本文關鍵詞：利拉魯肽對體外誘導的非酒精性脂肪肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的作用

  更多相關文章： 非酒精性脂肪肝細胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 GRP78 ATF6 caspase12 利拉魯肽

【摘要】：目的:通過觀察胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體激動劑利拉魯肽干預治療體外誘導的非酒精性脂肪肝細胞模型的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關指標GRP78蛋白表達、ATF6核蛋白水平和caspase12的變化,探討利拉魯肽對NAFLD肝細胞抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激作用及細胞凋亡的機制。方法:1體外誘導非酒精性脂肪肝細胞模型:體外用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)人正常肝細胞L02細胞,加入油酸、棕櫚酸(2:1)誘導肝細胞脂肪變性,建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)細胞模型。2細胞分組及干預:1)正常對照組;2)NAFLD細胞模型組;3)NAFLD細胞模型+利拉魯肽+高脂培養(yǎng)液組:高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;4)NAFLD細胞模型+利拉魯肽+正常培養(yǎng)液組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;5)正常細胞+利拉魯肽組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;各組分別干預48h,收集樣品。檢測細胞內(nèi)脂肪含量與代謝水平。3應用全自動生化儀檢測細胞內(nèi)甘油三酯(TG)的含量及上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT),采用油紅“O”染色法測定細胞內(nèi)脂滴情況。4檢測氧化應激有關的指標MDA和SOD的水平。5采用q RT-PCR與Western blotting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關指標GRP78蛋白表達以及下游ATF6核蛋白水平和細胞凋亡指標caspase12的變化。6采用TUNNEL分析法檢測細胞凋亡的變化。7數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計學分析,計量資料用均數(shù)±標準差表示。實驗數(shù)據(jù)均進行正態(tài)分布檢驗及方差齊性檢驗,符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析(one-way ANOVA),不符合正態(tài)分布的采用K-W秩和檢驗。以P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1利拉魯肽對正常L02細胞的TG、ALT水平、SOD活性、MDA含量、GRP78、ATF6、caspase12m RNA和蛋白表達無明顯影響(P0.05)。2與正常對照組比較,NAFLD組細胞內(nèi)脂滴明顯增多,TG、ALT水平升高,SOD活性降低,MDA含量升高,GRP78、ATF6、caspase12m RNA和蛋白表達均增高,凋亡指數(shù)增加,差異均有顯著性(P0.05)。3與NAFLD細胞模型組比較,NAFLD細胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組、NAFLD細胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組細胞內(nèi)脂滴明顯減少,TG、ALT水平下降,SOD活性升高,MDA含量降低,GRP78、ATF6、caspase12 m RNA和蛋白表達減少,凋亡指數(shù)下降,差異均有顯著性(P0.05)。4與NAFLD細胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組比較,NAFLD細細胞胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組內(nèi)脂滴減少幅度較低,TG、ALT水平下降幅度減少,SOD活性上升幅度降低,MDA含量下降幅度減少,GRP78、ATF6、caspase12 m RNA和蛋白表達、細胞凋亡指數(shù)水平下降幅度較低,差異均有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1高脂環(huán)境下,肝細胞凋亡的增加,而利拉魯肽可以對抗肝細胞凋亡。2 GLP-1受體激動劑利拉魯肽可減輕肝細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,改善肝細胞功能。3 GLP-1受體激動劑利拉魯肽可能通過下調(diào)GRP78、ATF6核蛋白的表達減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,維持細胞穩(wěn)態(tài),進而使caspase-12的表達減少抑制肝細胞凋亡,對非酒精性脂肪肝起到治療作用。
【關鍵詞】：非酒精性脂肪肝細胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 GRP78 ATF6 caspase12 利拉魯肽
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-30
• 附表30-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-38
• 綜述 GLP-1及其類似物在NAFLD治療中作用的進展38-48
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳瀟迪;王軍;熊吉;牟歌;陶林;王斌;陳東風;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的凋亡途徑在大鼠酒精性脂肪性肝病中的變化及意義[J];胃腸病學和肝病學雜志;2013年03期

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3 曾民德;;非酒精性脂肪性肝病研究的關切點[J];肝臟;2009年04期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 高芳;GLP-1受體激動劑對糖耐量減低大鼠β細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激凋亡機制的研究[D];山西醫(yī)科大學;2011年

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本文編號：1062571