發(fā)布時(shí)間：2017-10-19 18:11

  本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽對(duì)體外誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用

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【摘要】：目的:通過(guò)觀察胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體激動(dòng)劑利拉魯肽干預(yù)治療體外誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)GRP78蛋白表達(dá)、ATF6核蛋白水平和caspase12的變化,探討利拉魯肽對(duì)NAFLD肝細(xì)胞抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用及細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法:1體外誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型:體外用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞,加入油酸、棕櫚酸(2:1)誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性,建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)細(xì)胞模型。2細(xì)胞分組及干預(yù):1)正常對(duì)照組;2)NAFLD細(xì)胞模型組;3)NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽+高脂培養(yǎng)液組:高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;4)NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽+正常培養(yǎng)液組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;5)正常細(xì)胞+利拉魯肽組:正常培養(yǎng)液中加入濃度為10 nmol/L利拉魯肽;各組分別干預(yù)48h,收集樣品。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂肪含量與代謝水平。3應(yīng)用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)的含量及上清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT),采用油紅“O”染色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂滴情況。4檢測(cè)氧化應(yīng)激有關(guān)的指標(biāo)MDA和SOD的水平。5采用q RT-PCR與Western blotting檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)GRP78蛋白表達(dá)以及下游ATF6核蛋白水平和細(xì)胞凋亡指標(biāo)caspase12的變化。6采用TUNNEL分析法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化。7數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn),符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析(one-way ANOVA),不符合正態(tài)分布的采用K-W秩和檢驗(yàn)。以P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1利拉魯肽對(duì)正常L02細(xì)胞的TG、ALT水平、SOD活性、MDA含量、GRP78、ATF6、caspase12m RNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響(P0.05)。2與正常對(duì)照組比較,NAFLD組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多,TG、ALT水平升高,SOD活性降低,MDA含量升高,GRP78、ATF6、caspase12m RNA和蛋白表達(dá)均增高,凋亡指數(shù)增加,差異均有顯著性(P0.05)。3與NAFLD細(xì)胞模型組比較,NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組、NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯減少,TG、ALT水平下降,SOD活性升高,MDA含量降低,GRP78、ATF6、caspase12 m RNA和蛋白表達(dá)減少,凋亡指數(shù)下降,差異均有顯著性(P0.05)。4與NAFLD細(xì)胞模型+利拉魯肽治療+正常培養(yǎng)液組比較,NAFLD細(xì)細(xì)胞胞模型+利拉魯肽治療+高脂培養(yǎng)液組內(nèi)脂滴減少幅度較低,TG、ALT水平下降幅度減少,SOD活性上升幅度降低,MDA含量下降幅度減少,GRP78、ATF6、caspase12 m RNA和蛋白表達(dá)、細(xì)胞凋亡指數(shù)水平下降幅度較低,差異均有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1高脂環(huán)境下,肝細(xì)胞凋亡的增加,而利拉魯肽可以對(duì)抗肝細(xì)胞凋亡。2 GLP-1受體激動(dòng)劑利拉魯肽可減輕肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,改善肝細(xì)胞功能。3 GLP-1受體激動(dòng)劑利拉魯肽可能通過(guò)下調(diào)GRP78、ATF6核蛋白的表達(dá)減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài),進(jìn)而使caspase-12的表達(dá)減少抑制肝細(xì)胞凋亡,對(duì)非酒精性脂肪肝起到治療作用。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪肝細(xì)胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 GRP78 ATF6 caspase12 利拉魯肽
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-30
• 附表30-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述 GLP-1及其類似物在NAFLD治療中作用的進(jìn)展38-48
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 致謝48-49
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳瀟迪;王軍;熊吉;牟歌;陶林;王斌;陳東風(fēng);;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡途徑在大鼠酒精性脂肪性肝病中的變化及意義[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2013年03期

2 張勇;江隆昌;胡文君;胡青鋼;鄭啟昌;;TNF-α對(duì)人肝細(xì)胞Mfn2基因表達(dá)的調(diào)節(jié)及對(duì)線粒體形態(tài)功能的影響[J];世界華人消化雜志;2010年32期

3 曾民德;;非酒精性脂肪性肝病研究的關(guān)切點(diǎn)[J];肝臟;2009年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 高芳;GLP-1受體激動(dòng)劑對(duì)糖耐量減低大鼠β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：1062571