本文關(guān)鍵詞：攜帶綠色熒光報(bào)告基因EBV-LMP2A真核表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建攜帶綠色熒光基因的真核表達(dá)載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并轉(zhuǎn)染至鼻咽癌CNE2細(xì)胞。方法從EB病毒陽(yáng)性的狨猴淋巴瘤細(xì)胞B95-8中克隆EB病毒編碼的EBV潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1載體,雙酶切及測(cè)序鑒定重組的真核表達(dá)載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將重組的真核表達(dá)載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A轉(zhuǎn)染至鼻咽癌CNE2細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組),同時(shí)另設(shè)轉(zhuǎn)染p IRES2-Zs-Green1載體的陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組。利用質(zhì)粒所攜帶的綠色熒光蛋白表達(dá)計(jì)算細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,RT-PCR檢測(cè)目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果雙酶切及測(cè)序鑒定證實(shí)真核表達(dá)載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A構(gòu)建成功,熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組細(xì)胞均發(fā)出綠色熒光,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞轉(zhuǎn)染率約為75%;RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中有目的基因LMP2A表達(dá),但陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組均未檢測(cè)到目的基因表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細(xì)胞,目的基因LMP2A可在轉(zhuǎn)染的鼻咽癌CNE2細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 鼻咽腫瘤 EBV潛伏膜蛋白A 序列克隆 pIRES-Zs-Green載體 pIRES-Zs-Green-LMPA真核表達(dá)載體 基因轉(zhuǎn)染 基因表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260405) 廣西區(qū)域性高發(fā)腫瘤早期防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金項(xiàng)目(GK2013-A-02-02)
【分類號(hào)】：R739.63
【正文快照】： EB病毒(epstein-barr virus,EBV)是一種線性、雙鏈DNA病毒。EB病毒感染的惡性腫瘤與潛在的感染形式有關(guān),其編碼的潛在蛋白可間接引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化。潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)是一種由EB病毒編碼的致瘤蛋白,可在感染的潛伏細(xì)胞表面形成一個(gè)貼片,亦可在細(xì)胞核

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