背景:Wnt信號通路在干細胞的調控中發(fā)揮重要作用,但是其對于角膜緣干細胞的調控作用尚不十分明確。目的:探討Wnt信號通路對角膜緣干細胞的調控作用及其在角膜緣干細胞缺乏癥治療中的療效。方法:大鼠角膜緣組織中依次加入Dispase和Trypsin/EDTA進行消化,將消化后的角膜緣干細胞懸液接種于3D-Matrigel微環(huán)境中培養(yǎng),實驗組培養(yǎng)體系中加入Wnt信號通路激活劑氯化鋰(500μmol/L),對照組不加氯化鋰,培養(yǎng)第7天q RT-PCR檢測角膜緣干細胞中p63α、CK12、CEBPδ和Ki67的表達,免疫熒光染色檢測角膜緣干細胞中β-catenin的表達。采用堿燒傷法建立大鼠角膜緣干細胞缺乏模型,治療組大鼠結膜下注射激活了Wnt信號通路的角膜緣干細胞,對照組大鼠結膜下注射等量PBS,隨后每天使用裂隙燈觀察,治療后第4天取角膜緣組織進行免疫熒光染色、蘇木精-伊紅染色。結果與結論:①角膜緣干細胞在3D-Matrigel培養(yǎng)微環(huán)境中呈球形聚集生長,對照組角膜緣干細胞中β-catenin呈陰性,實驗組角膜緣干細胞中β-catenin在細胞漿和細胞核內聚集;②q RT-PCR結果顯示:對照組...

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文題釋義：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設計
    1.2 時間及地點
    1.3 材料
        1.3.1 實驗動物
        1.3.2 實驗試劑及儀器
    1.4 實驗方法
        1.4.1 細胞分離及培養(yǎng)
        1.4.2 實時定量PCR檢測p63α、CK12、Ki-67和CEBPδ基因表達
        1.4.3 免疫熒光染色檢測Wnt信號通路
        1.4.4 克隆形成實驗
        1.4.5 角膜緣干細胞缺乏癥動物模型的建立及治療
        1.4.6 蘇木精-伊紅染色觀察角膜緣干細胞缺乏模型大鼠角膜上皮形態(tài)
        1.4.7 石蠟切片免疫熒光染色檢測角膜組織中Wnt信號通路狀態(tài)
    1.5 主要觀察指標
    1.6 統(tǒng)計學分析
2 結果Results
    2.1 大鼠角膜緣干細胞在3D-Matrigel培養(yǎng)體系中的形態(tài)以及角膜緣干細胞中β-catenin的表達
    2.2 Wnt信號通路激活對于角膜緣干細胞干性及增殖能力的影響
    2.3 治療組與對照組角膜緣干細胞缺乏癥大鼠角膜修復情況以及形態(tài)學變化
    2.4治療組與對照組角膜緣干細胞缺乏癥大鼠角膜組織中β-catenin的表達
3 討論Discussion



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