本文關(guān)鍵詞：共刺激分子B7-H3在急性胰腺炎中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分抗B7-H3單克隆抗體對(duì)小鼠急性胰腺炎模型的影響及機(jī)制研究目的:探究抗B7-H3單克隆抗體(m Ab)對(duì)小鼠急性胰腺炎模型的影響及機(jī)制研究。方法:將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、AP組、Ig G治療組、抗B7-H3 m Ab治療組。采用腹腔注射L-精氨酸的方法制備小鼠急性胰腺炎(AP)模型,Ig G治療組于造模前2h注射Ig G,抗B7-H3 m Ab治療組于造模前2h注射抗B7-H3 m Ab,于造模后2d、3d、4d,收集各組小鼠血液、胰腺及肺組織標(biāo)本。采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)法檢測(cè)對(duì)照組及AP組小鼠胰腺組織B7-H3蛋白表達(dá)。應(yīng)用全自動(dòng)生化免疫分析儀檢測(cè)各組小鼠血清淀粉酶及脂肪酶活性,HE染色評(píng)估各組小鼠胰腺及肺組織病理變化,采用Western blot法檢測(cè)各組小鼠胰腺組織磷酸化NF-κB蛋白表達(dá)變化,ELISA檢測(cè)各組小鼠血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)水平。結(jié)果:B7-H3蛋白在AP小鼠胰腺組織中存在高表達(dá),AP組血清淀粉酶及脂肪酶水平明顯高于對(duì)照組,抗B7-H3 m Ab處理后明顯降低,AP組胰腺組織出現(xiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及胰腺組織壞死,抗B7-H3 m Ab治療組炎性損傷明顯減弱,AP組肺組織出現(xiàn)明顯肺泡壁增厚及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),抗B7-H3 m Ab治療組肺泡壁增厚程度減輕,AP組TNF-α、IL-6、IL-1β水平隨時(shí)間延長(zhǎng)而升高,而抗B7-H3 m Ab治療組促炎因子水平相對(duì)降低,抗B7-H3 m Ab治療組磷酸化NF-κB蛋白水平降低。結(jié)論:B7-H3在AP模型中存在高表達(dá),抗B7-H3 m Ab可以減弱炎癥反應(yīng),緩解胰腺及肺組織的損傷。第二部分抗B7-H3單克隆抗體對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模型的影響及機(jī)制研究目的:探究抗B7-H3單克隆抗體(m Ab)對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模型的影響及機(jī)制研究。方法:體外分離并培養(yǎng)小鼠胰腺腺泡細(xì)胞,分為對(duì)照組、精氨酸組、Ig G治療組、抗B7-H3 m Ab治療組,精氨酸組加入5mg/m L的L-精氨酸;Ig G治療組加L-精氨酸前加入Ig G;抗B7-H3 m Ab治療組加L-精氨酸前加入抗B7-H3 m Ab。ELISA法檢測(cè)6h、12h、24h上清液中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、IL-1β水平。分離并培養(yǎng)腹腔巨噬細(xì)胞,應(yīng)用CD11b抗體對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)行鑒定。將巨噬細(xì)胞分為對(duì)照組、LPS組、精氨酸組、上清液組。LPS組作為陽性對(duì)照,上清液組加入腺泡細(xì)胞精氨酸組上清液。ELISA法檢測(cè)6h、12h、24h上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。將兩種細(xì)胞共培養(yǎng),分為對(duì)照組、AP組、Ig G治療組、抗B7-H3 m Ab治療組。精氨酸組加入5mg/m L的L-精氨酸;Ig G治療組加L-精氨酸前加入Ig G;抗B7-H3 m Ab治療組加L-精氨酸前加入抗B7-H3 m Ab。ELISA法檢測(cè)上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平,Western blot法檢測(cè)腺泡細(xì)胞磷酸化NF-κB蛋白表達(dá)變化,CCK-8檢測(cè)腺泡細(xì)胞生存率。結(jié)果:成功分離并培養(yǎng)小鼠胰腺腺泡細(xì)胞,在腺泡細(xì)胞單培模型中精氨酸組檢測(cè)到低水平炎癥因子表達(dá),抗B7-H3 m Ab治療組炎癥因子水平與Ig G治療組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。成功分離并培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,在巨噬細(xì)胞單培模型中,精氨酸組未見炎癥因子表達(dá),而上清液組表達(dá)明顯升高。在共培養(yǎng)模型中抗B7-H3 m Ab治療組TNF-α、IL-6、IL-1β水平明顯降低,抗B7-H3 m Ab治療組巨噬細(xì)胞中磷酸化NF-κB蛋白水平降低,腺泡細(xì)胞生存率升高。結(jié)論:抗B7-H3 m Ab可能通過NF-κB信號(hào)通路減少巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)水平,進(jìn)而緩解胰腺腺泡細(xì)胞損傷。第三部分急性胰腺炎患者外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平及其臨床意義目的:探究急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清中可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平變化及其對(duì)病情進(jìn)展和嚴(yán)重程度的評(píng)估價(jià)值。方法:以20例健康人血液標(biāo)本為對(duì)照組,收集AP患者發(fā)病1天、3天、7天的血液標(biāo)本共66例,包括輕癥AP(MAP)24例,中度重癥AP(MSAP)24例,重癥AP(SAP)18例;使用ELISA試劑盒檢測(cè)血漿中s B7-H1、s B7-H2和s B7-H3水平,評(píng)價(jià)其與病情進(jìn)展及嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果:MAP、MSAP、SAP 3個(gè)亞組血清s B7-H1水平明顯高于正常對(duì)照組。SAP亞組s B7-H1水平隨病程進(jìn)展逐漸增加,發(fā)病第7天最高,與第3天比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第7天時(shí)SAP亞組顯著高于MSAP亞組。MAP、MSAP、SAP 3個(gè)亞組患者血清s B7-H2水平明顯低于正常對(duì)照組,且3個(gè)亞組第1天s B7-H2均為最高值,此后呈下降趨勢(shì)。MAP亞組第1天s B7-H2與第3天比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在病程第7天,MAP亞組血清s B7-H2明顯高于MSAP。MAP、MSAP、SAP 3個(gè)亞組患者血清s B7-H3水平明顯高于正常對(duì)照組。SAP亞組患者s B7-H3呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢(shì),發(fā)病第3天與第7天比較時(shí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。發(fā)病第1天時(shí),SAP亞組s B7-H3水平顯著高于MSAP亞組。第3天和第7天同一時(shí)點(diǎn)不同亞組比較,MSAP亞組顯著高于MAP,SAP亞組顯著高于MSAP亞組。通過ROC曲線檢測(cè)發(fā)現(xiàn)s B7-H3診斷SAP的準(zhǔn)確性隨病程延長(zhǎng)而逐漸升高,具有較好的診斷價(jià)值。結(jié)論:動(dòng)態(tài)分析AP外周血可溶性共刺激分子B7-H1、B7-H2和B7-H3水平具有評(píng)估病情進(jìn)展和嚴(yán)重程度的價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576

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