本文關鍵詞：攜帶綠色熒光報告基因EBV-LMP2A真核表達載體構建及轉染鼻咽癌細胞，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構建攜帶綠色熒光基因的真核表達載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A,并轉染至鼻咽癌CNE2細胞。方法從EB病毒陽性的狨猴淋巴瘤細胞B95-8中克隆EB病毒編碼的EBV潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)序列,并定向克隆入p IRES2-Zs-Green1載體,雙酶切及測序鑒定重組的真核表達載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A;通過脂質體轉染將重組的真核表達載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A轉染至鼻咽癌CNE2細胞(實驗組),同時另設轉染p IRES2-Zs-Green1載體的陰性對照組及未轉染的空白對照組。利用質粒所攜帶的綠色熒光蛋白表達計算細胞轉染效率,RT-PCR檢測目的基因LMP2A在鼻咽癌CNE2細胞中的表達。結果雙酶切及測序鑒定證實真核表達載體p IRES2-Zs-Green1-LMP2A構建成功,熒光顯微鏡下發(fā)現實驗組和陰性對照組細胞均發(fā)出綠色熒光,實驗組細胞轉染率約為75%;RT-PCR檢測發(fā)現實驗組細胞中有目的基因LMP2A表達,但陰性對照組和空白對照組均未檢測到目的基因表達。結論成功構建了p IRES2-Zs-Green1-LMP2A真核表達載體并轉染鼻咽癌CNE2細胞,目的基因LMP2A可在轉染的鼻咽癌CNE2細胞中穩(wěn)定表達。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學生物化學與分子生物學教研室;廣西醫(yī)科大學醫(yī)學科學實驗中心;
【關鍵詞】： 鼻咽腫瘤 EBV潛伏膜蛋白A 序列克隆 pIRES-Zs-Green載體 pIRES-Zs-Green-LMPA真核表達載體 基因轉染 基因表達
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81260405) 廣西區(qū)域性高發(fā)腫瘤早期防治研究重點實驗室基金項目(GK2013-A-02-02)
【分類號】：R739.63
【正文快照】： EB病毒(epstein-barr virus,EBV)是一種線性、雙鏈DNA病毒。EB病毒感染的惡性腫瘤與潛在的感染形式有關,其編碼的潛在蛋白可間接引起細胞轉化。潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)是一種由EB病毒編碼的致瘤蛋白,可在感染的潛伏細胞表面形成一個貼片,亦可在細胞核

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