium salt, DSS)誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型和甲潑尼龍(Methylprednisolone, MP)干預(yù)實(shí)驗(yàn),觀察炎癥并檢測各組結(jié)腸黏膜中細(xì)胞骨架蛋白角蛋白1(Keratin 1, KRT1)和緊密連接蛋白claudin-2. occludin及zonula occluden-1 (ZO-1)的表達(dá)情況,初步探討角蛋白1對實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障功能的作用機(jī)制。[方法]1、DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型：①、雄性SPF級C57BL/6小鼠32只隨機(jī)分為正常對照組(n=15)、DSS模型組(n=17)。DSS組自由飲用4% DSS溶液7天,正常對照組飲用去離子水7天；于第8天處死小鼠獲取標(biāo)本；②、評估疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease cctivity index, DAI)、體重變化、大體損傷評分、結(jié)腸長度和重量、脾臟長度和重量以及結(jié)腸黏膜組織病理學(xué)評分；③、采用免疫組織化學(xué)方法檢測各組結(jié)腸黏膜中KRT1、claudin-2、occludin及ZO-1蛋白的表達(dá)水平。2、甲潑尼龍干預(yù)實(shí)驗(yàn)：①、雄性SPF級C57BL/6小鼠45只隨機(jī)分為正常對照組(n=15)、DSS+羥丙基甲基纖維素(hydroxypropyl methyl cellulose, HPMC)組(n=15)、DSS+MP組(n=15)。DSS+HPMC組、DSS+MP干預(yù)組自由飲用3%DSS溶液5天；DSS+MP干預(yù)組于第6天起予MP溶液(10mg/Kg,1次/天,溶于HPMC中)灌胃,共干預(yù)5天,DSS+HPMC組于第6天起予MP組等體積的HPMC溶液(1次/天)灌胃,期間對照組自由飲用去離子水,于第13天處死小鼠獲取標(biāo)本。②、觀測指標(biāo)和檢測方法同第一部分。3、結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析：應(yīng)用SPSS21.0軟件對上述結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,并對結(jié)腸黏膜中KRT1、claudin-2、 occludin和ZO-1蛋白的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。[結(jié)果]1、DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠模型：與正常對照組相比,DSS模型組體重下降明顯；DAI評分和結(jié)腸大體評分明顯增加(p0.01),伴有結(jié)腸長度縮短(p0.01)、重量減輕(p0.05)；脾臟長度增加(p0.01),重量增加(p0.01)；結(jié)腸組織病理見黏膜缺損、上皮破壞和不同程度的中性粒細(xì)胞浸潤,組織病理評分明顯增加(p0.01)；免疫組化顯示結(jié)腸黏膜KRTI、occludin和ZO-1蛋白表達(dá)較正常對照組明顯減少(p0.01),而claudin-2蛋白表達(dá)明顯增加(p0.01)。2、甲潑尼龍干預(yù)實(shí)驗(yàn)：與正常對照組相比,DSS+HPMC組體重下降明顯；DAI評分和結(jié)腸大體評分明顯增加(p0.01),伴有結(jié)腸長度縮短(p0.01)、重量增加(p0.01)；脾臟長度增加(p0.01),重量增加(p0.01)；結(jié)腸組織病理見黏膜缺損、上皮破壞和不同程度的炎性細(xì)胞浸潤,組織病理評分明顯增加(p0.01)；免疫組化顯示結(jié)腸黏膜KRTI、occludin和ZO-1蛋白表達(dá)較正常對照組明顯減少(p0.01), claudin-2蛋白明顯增加(p0.01)。予MP干預(yù)后,與DSS+HPMC組相比,小鼠體重下降更為明顯；DAI評分和結(jié)腸大體評分降低(2.17±0.42 vs 2.64±0.48,1.23+0.44 vs 2.00+0.77,p0.05),同時(shí)結(jié)腸長度有所縮短(5.73cm±0.50cm vs 5.94cm±0.22cm, p0.05)、重量減輕(0.32g±0.07g vs0.38g±±0.03g,p0.05)：脾臟長度縮短(1.30cm±0.12cm vs 1.45±0.15cm, p0.01),重量減輕(0.063g_±0.0012g vs 0.085g±0.023g p0.01)；結(jié)腸組織病理示中性粒細(xì)胞浸潤減少(6.80±±1.10 vs 8.00±1.50,p0.05)；免疫組化顯示結(jié)腸黏膜KRTI、occludin蛋白表達(dá)增加(10.23±1.24 vs 8.64±1.03、8.15±0.90 vs 7.27±±0.65,p0.05),ZO-1蛋白稍增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(8.15±0.99 vs 7.55±0.82, p0.05), claudin-2蛋白表達(dá)減少(7.23±0.83 vs 9.55±1.21,p0.01)。結(jié)腸黏膜KRT1與occludin、ZO-1表達(dá)呈正相關(guān),與claudin-2呈負(fù)相關(guān)(r=+0.884,r=+0.738,r=-0.837,p0.01)。[結(jié)論]1、KRT1、claudin-2、occludin、ZO-1蛋白參與UC的發(fā)病過程；2、在UC治療中,糖皮質(zhì)激素類藥物不僅發(fā)揮抗炎作用,而且可能通過影響細(xì)胞骨架蛋白和緊密連接的表達(dá)來調(diào)節(jié)腸黏膜屏障功能。3、細(xì)胞骨架蛋白KRT1可能與緊密連接蛋白聯(lián)合作用維持腸黏膜屏障功能。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.62

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本文編號：1236220