本文關鍵詞：乳酸桿菌在肝臟炎癥和肝細胞肝癌中的作用

  更多相關文章： 益生菌 急性肝損傷 T細胞 TNF-α 益生菌 嗜酸乳桿菌 肝細胞肝癌 MDSC

【摘要】：第一章乳酸桿菌Pro15在急性肝損傷中的作用及機制研究目的:實驗室早期分離出一株益生菌,我們將其命名為Pro15乳酸桿菌。益生菌在多種疾病中都起到保護作用,因此我們研究了Pro15菌株在小鼠急性肝損傷模型中的作用,并且探究其作用機制。方法:將小鼠分為Pro15菌株實驗組、鼠李糖乳桿菌GG株(Lactobacillus rhamnosus GG strain,LGG)菌株對照組和PBS對照組,在第1、3、5、7天以灌胃的方法給小鼠注射Pro15菌株、LGG菌株或PBS,在第8天采用腹腔注射50%四氯化碳溶液構建小鼠急性肝損傷模型。灌胃體積均為100 ul,菌濃度為109/100 ul。我們按5.5 ml/kg給小鼠腹腔注射四氯化碳溶液,觀察小鼠的存活情況。我們按2ml/kg給小鼠腹腔注射四氯化碳溶液,24小時后頸椎脫臼處死小鼠,檢測小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶含量,HE染色分析肝臟損傷程度,流式分析小鼠免疫細胞亞群的比例以及胞內(nèi)染色確定CD8+T、CD4+T和NK細胞表達TNF-α和IFN-γ的情況。結果:與PBS對照組相比,Pro15菌株可以減輕小鼠的急性肝臟炎癥:(1)Pro15菌株顯著延長急性肝損傷小鼠的存活時間;(2)Pro15菌株可以降低血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量;(3)Pro15菌株顯著減輕急性肝損傷小鼠的肝臟損傷。流式結果顯示Pro15菌株抑制小鼠體內(nèi)NK細胞和CD8+T細胞的活化;降低Th1細胞的比例,減少CD8+T細胞分泌干擾素γ(IFN-γ);Pro15菌株促進脾臟和肝臟內(nèi)淋巴細胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子α(TNF-α);腫瘤壞死因子受體缺失小鼠的急性肝損傷模型實驗證明Pro15菌株無法延長TNFR2缺失小鼠的存活。結論:乳酸桿菌Pro15菌株可以減輕四氯化碳誘導的急性肝損傷,其機制可能是通過抑制NK細胞和CD8+T細胞的活化以及促進TNF-α的表達并作用于TNFR2通路,從而對肝臟炎癥起保護作用。第二章乳酸桿菌Pro15在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用目的:Pro15菌株在小鼠急性肝損傷模型中起到保護作用,肝臟炎癥與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關,因此我們研究了Pro15菌株在小鼠肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及相關機制。方法:將小鼠分為Pro15實驗組、LGG菌株對照組和PBS對照組,在第1、3、5、7天以灌胃的方法給小鼠注射Pro15菌株、鼠李糖乳桿菌株(LGG)或PBS,在第8天給小鼠注射hepa1-6肝癌細胞株建立原位肝癌模型。構建肝癌模型:取對數(shù)生長期的hepa1-6細胞株用PBS制成單細胞懸液(4×107/ml),利用手術的方法,用胰島素注射器吸25μl細胞懸液緩慢的注射入暴露的肝臟中,再將小鼠傷口縫合。2周后處死小鼠,測量并計算小鼠腫瘤體積。流式染色分析荷瘤鼠脾臟和肝臟中免疫細胞表型;胞內(nèi)染色檢測荷瘤鼠脾臟和肝臟中淋巴細胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-17A的水平。結果:構建的原位肝癌模型表明Pro15菌株對肝細胞肝癌的發(fā)展具有促進作用。流式染色結果表明Pro15菌株會增加脾臟中髓系來源的抑制性細胞(myeloid derived suppressor cells,MDSC)的比例和細胞總數(shù)。結論:Pro15菌株可以促進肝細胞肝癌的發(fā)生發(fā)展,其機制可能是通過增加MDSC數(shù)量來促進腫瘤的生長。
【關鍵詞】：益生菌 急性肝損傷 T細胞 TNF-α 益生菌 嗜酸乳桿菌 肝細胞肝癌 MDSC
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R575
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 第一章 乳酸桿菌Pro15在急性肝損傷中的作用及機制研究14-43
• 1 引言14-16
• 2 材料與方法16-29
• 2.1 實驗材料16-19
• 2.2 實驗方法19-29
• 3 實驗結果29-40
• 3.1 Pro15菌株延長急性肝損傷小鼠的生存時間。29
• 3.2 Pro15菌株減輕急性肝損傷小鼠的肝臟損傷。29-31
• 3.3 Pro15菌株抑制CD8+ T細胞激活。31-32
• 3.4 Pro15菌株抑制NK細胞激活。32
• 3.5 體外共培養(yǎng)Pro15菌株抑制T細胞的激活。32-33
• 3.6 Pro15菌株上調(diào)腫瘤壞死因子(TNF)α的表達。33-34
• 3.7 CBA檢測急性肝損傷小鼠血清中細胞因子水平。34-35
• 3.8 ELISA檢測肝臟表達TNF-α水平。35-36
• 3.9 抗小鼠TNF-α恢復Pro15菌株對T細胞激活的抑制。36-37
• 3.10 Realtime PCR檢測Toll樣受體表達。37
• 3.11 PCR鑒定TNF受體敲基因小鼠。37-38
• 3.12 流式鑒定TNF受體敲基因小鼠。38-39
• 3.13 TNFR2缺失加劇小鼠急性肝損傷相關死亡。39-40
• 4 討論40-43
• 第二章 乳酸桿菌Pro15在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究43-55
• 1 引言43-44
• 2 材料與方法44-50
• 2.1 實驗材料44-47
• 2.2 實驗方法47-50
• 3 實驗結果50-54
• 3.1 Pro15菌株促進肝細胞肝癌的生長。50-51
• 3.2 Pro15菌株增加MDSC比例。51-52
• 3.3 Pro15菌株促進CD4+ T和CD8+ T細胞激活。52
• 3.4 Pro15菌株不影響CD8+ T和CD4+ T細胞細胞因子表達。52-53
• 3.5 Pro15菌株降低腸道緊密連接蛋白表達。53-54
• 4 討論54-55
• 參考文獻55-62
• 綜述 益生菌在宿主健康中的作用62-75
• 參考文獻67-75
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文75-77
• 附錄77-78
• 致謝78-80

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本文編號：1058390