本文關(guān)鍵詞：靶向PDGFR-α的RNA干擾對體外視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究靶向PDGFR-α的RNA干擾對體外人視網(wǎng)膜色素上皮(hRPE)細(xì)胞增殖和凋亡的影響,為臨床治療增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)提供實驗依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮(hRPE)細(xì)胞,利用陽離子脂質(zhì)體(Lipofectammine TM2000)將化學(xué)合成的PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染入hRPE細(xì)胞,倒置光學(xué)顯微鏡下觀察hRPE細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,按照轉(zhuǎn)染物的不同分為4組,即空白對照組;陰性對照(NC-shRNA)組;1.0μg/ml PDGFR-αshRNA組;2.0μg/ml PDGFR-αshRNA組。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細(xì)胞24h、48h、72h后,MTT法檢測RPE細(xì)胞增殖的變化,并計算抑制率;PDGFR-αshRNA作用h RPE細(xì)胞48h后,RT-PCR法檢測hRPE細(xì)胞中PDGFR-αmRNA的表達(dá)變化,應(yīng)用Western blot和免疫組化技術(shù)檢測PDGFR-α的蛋白表達(dá)水平;Hoechst33258熒光染色分析細(xì)胞的凋亡情況;流式細(xì)胞儀檢測PDGFR-αshRNA對hRPE細(xì)胞周期和凋亡的影響。結(jié)果:PDGFR-αshRNA轉(zhuǎn)染hRPE細(xì)胞48h后,實驗組細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞皺縮,間隙增寬,貼壁不牢及大量死亡細(xì)胞漂浮等現(xiàn)象,與低濃度用藥組相比,高濃度用藥組細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞皺縮,核碎裂,死亡細(xì)胞漂浮現(xiàn)象更明顯。PDGFR-αshRNA作用于hRPE細(xì)胞24-72h,hRPE細(xì)胞的增殖受到抑制,且抑制作用隨濃度的升高和時間的延長而增強(qiáng),轉(zhuǎn)染后24、48、72h,實驗組細(xì)胞抑制率分別為(9.4±0.03;20.9±0.02;32%±0.01)%、(14.9±0.15;31.3±0.01;51.7±0.01)%與空白對照組(0;0;0)%和NC-shRNA組(1.7±0.04;2.6±0.02;2.4±0.01)%相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。PDGFR-αshRNA作用hRPE細(xì)胞48h后,PDGFR-α基因的mRNA和蛋白表達(dá)與對照組相比明顯下調(diào),并隨藥物濃度的升高而增強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);PDGFR-αshRNA作用hRPE細(xì)胞48h后,熒光染色結(jié)果顯示:實驗組細(xì)胞出現(xiàn)核致密濃染、核分裂等細(xì)胞調(diào)亡的形態(tài)學(xué)改變與對照組相比明顯增多,流式細(xì)胞儀對細(xì)胞凋亡的檢測結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細(xì)胞凋亡率與對照組相比明顯升高,實驗組細(xì)胞凋亡率分別為:(37.2±1.73)%、(51.8±1.41)%,與對照組(11.5±0.95)%和NC-shRNA組(13.8±1.61)%相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),流式細(xì)胞儀對細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示PDGFR-αshRNA作用下細(xì)胞被阻滯于G1期,實驗組G1期細(xì)胞百分率分別為:(64.44±1.13)%,(75.99±0.84)%,與空白對照組(54.11±1.13)%和NC-shRNA組(55.53±1.81)%相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.PDGFR-αshRNA能抑制hRPE細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并將細(xì)胞阻滯于G1期。2.PDGFR-αshRNA可能通過沉默hRPE細(xì)胞中PDGFR-α基因的表達(dá)來發(fā)揮其防治PVR的作用。
【關(guān)鍵詞】：PDGFR-α RNA干擾 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 增殖 增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 符號說明10-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-26
• 2 結(jié)果26-32
• 3 討論32-38
• 4 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-59
• 致謝59-60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 熊蕾;權(quán)顏龍;鄭玉萍;張利敏;張璐琰;熊全臣;;血小板源性生長因子受體α在兔增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變中的作用(英文)[J];國際眼科雜志;2008年01期

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3 司艷芳;王君;關(guān)娟;韓泉洪;惠延年;;α-平滑肌肌動蛋白在PVR增生膜中的表達(dá)以及PDGF對其在人RPE細(xì)胞中表達(dá)的影響[J];眼科新進(jìn)展;2012年11期

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本文編號：446878