目的:體外分選小鼠脾臟ILC2細(xì)胞,探討miR-155對ILC2分泌Th2型炎癥因子的影響及其機(jī)制。方法:1、將6-8周BALB/c野生型雌性小鼠斷頸處死后,無菌操作臺內(nèi)取出體內(nèi)脾臟,再加入淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行研磨,隨后置于離心機(jī)離心,最后吸出中間的淋巴細(xì)胞白膜層,獲得脾臟單個核細(xì)胞。2、BALB/c野生型小鼠脾臟單個核細(xì)胞再通過免疫磁珠富集和流式細(xì)胞術(shù)分選出目的細(xì)胞ILC2進(jìn)行原代培養(yǎng),再加入細(xì)胞因子IL-33和IL-7進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)十天左右,顯微鏡觀察是否有增殖。3、擴(kuò)增后的ILC2除去細(xì)胞培養(yǎng)基后,加入新的培養(yǎng)基重新懸浮于培養(yǎng)瓶中,之后將收集到的ILC2隨機(jī)分成四組。每組細(xì)胞分別進(jìn)行轉(zhuǎn)染miR-155agomir、agomir NC(miR-155 agomir對照物)、miR-155 antagomir和antagomir NC(miR-155 agomir對照物)后進(jìn)行后續(xù)實驗。qPCR檢測各組細(xì)胞中miR-155、c-maf的mRNA表達(dá)情況。Western Blot檢測各組細(xì)胞中c-maf蛋白表達(dá)情況。ELISA檢測各組細(xì)胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13細(xì)胞...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 主要實驗設(shè)備
        2.1.3 主要溶液配制
        2.1.4 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠脾臟單個核細(xì)胞分離
        2.2.2 ILC2 免疫磁珠富集
        2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)染色和分選
        2.2.4 ILC2 的原代培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.2.5 實驗分組
        2.2.6 qPCR檢測細(xì)胞中miR-155和c-maf mRNA的水平
        2.2.7 Western Blot檢測細(xì)胞中cmaf的表達(dá)
        2.2.8 ELISA檢測各組細(xì)胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13 的水平
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 直接流式分選和經(jīng)磁珠富集后再流式分選對比
    3.2 經(jīng)過磁珠富集后的細(xì)胞進(jìn)行流式抗體染色并分選
    3.3 ILC2 的培養(yǎng)和擴(kuò)增
    3.4 各個分組細(xì)胞中miR-155的mRNA表達(dá)變化
    3.5 各個分組細(xì)胞中c-maf的 mRNA表達(dá)變化
    3.6 各個分組細(xì)胞中c-maf的蛋白表達(dá)變化
    3.7 ELISA檢測各個分組細(xì)胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13 的蛋白水平
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3778235