發(fā)布時(shí)間：2025-01-05 20:24

　　 背景:Wnt信號(hào)通路在干細(xì)胞的調(diào)控中發(fā)揮重要作用,但是其對(duì)于角膜緣干細(xì)胞的調(diào)控作用尚不十分明確。目的:探討Wnt信號(hào)通路對(duì)角膜緣干細(xì)胞的調(diào)控作用及其在角膜緣干細(xì)胞缺乏癥治療中的療效。方法:大鼠角膜緣組織中依次加入Dispase和Trypsin/EDTA進(jìn)行消化,將消化后的角膜緣干細(xì)胞懸液接種于3D-Matrigel微環(huán)境中培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)體系中加入Wnt信號(hào)通路激活劑氯化鋰(500μmol/L),對(duì)照組不加氯化鋰,培養(yǎng)第7天q RT-PCR檢測(cè)角膜緣干細(xì)胞中p63α、CK12、CEBPδ和Ki67的表達(dá),免疫熒光染色檢測(cè)角膜緣干細(xì)胞中β-catenin的表達(dá)。采用堿燒傷法建立大鼠角膜緣干細(xì)胞缺乏模型,治療組大鼠結(jié)膜下注射激活了Wnt信號(hào)通路的角膜緣干細(xì)胞,對(duì)照組大鼠結(jié)膜下注射等量PBS,隨后每天使用裂隙燈觀察,治療后第4天取角膜緣組織進(jìn)行免疫熒光染色、蘇木精-伊紅染色。結(jié)果與結(jié)論:①角膜緣干細(xì)胞在3D-Matrigel培養(yǎng)微環(huán)境中呈球形聚集生長(zhǎng),對(duì)照組角膜緣干細(xì)胞中β-catenin呈陰性,實(shí)驗(yàn)組角膜緣干細(xì)胞中β-catenin在細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)聚集;②q RT-PCR結(jié)果顯示:對(duì)照組...

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【文章目錄】：
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文題釋義：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設(shè)計(jì)
    1.2 時(shí)間及地點(diǎn)
    1.3 材料
        1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.1 細(xì)胞分離及培養(yǎng)
        1.4.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)p63α、CK12、Ki-67和CEBPδ基因表達(dá)
        1.4.3 免疫熒光染色檢測(cè)Wnt信號(hào)通路
        1.4.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        1.4.5 角膜緣干細(xì)胞缺乏癥動(dòng)物模型的建立及治療
        1.4.6 蘇木精-伊紅染色觀察角膜緣干細(xì)胞缺乏模型大鼠角膜上皮形態(tài)
        1.4.7 石蠟切片免疫熒光染色檢測(cè)角膜組織中Wnt信號(hào)通路狀態(tài)
    1.5 主要觀察指標(biāo)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果Results
    2.1 大鼠角膜緣干細(xì)胞在3D-Matrigel培養(yǎng)體系中的形態(tài)以及角膜緣干細(xì)胞中β-catenin的表達(dá)
    2.2 Wnt信號(hào)通路激活對(duì)于角膜緣干細(xì)胞干性及增殖能力的影響
    2.3 治療組與對(duì)照組角膜緣干細(xì)胞缺乏癥大鼠角膜修復(fù)情況以及形態(tài)學(xué)變化
    2.4治療組與對(duì)照組角膜緣干細(xì)胞缺乏癥大鼠角膜組織中β-catenin的表達(dá)
3 討論Discussion



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