本文關(guān)鍵詞：黑根霉胞外多糖對MNNG致小鼠慢性萎縮性胃炎的抑制作用

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【摘要】：慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis, CAG)是一種常見的消化系統(tǒng)疾病,該病癥嚴(yán)重影響患者的消化功能。CAG的發(fā)生伴隨腸上皮化生和異型性增生,此二者在臨床上是胃癌癌前病變的重要指標(biāo)。目前臨床上治療CAG的藥物只能消除胃黏膜病變部位的炎癥和緩解疼痛,多數(shù)治療藥物存在藥物依賴和損傷其它器官等不良反應(yīng)。因此,尋找治療效果顯著、毒副作用小且能提高機(jī)體免疫能力的藥物具有重要意義。真菌多糖具有抗氧化、抗炎癥、提高機(jī)體免疫能力等活性。黑根霉(Rhizopus nigricans)是一種接合菌類絲狀真菌,在液體發(fā)酵過程中可產(chǎn)生大量胞外多糖。在前期研究中,本課題組從黑根霉發(fā)酵液中分離出粗多糖EPS,在體外可抑制人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞及人白血病K562細(xì)胞的增殖。EPS可以通過線粒體途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞凋亡。EPS也能夠抑制S180荷瘤小鼠的腫瘤生長,提高小鼠免疫能力,延長S180荷瘤小鼠的存活時(shí)間。本研究通過建立CAG小鼠模型,研究EPS對由1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(MNNG)誘導(dǎo)小鼠CAG的作用。1.EPS治療給藥對MNNG誘導(dǎo)小鼠的作用,實(shí)驗(yàn)選取5周齡雄性BALB/c小鼠并隨機(jī)分為對照組、MNNG組(MNNG 66.7 mg/kg/d)和MNNG+EPS組(MNNG 66.7 mg/kg/d、EPS 75 mg/kg/d),每組5只,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行20周后測定相關(guān)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,第20周,MNNG組小鼠平均體重(28.34±0.9 g)及進(jìn)食量(168.5 g)小于對照組小鼠平均體重(34.4±1.1 g)及進(jìn)食量(189 g)；MNNG+EPS組小鼠平均體重(30.04±0.8 g)及進(jìn)食量(174 g)大于MNNG組。小鼠胃組織和肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明,對照組小鼠胃黏膜腺體完整,肝組織細(xì)胞完整、形態(tài)規(guī)則無細(xì)胞間隙；MNNG組小鼠胃腺體萎縮并伴有胃黏膜肌層增生現(xiàn)象,胃內(nèi)出現(xiàn)多處出血點(diǎn),肝組織細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,細(xì)胞間隙較大；MNNG+EPS組小鼠胃黏膜僅出現(xiàn)黏膜充血未出現(xiàn)明顯肌層增生現(xiàn)象,多數(shù)肝細(xì)胞形態(tài)完整,細(xì)胞間隙較小。小鼠免疫器官指數(shù)測定結(jié)果表明,MNNG組胸腺指數(shù)(0.59±0.002mg/g)和脾臟指數(shù)(3.49±0.02mg/g)小于對照組,該組小鼠免疫能力降低；MNNG+EPS組胸腺指數(shù)(0.68±0.002mg/g) (P0.05)和脾臟指數(shù)(3.55±0.02mg/g)均高于MNNG組。各組小鼠肝腎功能檢測結(jié)果表明,MNNG組天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase, AST)含量(163.0±13.5 U/1)低于對照組,MNNG+EPS組AST含量(183.0±40.0 U/1)高于MNNG組；血清肌酐(Serum creatinine, Cr)含量(31.4±4.67 mg/dl)和血尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)含量(11.0±0.99 mg/dl)高于對照組；MNNG+EPS組MNNG組Cr(28.8±8.41 mg/dl)和BUN (9.5±1.17 mg/dl)含量低于MNNG組。上述結(jié)果說明,EPS多糖治療給藥方式可有效抑制小鼠CAG的發(fā)生和病癥的發(fā)展。2.EPS預(yù)防給藥對MNNG誘導(dǎo)小鼠CAG的作用,實(shí)驗(yàn)選取5周齡雄性BALB/c小鼠并隨機(jī)分為對照組、MNNG組(MNNG 133 mg/kg/d)和MNNG+EPS組(MNNG 133 mg/kg/d、EPS 200 mg/kg/d),每組8只,實(shí)驗(yàn)前2周MNNG+EPS組小鼠僅飲用EPS水溶液,其他組別自由飲水,2周之后再按照上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并持續(xù)到第20周,之后測定相關(guān)指標(biāo)。小鼠體征及外觀形態(tài)觀察結(jié)果表明,對照組小鼠體型肥碩,背毛濃密有光澤,無豎毛現(xiàn)象,四肢抓握力量大；MNNG組小鼠體型瘦小,背毛稀疏存在豎毛現(xiàn)象,四肢幾乎無抓握能力；MNNG+EPS組小鼠體型適中,背毛濃密無光澤無豎毛現(xiàn)象,四肢抓握力量小。各組小鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)評定分級結(jié)果表明,對照組患中、重度CAG的小鼠比例為0/8, MNNG組患中、重度CAG的小鼠比例為5/8,MNNG+EPS組患中、重度CAG的小鼠比例為2/8。各組小鼠胃組織細(xì)胞中與CAG形成相關(guān)基因COX-2和EGF mRNA表達(dá)量差異結(jié)果表明,對照組COX-2和EGF表達(dá)量較低,MNNG組COX-2和EGF的表達(dá)量要高于對照組,MNNG+EPS組COX-2和EGF表達(dá)量低于MNNG組但高于對照組。上述結(jié)果說明,EPS多糖預(yù)防給藥方式可有效抑制小鼠CAG的發(fā)生和病癥的發(fā)展,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與治療給藥方式結(jié)果大致相同。3.磺酰羅丹明B(SRB)染色法探究EPS對MNNG處理人肝細(xì)胞的影響。利用不同劑量的EPS (0.1、0.3、0.5 mg/mL)與MNNG (0.05 mg/mL)共同孵育人肝細(xì)胞20 h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EPS能夠提高肝細(xì)胞活性,并存在EPS劑量依賴關(guān)系。不同劑量的EPS與肝細(xì)胞共同孵育不會(huì)抑制肝細(xì)胞的生長和增殖。綜上所述,EPS可以在體外保護(hù)MNNG導(dǎo)致的肝細(xì)胞損傷,能夠抑制小鼠CAG的形成,提高小鼠免疫能力,抑制MNNG對小鼠肝、腎臟器的損傷。
【關(guān)鍵詞】：黑根霉 胞外多糖 MNNG 慢性萎縮性胃炎
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R573.32
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 本文縮略詞12-13
• 1 前言13-24
• 1.1 引起慢性萎縮性胃炎發(fā)病的因素13-14
• 1.1.1 幽門螺桿菌感染13-14
• 1.1.2 膽汁反流14
• 1.1.3 高鹽和低維生素的飲食習(xí)慣14
• 1.1.4 遺傳因素14
• 1.1.5 其他因素14
• 1.2 慢性萎縮性胃炎的發(fā)病特點(diǎn)14-15
• 1.3 慢性萎縮性胃炎與胃癌的關(guān)系15-16
• 1.4 慢性萎縮性胃炎的臨床檢查方法16-17
• 1.4.1 胃鏡檢查16
• 1.4.2 常規(guī)檢查16-17
• 1.4.3 組織活檢檢查17
• 1.4.4 影像學(xué)檢查17
• 1.5 慢性萎縮性胃炎的治療方法17-18
• 1.6 建立慢性萎縮性胃炎動(dòng)物模型的常見方法18-20
• 1.6.1 幽門螺桿菌感染造模法18-19
• 1.6.2 化學(xué)制劑誘導(dǎo)造模法19
• 1.6.3 混合造模法19-20
• 1.7 以MNNG作為誘導(dǎo)物建立慢性萎縮性胃炎動(dòng)物模型的理論依據(jù)20
• 1.8 多糖治療慢性萎縮性胃炎的研究進(jìn)展20-21
• 1.9 真菌多糖的研究前景及挑戰(zhàn)21-22
• 1.10 黑根霉胞外多糖的研究進(jìn)展22-23
• 1.11 本實(shí)驗(yàn)課題研究的意義23-24
• 2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器24-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)方法26-34
• 3.1 黑根霉胞外多糖提取及純化26
• 3.2 黑根霉胞外多糖含量測定26-27
• 3.3 溶液的配制27
• 3.4 治療給藥實(shí)驗(yàn)27-28
• 3.5 預(yù)防給藥實(shí)驗(yàn)28
• 3.6 小鼠體重及進(jìn)食量變化28
• 3.7 小鼠臟器指數(shù)測定28
• 3.8 小鼠胃組織及肝組織病理學(xué)分析28-30
• 3.8.1 小鼠胃黏膜形態(tài)病理分析28-29
• 3.8.2 HE染色法對小鼠胃、肝組織進(jìn)行病理分析29-30
• 3.9 小鼠肝腎功能分析30
• 3.10 半定量PCR檢測各組小鼠胃組織細(xì)胞中COX-2和EGF基因的mRNA表達(dá)水平30-32
• 3.10.1 總RNA的提取30-31
• 3.10.2 cDNA的合成31
• 3.10.3 引物設(shè)計(jì)31
• 3.10.4 PCR反應(yīng)31-32
• 3.10.5 瓊脂糖凝膠電泳32
• 3.11 小鼠外觀狀態(tài)與體征變化32
• 3.12 小鼠體溫測定32
• 3.13 小鼠胃組織病理學(xué)評定32-33
• 3.14 磺酰羅丹明B染色法檢測EPS及EPS和MNNG對人肝細(xì)胞的影響33
• 3.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理33-34
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析34-50
• 4.1 黑根霉胞外多糖治療給藥對MNNG誘導(dǎo)慢性萎縮性胃炎的抑制作用34-42
• 4.1.1 黑根霉胞外多糖含量測定結(jié)果34
• 4.1.2 小鼠體重及進(jìn)食量變化統(tǒng)計(jì)結(jié)果34-36
• 4.1.3 小鼠胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)測定結(jié)果36
• 4.1.4 小鼠胃黏膜形態(tài)變化分析36-37
• 4.1.5 小鼠胃組織及肝組織病理學(xué)分析37-40
• 4.1.6 小鼠血清中AST、Cr及BUN測定結(jié)果40-41
• 4.1.7 小鼠胃組織COX-2和EGF基因的mRNA表達(dá)水平41-42
• 4.2 黑根霉胞外多糖預(yù)防給藥對MNNG誘導(dǎo)慢性萎縮性胃炎的抑制作用42-48
• 4.2.1 小鼠外觀狀態(tài)及體征變化結(jié)果分析42-43
• 4.2.2 小鼠體溫測定結(jié)果43-44
• 4.2.3 小鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)分級評定結(jié)果44-45
• 4.2.4 小鼠胃組織及肝組織病理學(xué)分析45-47
• 4.2.5 小鼠胃組織COX-2和EGF基因mRNA表達(dá)水平47-48
• 4.3 EPS對由MNNG引起人肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用48-50
• 5 討論50-54
• 5.1 黑根霉胞外多糖對慢性萎縮性胃炎的抑制作用50-52
• 5.2 推測黑根霉胞外多糖抑制慢性萎縮性胃炎形成的機(jī)制52-54
• 6 小結(jié)54-55
• 7 參考文獻(xiàn)55-61
• 8 致謝61-62
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表62

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1 章力勤;胃炎湯治療慢性萎縮性胃炎96例臨床體會(huì)[J];浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

2 王元浩;中藥治療慢性萎縮性胃炎[J];湖北中醫(yī)雜志;2000年04期

3 姜志昂;中藥治療慢性萎縮性胃炎56例[J];實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2000年04期

4 邢萍;中藥治療慢性萎縮性胃炎60例[J];中國中醫(yī)藥科技;2000年06期

5 楊俊,孔炳耀;慢性萎縮性胃炎的中醫(yī)藥診治綜述[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2000年05期

6 郭常亮,王永春,李瑞林;胃夫康治療慢性萎縮性胃炎126例[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2000年08期

7 唐付才;中醫(yī)藥診治慢性萎縮性胃炎研究進(jìn)展[J];安徽中醫(yī)臨床雜志;2001年01期

8 梅天一,周福海;自制胃萎復(fù)膠丸治療慢性萎縮性胃炎29例[J];安徽中醫(yī)臨床雜志;2001年01期

9 金東明,季幸姝,孫樹權(quán),齊忠志,王彩霞;近五年慢性萎縮性胃炎的中醫(yī)臨床及實(shí)驗(yàn)進(jìn)展特點(diǎn)[J];中醫(yī)藥學(xué)報(bào);2001年06期

10 劉恩松;胃復(fù)散治療慢性萎縮性胃炎68例[J];河北中醫(yī);2002年03期

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1 喬樵;夏飛;;周亨德老中醫(yī)談慢性萎縮性胃炎[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十九次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2007年

2 黃明河;蔡錦蓮;;萎胃Ⅰ號治療慢性萎縮性胃炎及胃癌前病變135例觀察[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十八次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2006年

3 孟勝喜;;慢性萎縮性胃炎治療之我見[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二十二屆全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)暨2010年脾胃病診療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

4 王亮;;唐志鵬治療慢性萎縮性胃炎經(jīng)驗(yàn)[A];第二十次全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨消化疾病診治進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2008年

5 梁國英;李明;;謝晶日教授舌鏡互參治療慢性萎縮性胃炎的經(jīng)驗(yàn)體會(huì)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第二十四次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2012年

6 王常松;;從虛郁毒瘀治療慢性萎縮性胃炎探析[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)診斷專業(yè)委員會(huì)2009’年會(huì)論文集[C];2009年

7 劉啟泉;杜艷茹;劉曉輝;;慢性萎縮性胃炎治療中常見的問題及對策[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十九次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2007年

8 李佃貴;孟憲鑫;李剛;;慢性萎縮性胃炎證治經(jīng)驗(yàn)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第二十次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2008年

9 李佃貴;婁瑩瑩;史純純;崔建從;俞芹;;慢性萎縮性胃炎癌前病變臨床經(jīng)驗(yàn)[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第二十次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2008年

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1 ;胃寧和絡(luò)湯治療慢性萎縮性胃炎總有效率達(dá)93.1%[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

2 馮瑤 德寧;中醫(yī)可防止慢性萎縮性胃炎“變壞”[N];新華日報(bào);2006年

3 大兵;慢性萎縮性胃炎患者的自我保護(hù)[N];中國石油報(bào);2002年

4 王振嶺 周文平 范俊利;中藥可有效治療慢性萎縮性胃炎癌前病變[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

5 南昌市第一醫(yī)院消化科 副主任醫(yī)師 熊鋒寶;正確對待慢性萎縮性胃炎[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

6 ;治慢性萎縮性胃炎方[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2004年

7 石磊;治療慢性萎縮性胃炎藥對[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

8 ;胃靈湯治療慢性萎縮性胃炎[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

9 文羊;慢性萎縮性胃炎患者的飲食調(diào)節(jié)[N];中國消費(fèi)者報(bào);2000年

10 南京中醫(yī)藥大學(xué) 劉舟 張衛(wèi)華 駱殊;孟景春:慢性萎縮性胃炎三治[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 阮氏秋河;胃炎Ⅰ號對慢性萎縮性胃炎癌前病變的干預(yù)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

2 郭紅梅;曾斌芳學(xué)術(shù)思想與臨床經(jīng)驗(yàn)及扶正消萎湯治療脾胃虛弱型慢性萎縮性胃炎臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 郭琳;慢性萎縮性胃炎證治規(guī)律的探討[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

4 魏玉霞;慢性萎縮性胃炎近10年中醫(yī)文獻(xiàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

5 梅惠文;單兆偉教授治療慢性萎縮性胃炎的學(xué)術(shù)思想與臨床經(jīng)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

6 陳國忠;周德麗教授治療慢性萎縮性胃炎學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

7 韋玉娜;胃炎Ⅰ號對慢性萎縮性胃炎的治療作用及其實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

8 張倫;萎胃湯治療慢性萎縮性胃炎的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 杜琳;單兆偉教授慢性萎縮性胃炎證治經(jīng)驗(yàn)輯要[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

10 鐘e，

本文編號：1038472