本文關(guān)鍵詞：間隙性禁食對(duì)肝臟缺血再灌注的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 肝缺血再灌注損傷 間隙性禁食 炎癥反應(yīng) 腸道菌群

【摘要】：研究背景和目的：目前肝臟的缺血再灌注損傷依然是導(dǎo)致肝臟外科手術(shù)、創(chuàng)傷和和肝移植過(guò)程中高發(fā)病率和死亡率的重要原因之一。肝臟的缺血再灌注損傷是決定肝臟在經(jīng)過(guò)肝葉切除或肝組織移植手術(shù)后肝組織活性最重要的決定因素。為了更加有效的減輕肝缺血再灌注損傷,有關(guān)肝缺血再灌注損傷的機(jī)制和治療方法還需進(jìn)行深入的研究。間隙性禁食和熱量限制可以延長(zhǎng)壽命,并且降低了年齡相關(guān)疾病的發(fā)展。間隙性禁食和熱量限制可抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng),并能降低肝外科手術(shù)和肝移植術(shù)后肝臟的損傷程度,對(duì)肝缺血再灌注損傷有重要的保護(hù)作用。短期間隙性禁食或許是以減少肝外科手術(shù)術(shù)后并發(fā)癥的一個(gè)可行性策略。為了支持其臨床轉(zhuǎn)化,間隙性禁食對(duì)肝缺血再灌注損傷保護(hù)作用的需進(jìn)一步闡明。因此我們利用小鼠的肝缺血再灌注損傷的模型,來(lái)研究間隙性禁食對(duì)肝臟的保護(hù)作用是否與肝臟的能量代謝、炎癥反應(yīng)或腸道菌群改變有關(guān)。研究方法：1.將間隙性禁食小鼠作為實(shí)驗(yàn)組小鼠,隨意進(jìn)食的同窩野生型小鼠作為對(duì)照組小鼠,建立肝缺血再灌注損傷模型。術(shù)后6h、12h和24h收取兩組小鼠肝臟、血清和結(jié)腸糞便。2.利用血生化自動(dòng)分析儀檢測(cè)肝轉(zhuǎn)氨酶、血糖、血甘油三酯、血膽固醇、游離脂肪酸的表達(dá)水平。3.用專用的商品化試劑盒檢測(cè)血清肝β-羥基丁酸和肝組織中肝甘油三酯、肝糖原和肝β-羥基丁酸的含量。4.利用ELISA法檢測(cè)血清炎性因子TNF-α, IL-1β, IL-6和IL-10的表達(dá)。5.用專用的商品化試劑盒檢測(cè)還原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫(H202)的表達(dá)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPx)的活性。6.用TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞的凋亡壞死。7.用western blot法檢測(cè)肝組織中NF-KB, MAPKs信號(hào)通路蛋白、NLRP3炎性復(fù)合物蛋白及LPS/TLR4信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。8.采用CTAB方法提取樣本的基因組DNA,對(duì)16S rDNA高變區(qū)測(cè)序序列進(jìn)行擴(kuò)增,利用HiSeq PE250平臺(tái)測(cè)序,測(cè)序?yàn)閂3-V4區(qū),進(jìn)行腸道菌群物種的鑒定。結(jié)果：1.間隙性禁食可減輕了小鼠的體重。2.間歇性禁食對(duì)缺血再灌注損傷有重要的保護(hù)作用,降低了血清ALT、AST的水平。3.間歇性禁食引起了肝臟能量來(lái)源的改變,間隙性禁食組小鼠的血糖、血膽固醇、血甘油三酯下降,血清β-羥基丁酸和血游離脂肪酸(FFA)的濃度逐漸升高。間隙性禁食組小鼠的肝糖原和肝甘油三酯含量逐漸降低、脂肪酸β氧化活性增強(qiáng),酮體(β-羥基丁酸)生成增加。4.間隙性禁食通過(guò)抑制肝缺血再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)來(lái)減輕肝臟的損傷。間隙性禁食(IF)組肝組�？椀倪�原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫(H202)的表達(dá)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)的活性和任意進(jìn)食(AL)組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.間隙性禁食抑制了肝臟缺血再灌注損傷中的炎性反應(yīng)活性。血清促炎因子如TNF-α, IL-1β, IL-6的表達(dá)降低,血清抑制炎性的因子IL-10的表達(dá)升高。6.IF減少了NF-KB, MAPKs的表達(dá)和抑制了肝缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的NLRP3炎性復(fù)合物的活性。7.間隙性禁食抑制了活性氧的活性,減少了肝缺血再灌注損傷中肝細(xì)胞的凋亡。8.間隙性禁食抑制肝缺血再灌注損傷中肝組織TLR4的表達(dá)。9.間隙性禁食促進(jìn)了肝缺血再灌注損傷中肝組織SIRT3的表達(dá)。10.間隙性禁食抑制了肝缺血再灌注損傷中肝臟的再生。11.間隙性禁食引起了腸壁通透性和腸道菌群組成的改變,促進(jìn)了腸壁上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá),減少了菌群移位的發(fā)生。間隙性禁食可能通過(guò)減少了腸道菌群的移位和腸道格蘭陰性菌的數(shù)量,減輕了肝缺血再灌注損傷。結(jié)論：1.間隙性禁食對(duì)肝臟的缺血再灌注損傷有重要的保護(hù)作用,減輕了肝組織的壞死。2.間隙性禁食引起了肝臟能量代謝的改變,肝臟糖原生成和糖異生作用增強(qiáng),非酯化脂肪酸通過(guò)在肝臟線粒體的脂肪酸β氧化活性增高,生成大量酮體。將酮體作為肝組織和其它肝外器官的能量來(lái)源。3.間隙性禁食可以抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),通過(guò)抑制活性氧的產(chǎn)生,減少了肝細(xì)胞的凋亡和壞死。4.間隙性禁食通過(guò)抑制炎癥反應(yīng),減輕了肝組織的損傷。通過(guò)抑制NF-κB and MAPKs信號(hào)通路和NLRP3炎性復(fù)合物的活性,減少細(xì)胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-18的產(chǎn)生。5.間隙性禁食引起腸壁通透性和腸道菌群組成的改變,間隙性禁食可能通過(guò)減少了腸道格蘭陰性菌的數(shù)量和腸道菌群的移位,可能通過(guò)抑制LPS/TLR4通路的活性,減輕了肝臟的缺血再灌注損傷。
【關(guān)鍵詞】：肝缺血再灌注損傷 間隙性禁食 炎癥反應(yīng) 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞10-12
• 前言12-14
• 第一部分 小鼠間隙性禁食及肝缺血再灌注損傷模型的建立14-18
• 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 第二部分 間隙性禁食對(duì)肝缺血再灌注損傷的影響18-83
• 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-42
• 結(jié)果42-70
• 1. 間隙性禁食對(duì)小鼠體重的影響42
• 2. 間隙性禁食對(duì)肝功能的影響42-44
• 3. 間歇性禁食引起了肝臟能量來(lái)源的改變44-45
• 4. 間隙性禁食通過(guò)抑制肝缺血再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)來(lái)減輕肝臟的損傷45-46
• 5. 間隙性禁食抑制了肝臟缺血再灌注損傷中的炎性反應(yīng)活性46-48
• 6. IF減少了NF-KB，MAPKs的表達(dá)和對(duì)肝缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的化RP3炎性復(fù)合物活性的抑制作用48-50
• 7. 間隙性禁食抑制了肝缺血再灌注損傷中肝細(xì)胞的調(diào)亡50-53
• 8. 間隙性禁食對(duì)肝缺血再灌注損傷中TLR4表達(dá)的影響53
• 9. 間隙性禁食對(duì)肝缺血再灌注損傷中SIRT3表達(dá)的影響53-54
• 10. 間隙性禁食抑制了肝缺血再灌注損傷中肝臟的再生54
• 11. 間隙性禁食引起肝缺血再灌注過(guò)程中腸道菌群的影響54-55
• 12. 腸道菌群DNA的提取及測(cè)序過(guò)程55-70
• 討論70-83
• 研究結(jié)果83-84
• 研究結(jié)論84-85
• 參考文獻(xiàn)85-93
• 文獻(xiàn)綜述93-103
• 參考文獻(xiàn)98-103
• 致謝103-105

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳宇春;難癥驗(yàn)案兩則[J];陜西中醫(yī);2000年04期

2 ;[J];;年期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 任晉軍;間隙性禁食對(duì)肝臟缺血再灌注的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

，

本文編號(hào)：1113194