本文關(guān)鍵詞：胰島素樣生長因子1對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞作用和機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的視網(wǎng)膜病變引起的視網(wǎng)膜新生血管由于與正常的血管在結(jié)構(gòu)、生長位置、功能上均有不同,不僅不能為周圍組織有效地供氧,而且由于通透性等改變可破壞正常的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu),影響人的視覺功能。探索視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)病機(jī)制,尋找有效的干預(yù)方法是目前眼科學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是一種活性蛋白多肽物質(zhì),因其結(jié)構(gòu)與胰島素類似而得名,在促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂與分化成熟,及創(chuàng)傷愈合等方面發(fā)揮重要作用。以往有研究認(rèn)為IGF-1通過與其受體IGF-1R結(jié)合后激活細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)信號通路發(fā)揮促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用,從而影響腫瘤的生長及疾病預(yù)后。而關(guān)于IGF-1在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生和發(fā)展過程中的作用方面的研究報(bào)道較少。為探討IGF-1分子在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生發(fā)展過程中的作用及可能的機(jī)制,本研究通過含不同濃度IGF-1蛋白的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(human retinal vascular endothelial cells,HRECs),觀察不同濃度的IGF-1蛋白對HRECs遷移、凋亡及管腔形成能力的影響,并探討其對HRECs體外生物學(xué)作用的具體作用機(jī)制,以期對視網(wǎng)膜新生血管性疾病的發(fā)病機(jī)制以及為臨床研發(fā)新型治療靶點(diǎn)藥物提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。材料和方法1.體外常規(guī)培養(yǎng)HRECs細(xì)胞系,取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測HRECs中IGF-1受體(IGF-1R)基因的表達(dá)情況。2.以濃度分別為10、200 ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs,應(yīng)用細(xì)胞劃痕法檢測不同濃度IGF-1對HRECs細(xì)胞遷移的影響。3.以濃度分別為500、1000ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測IGF-1對HRECs細(xì)胞凋亡的影響。4.以濃度分別為10、100、200 ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs,應(yīng)用Matrigel體外三維成型法檢測IGF-1對HRECs細(xì)胞管腔形成能力的影響。5.以500、1000ng/ml的IGF-1培養(yǎng)液干預(yù)HRECs,應(yīng)用Realtime-PCR法檢測HRECs中血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果1.HRECs細(xì)胞中存在IGF-1R的基因表達(dá)。2.細(xì)胞劃痕法檢測結(jié)果顯示,干預(yù)24 h后,200 ng/ml干預(yù)組(F=0.023,P=0.021)HRECs遷移的距離明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示,1000 ng/ml干預(yù)組(F=4.243,P=0.046)HRECs凋亡比例較對照組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.Matrigel體外三維成型法檢測結(jié)果顯示,干預(yù)12 h后,200 ng/ml干預(yù)組(F=0.26,P=0.048)細(xì)胞完整管腔形成的數(shù)量明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.Realtime-PCR檢測結(jié)果顯示,經(jīng)IGF-1干預(yù)后,1000 ng/ml干預(yù)組HRECs中PDGF-BB(F=5.457,t=-3.489,P=0.025)基因表達(dá)水平顯著提高,Caspase-3(F=1.093,t=7.287,P=0.002)基因表達(dá)水平顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.IGF-1能促進(jìn)HRECs遷移、管腔形成能力,并抑制HRECs的凋亡。2.其機(jī)制可能與促進(jìn)PDGF-BB基因表達(dá)、抑制Caspase-3基因的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：IGF-1 視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 新生血管 遷移 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-13
• 參考文獻(xiàn)12-13
• 第一部分 人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞IGF-1R的表達(dá)13-22
• 實(shí)驗(yàn)材料與儀器13-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 結(jié)果18
• 討論18-19
• 結(jié)論19-20
• 附圖20
• 參考文獻(xiàn)20-22
• 第二部分 IGF-1 對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、凋亡和管腔形成能力的影響及機(jī)制22-35
• 第一章 IGF-1 對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、凋亡和管腔形成能力的影響22-30
• 實(shí)驗(yàn)材料與儀器22-23
• 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 結(jié)果24-25
• 討論25-26
• 結(jié)論26-27
• 附圖27-29
• 參考文獻(xiàn)29-30
• 第二章 IGF-1 對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞影響機(jī)制的探討30-35
• 實(shí)驗(yàn)材料與儀器30-31
• 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 結(jié)果32
• 討論32-33
• 結(jié)論33
• 附圖33-34
• 參考文獻(xiàn)34-35
• 全文總結(jié)35-36
• 綜述36-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 英文縮略詞表45-46
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文46-47
• 本研究所獲的基金資助47-48
• 致謝48-49

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本文編號：464326