本文關(guān)鍵詞：Nrf2過表達(dá)與敲減Hep1-6穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的建立

  更多相關(guān)文章： 核因子NF-E相關(guān)因子(Nrf) Hep-細(xì)胞 Nrf過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株 Nrf敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株 Westernblotting 定量PCR

【摘要】：核因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)是治療非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一個重要靶點(diǎn)分子。為了從體外研究小分子通過靶向Nrf2改善NAFLD的分子機(jī)制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO溲空載體得到重組載體p Lenti6/V5-Nrf2,通過測序、酶切鑒定正確后,擴(kuò)繁質(zhì)粒,制備慢病毒并將其感染Hep1-6肝癌細(xì)胞,用稻瘟醇胚素篩選、鑒定獲得穩(wěn)定表達(dá)Nrf2的細(xì)胞株。同時(shí),用Nrf2干擾質(zhì)粒構(gòu)建慢病毒感染Hep1-6肝癌細(xì)胞,通過嘌呤霉素篩選、鑒定Nrf2敲減的細(xì)胞株。Q-PCR檢測結(jié)果顯示,過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株(p Lenti6/V5-Nrf2)中Nrf2基因的表達(dá)量為對照組(p Lenti6/V5-Lac Z)的4倍,敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株中Nrf2基因的表達(dá)量大幅度降低。Western blotting顯示過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株的Nrf2表達(dá)量明顯高于對照組,敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株的Nrf2表達(dá)量明顯低于對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株,此結(jié)果與Q-PCR結(jié)果一致。所克隆的Nrf2基因和敲減基因在Hep1-6小鼠肝癌細(xì)胞中得到了正確轉(zhuǎn)錄和翻譯,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建成功。
【作者單位】： 南京大學(xué)生命科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 核因子NF-E相關(guān)因子(Nrf) Hep-細(xì)胞 Nrf過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株 Nrf敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株 Westernblotting 定量PCR
【分類號】：Q786
【正文快照】： blotting;定量PCR非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一類無過量飲酒史由其他多種誘因引起的臨床病理綜合征,它的主要特征為肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)蓄積,按病程進(jìn)展可分為單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化和肝硬化3種類型。關(guān)于非酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制,大家普遍認(rèn)可的是“二次打擊”[，

本文編號：1100106