發(fā)布時間：2017-10-29 09:30

  本文關(guān)鍵詞：乙肝病毒基因組序列擴(kuò)增的條件優(yōu)化和結(jié)果分析

  更多相關(guān)文章： 乙型肝炎病毒 PCR 巢式PCR 方法學(xué)優(yōu)化 生物信息學(xué)

【摘要】：目的優(yōu)化乙型肝炎病毒(HBV)不同長度基因片段PCR擴(kuò)增條件,為后續(xù)機(jī)制研究提供實驗基礎(chǔ)。方法運(yùn)用PCR或巢式PCR(Nested PCR)方法擴(kuò)增6例臨床乙肝患者HBV DNA,針對特異性目的片段,通過優(yōu)化Mg2+濃度、引物濃度、Taq酶用量、DMSO濃度等,獲得特異性擴(kuò)增條帶,PCR產(chǎn)物直接測序并使用CHROMAS、MEGA等生物學(xué)軟件進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)果通過綜合分析各種實驗條件對PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響,最終確認(rèn)在50μL擴(kuò)增體系中,2.5 mmol/L Mg2+、200 nmol/L特異性引物、1.5 U Taq酶、56℃退火在本實驗室可獲得良好的擴(kuò)增效果,適量二甲基亞砜(DMSO)可減少非特異性干擾,同時建議對短片段可酌量減少Taq酶使用量。生物信息學(xué)分析示6例HBV感染標(biāo)本中1例為B基因型,5例為C基因型,共發(fā)現(xiàn)S基因21個核酸變異及9個氨基酸可改變。結(jié)論建立了適合本實驗室的HBV DNA擴(kuò)增體系以及后續(xù)生物信息學(xué)分析方法,明確了不同的擴(kuò)增體系條件對PCR擴(kuò)增效果具有重要影響。
【作者單位】： 安徽省血液中心;福建省血液中心;江西省血液中心;解放軍第105醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 乙型肝炎病毒 PCR 巢式PCR 方法學(xué)優(yōu)化 生物信息學(xué)
【分類號】：R512.62;R440
【正文快照】： #共同第1作者;△通信作者:呂蓉(1969.06-),女,副主任技師,研究領(lǐng)域:輸血免疫學(xué)相關(guān)檢測,電話:13645602742,Email:lvrong612@126.com乙型肝炎病毒(HBV)是引起病毒性肝炎的主要病原體之一,由其引起的傳染病——乙型肝炎感染呈世界性分布,嚴(yán)重危害人類生命健康,成為重要的社會公

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曹彬;張曉棠;吳星;;沈陽地區(qū)乙型肝炎病毒基因型與臨床特征相關(guān)性的分析[J];沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年01期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 汪娟;安徽省部分地區(qū)乙型肝炎分子流行病學(xué)初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐歲;一種新的可視化環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測瘧原蟲的研究及其應(yīng)用評價[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2012年

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本文編號：1112439